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        補(bǔ)腎疏肝方對神經(jīng)性厭食大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)控機(jī)制研究*

        2016-02-26 02:19:16胡文曉

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        補(bǔ)腎疏肝方對神經(jīng)性厭食大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)控機(jī)制研究*

        胡文曉

        (泰安市婦幼保健院,山東泰安271000)

        摘要:目的探討補(bǔ)腎疏肝方對神經(jīng)性厭食(anorexia nervosa, AN)應(yīng)激模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis, HPOA)的調(diào)控機(jī)制。方法按照隔離、限食、束縛的方法建立AN大鼠應(yīng)激模型,設(shè)立正常對照組(以下簡稱正常組)、模型組、安慰劑組和補(bǔ)腎疏肝方組(以下簡稱中藥組),測定下丘腦多巴胺(dopamine, DA)、去甲腎上腺素(noradrenaline, NE)和5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)。結(jié)果下丘腦DA水平:安慰劑組明顯高于正常組(P<0.05),模型組高于正常組,中藥組低于安慰劑組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下丘腦NE水平:正常組明顯高于模型組和安慰劑組(P<0.05),中藥組高于模型組和安慰劑組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下丘腦5-HT水平:各組之間無明顯差異。結(jié)論補(bǔ)腎疏肝方可以調(diào)控AN應(yīng)激模型大鼠的HPOA功能,可能是通過調(diào)控下丘腦DA、NE水平來實(shí)現(xiàn)的。

        關(guān)鍵詞:補(bǔ)腎疏肝方;神經(jīng)性厭食;應(yīng)激模型;下丘腦-垂體-卵巢軸

        神經(jīng)性厭食(anorexia nervosa, AN)是嚴(yán)重威脅女性青少年身心健康且伴有內(nèi)分泌異常的心身疾病。常由于特殊的精神心理變態(tài)而導(dǎo)致進(jìn)食量減少,進(jìn)而造成嚴(yán)重的營養(yǎng)不良、體重減輕及下丘腦-垂體-卵巢軸(hypothalamus-pituitary-ovarian axis, HPOA)功能紊亂[1-2]。AN在治療方面尚無理想的方法,補(bǔ)腎疏肝方臨床治療AN患者有較好的療效。本研究應(yīng)用AN大鼠應(yīng)激模型,從神經(jīng)內(nèi)分泌方面探討其可能的作用機(jī)制。

        1 材料和方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動物 第一批:雌性Wistar大鼠50只,體重約160~180 g。由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號為SYXK(滬)2007-0003。動物飼養(yǎng)于12h/12h晝夜交替、室溫(22±2)℃的環(huán)境中,自由攝食和飲水。在實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)1周后,進(jìn)行陰道脫落細(xì)胞涂片篩選,有連續(xù)兩個(gè)以上正常動情周期的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。其余則被淘汰。第二批:實(shí)驗(yàn)動物同第一批。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物中藥補(bǔ)腎疏肝方:由郁金、石菖蒲、枸杞子、桑椹、牡丹皮、炒山梔等組成,第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院中藥房提供;自制成濃度相當(dāng)于生藥2.63 g/ml的溶液。

        1.3 AN大鼠應(yīng)激模型的制作 參考Shimizu N[3]的方法。

        1.3.1 隔離和限食實(shí)驗(yàn)大鼠放在各自的籠子里相互隔離,17:30將飼料和水移除,20:00再給予飼料和水。7天后開始計(jì)算大鼠每天的飲食重量,20:00給予提前稱重的飲食,次日17:30移除飲食同時(shí)稱重,計(jì)算出飲食重量,待飲食重量固定不變后進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

        1.3.2 束縛Shimizu N采用“固定板”束縛,即用細(xì)繩、膠帶將大鼠束縛在固定板上,實(shí)驗(yàn)操作中發(fā)現(xiàn)這種束縛方式的實(shí)施非常困難,難以保證大鼠每日束縛2個(gè)小時(shí)的實(shí)驗(yàn)要求。調(diào)整束縛方式,將大鼠裝入自制固定器中,每日17:30~19:30持續(xù)束縛2個(gè)小時(shí)。(自制固定器為一自制塑料瓶,大小切合大鼠身體,以大鼠被束縛不能移動為度,前后有通氣孔,避免大鼠因窒息死亡。)

