常雪艷,馮致

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，甘肅蘭州 730070）

小口棗黑斑病病原分離鑒定
——鏈格孢屬的初步研究

常雪艷,馮致

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)院，甘肅蘭州 730070）

2012年從景泰縣采集小口棗黑斑病病果樣品，分別在PDA培養(yǎng)基、棗汁培養(yǎng)基、肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上對(duì)病原菌進(jìn)行分離、純化，統(tǒng)計(jì)和計(jì)算分離頻率，觀察菌落形態(tài)特征，共分離出三種菌：菌1，菌2，菌3。通過(guò)菌落形態(tài)、孢子形態(tài)的觀察，鑒定出菌3為半知菌亞門鏈格孢屬的Alternariatenuis。進(jìn)而測(cè)定菌3在PDA、肉質(zhì)胨、棗汁培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率，以及菌3在不同培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量，從而得出菌3最適宜在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，同樣在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大。

小口棗；黑斑病；分離鑒定；鏈格孢屬。

棗樹(shù)，在我國(guó)分布很廣，東北南部至華南，西南，西北，新疆均有，而以黃河中下游，華北平原栽培最普遍。棗樹(shù)是我國(guó)最具代表性的民族果樹(shù)之一，特別是在山，沙，堿，旱，貧地區(qū)農(nóng)民脫貧和財(cái)政自立中占有重要地位。棗樹(shù)全身是寶，棗樹(shù)的葉，吊，皮，木分別含有維生素，鞣革物質(zhì)，單寧及棗酸和鐵，鋅等微量元素。加工制品有消炎活血的作用，具有獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，棗果實(shí)為核果，富含維生素C，可生食，又可制蜜餞，果脯和釀酒，果入藥能補(bǔ)脾胃，潤(rùn)心肺，益氣養(yǎng)顏。棗樹(shù)以其適應(yīng)性強(qiáng)，果實(shí)成熟早，產(chǎn)量高，易管理，生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益顯著等優(yōu)點(diǎn)，在我國(guó)農(nóng)業(yè)中占重要地位。

小口棗黑斑病主要危害果實(shí)。發(fā)病時(shí)間一般為果實(shí)成熟采收前期，發(fā)病部位為果頂部最易發(fā)病,果柄處不易發(fā)病，發(fā)病初期棗果顏色深黑色小圓斑，邊緣清晰，病組織呈硬海綿狀壞死,無(wú)味。發(fā)病后期病部果皮完好，變硬，呈黑紅色，有光澤，內(nèi)部癥狀病果內(nèi)初淺粉紅色，后期病部果肉變?nèi)夥凵〔抗饨M致呈圓形,易剝離，發(fā)病中期黑斑逐漸變大，并向縱深擴(kuò)展。

2012年從景泰縣采集小口棗黑斑病病果樣品，對(duì)其進(jìn)行病原菌的分離，純化，對(duì)分離出的病原進(jìn)行分離頻率的計(jì)算，并通過(guò)菌落形態(tài)的觀察，孢子形態(tài)的觀察對(duì)菌3進(jìn)行鑒定。同時(shí)，對(duì)其中在不同培養(yǎng)基上測(cè)定菌3的生長(zhǎng)速率及產(chǎn)孢量。

一、結(jié)果與分析

（一）菌種分離頻率的計(jì)算

表1 在PDA培養(yǎng)基上不同保存方式下不同發(fā)病部位四種菌的分離頻率(%)

表2 在肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上不同保存方式下不同發(fā)病部位四種菌的分離頻率(%)

由表1，表2，表3可知：常（30%～40%）的病果在三種培養(yǎng)基上都分離出了菌1，菌2，菌3，且菌1的分離頻率最高，而冰箱里保存的病果，在PDA培養(yǎng)基上沒(méi)有分離出菌1，只分離出了菌2和菌3，肉質(zhì)胨培養(yǎng)基和棗汁培養(yǎng)基上，三種菌都出現(xiàn)了，且菌3的分離頻率最高；常（80%～90%）在棗汁培養(yǎng)基和肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上青霉的分離頻率達(dá)到了100%，在PDA上也達(dá)到87.5%，而冰箱里面和常（30%～40%）保存的棗青霉的分離頻率不到10%；從冰箱里保存的棗分離出的致病菌來(lái)看，病表的分離出的菌的分離頻率大于病肉部位的。

表3 在棗汁培養(yǎng)基上不同保存方式下不同發(fā)病部位四種菌的分離頻率(%)

（二）鏈格孢鑒定結(jié)果

1.鏈格孢菌落形態(tài)。菌落圓形或近圓形，初期有明顯的兩次紋論，邊緣整齊，初期灰白色，然后轉(zhuǎn)黑色或灰黑色，在培養(yǎng)基上平鋪，菌落絨毛狀，致密。

分生孢子褐色或褐黑色，形狀變化較大，卵圓形，不規(guī)則形，既有橫膈膜，也有縱隔膜，2～7個(gè)鏈生，倒棍棒形，有喙，喙長(zhǎng)度不超過(guò)分生孢子的1/3，圓柱形或圓錐形。

分生孢子梗單生，直立或稍彎曲，一般不分枝直立或稍彎曲，淡褐色。

經(jīng)鑒定，認(rèn)為該菌為半知菌亞門鏈格孢屬(Alternaria.sp)真菌。

2.菌3在不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率的測(cè)定。由圖1可知：該菌在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率最快，棗汁培養(yǎng)基上次之，在肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率最慢；120 h時(shí)，在PDA培養(yǎng)基上菌落直徑達(dá)到75 mm,長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿，棗汁上為70 mm，而在肉汁胨培養(yǎng)基上菌落直徑為62 mm。

圖1 菌3在不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)速率的測(cè)定

3.菌3產(chǎn)孢量的測(cè)定。鏈格孢培養(yǎng)120 h后，由圖2可知：在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大，每視野可觀察到52個(gè)孢子，棗汁培養(yǎng)基產(chǎn)孢量次之，肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最小，每視野36個(gè)。

圖2 鏈格孢產(chǎn)孢量的測(cè)定

二、結(jié)論

通過(guò)對(duì)從景泰縣采集的小口棗的病原菌進(jìn)行分離和鑒定，共分離出四種菌，菌1，菌2，菌3還有曲霉；通過(guò)分離頻率的計(jì)算，得到菌3的分離頻率最高，其次為菌2，再次為菌1；對(duì)病棗不同部位進(jìn)行分離時(shí)，菌在表皮部位的分離頻率要高于果肉部分的，可知病原菌大多存在發(fā)病部位的表皮部分；對(duì)菌3的菌落形態(tài)及孢子形態(tài)的觀察，根據(jù)《真菌鑒定手冊(cè)》鑒定菌3為半知菌亞門交鏈孢屬（Alternariasp）真菌。通過(guò)對(duì)菌3鏈格孢菌的生長(zhǎng)速率的測(cè)定，測(cè)得鏈格孢在PDA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率最快，在肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最慢，棗汁培養(yǎng)基上生長(zhǎng)適中；通過(guò)產(chǎn)孢量的測(cè)定，測(cè)得鏈格孢在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最大。

通過(guò)對(duì)從景泰縣采集的小口棗的病原菌進(jìn)行分離和鑒定，共分離出四種菌，菌1，菌2，菌3還有青霉，其中菌1為聚端孢屬粉紅聚端孢酶（Trichotheciumroseum）,菌2為根霉屬匍枝根霉[R.stolonifer(Ehrenb.exFr.）Lind]，通過(guò)對(duì)菌3的菌落形態(tài)的觀察，通過(guò)顯微鏡對(duì)菌3的孢子形態(tài)的觀察，再通過(guò)與真菌鑒定手冊(cè)的對(duì)照初步最終鑒定結(jié)果確定菌3為半知菌亞門鏈格孢屬（Alternariatenuis）。從不同材料中分離得到，冰箱里保存的棗分離出鏈格孢的分離頻率最高；從常（80%～90%）在各個(gè)棗汁培養(yǎng)基和肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上分離出青霉的分離頻率都為為100%，可知青霉的腐生性特別強(qiáng)；通過(guò)對(duì)鏈格孢屬的生長(zhǎng)速率的測(cè)定，得到鏈格孢屬在PDA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速率最快，在肉質(zhì)胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最慢，棗汁培養(yǎng)基上生長(zhǎng)適中；通過(guò)產(chǎn)孢量的測(cè)定，得到鏈格孢屬在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最多。

（編輯：劉國(guó)華）

S665.1

B

1673-9019(2016)19-0057-02

2016-06-22

常雪艷（1990-），甘肅靜寧人，主要從事農(nóng)藝學(xué)研究。