        1.4 動物分組與給藥方法 第一批:實(shí)驗(yàn)大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行隨機(jī)分組,分為正常對照組(以下簡稱正常組)、模型組、安慰劑組和補(bǔ)腎疏肝方組(以下簡稱中藥組),每組10只。藥物劑量換算按照動物與人體表面積比換算法:人用藥劑量(mg/kg)=0.16×大鼠用藥劑量(mg/kg),換算相應(yīng)劑量。從實(shí)驗(yàn)造模第一天開始,正常組按10 ml/kg體重灌服生理鹽水,不予其它處理;模型組按上述造模方法建立AN應(yīng)激模型,不予灌胃;安慰劑組在造模的同時(shí)按10 ml/kg體重灌服生理鹽水;中藥組在造模的同時(shí)按10 ml/kg體重灌服補(bǔ)腎疏肝方水煎濃縮劑。每日早、晚各1次,持續(xù)整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。實(shí)驗(yàn)過程中,正常組大鼠意外死亡1只,安慰劑組和中藥組因灌胃各死亡1只。第二批:動物分組和給藥同第一批,中藥組因灌胃死亡1只。

        1.5標(biāo)本采集 約灌胃第35天時(shí)、于動情間期進(jìn)行標(biāo)本采集。下丘腦采集:在冰臺上迅速取出下丘腦,放入液氮固化,濾紙拭干后稱重,放入玻璃勻漿管,用預(yù)冷的0.106 mol/L高氯酸1 ml勻漿2 min,靜置2 h,4℃ 4000 r/min離心30 min 2次,取上清液,置于-80℃低溫冰箱中保存待測。

        1.6 指標(biāo)測定用酶聯(lián)免疫法測定下丘腦多巴胺(dopamine, DA)、去甲腎上腺素(noradrenaline, NE)和5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)。下丘腦DA、NE和5-HT試劑盒由上海端納生物科技有限公司提供。

        2 結(jié)果

        各組大鼠下丘腦DA、NE和5-HT水平 下丘腦DA水平:安慰劑組明顯高于正常組(P<0.05),模型組高于正常組,中藥組低于安慰劑組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下丘腦NE水平:正常組明顯高于模型組和安慰劑組(P<0.05),中藥組高于模型組和安慰劑組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下丘腦5-HT水平:各組之間無明顯差異。見表1。

        組別例數(shù)DA(ng/L)NE(ng/L)5-HT(μg/L)A組92.770±0.2142.513±0.4082.877±0.268B組92.917±0.1791.554±0.311△3.190±0.177C組93.268±0.078△1.549±0.191△3.132±0.371D組83.010±0.1652.400±0.3063.200±0.388

        注:與A組比較,△P<0.05。A組:正常組,B組:模型組,C組:安慰劑組,D組:中藥組。

        3 討論

        中醫(yī)古代文獻(xiàn)中沒有“神經(jīng)性厭食”的病名,現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)研究也未見中醫(yī)中藥對該病的相關(guān)研究報(bào)道。根據(jù)AN患者的臨床表現(xiàn),可以歸屬于“閉經(jīng)”、“虛勞”等范疇。中醫(yī)理論認(rèn)為,肝氣郁結(jié)、疏泄失常是導(dǎo)致AN發(fā)生的主要因素,腎虛和肝郁是本病的核心病機(jī)。在此理論指導(dǎo)下創(chuàng)立的補(bǔ)腎疏肝方,臨床應(yīng)用取得了較好療效。本課題應(yīng)用AN的大鼠應(yīng)激模型來探討補(bǔ)腎疏肝方對HPOA的調(diào)控機(jī)制。

        文獻(xiàn)報(bào)道AN應(yīng)激動物模型的下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)(如DA、NE、5-HT)水平發(fā)生變化,但其變化的機(jī)制尚不明確,甚至不同應(yīng)激模型的變化趨勢也不一樣[4]。

        我們的研究結(jié)果表明,模型組大鼠的下丘腦DA和5-HT高于正常組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;下丘腦NE明顯低于正常大鼠。由此可見,補(bǔ)腎疏肝方可以調(diào)控AN應(yīng)激模型大鼠的HPOA功能,可能是通過調(diào)控下丘腦DA、NE水平來實(shí)現(xiàn)的,具體有待于大樣本證實(shí)。目前中醫(yī)藥治療AN的相關(guān)研究國內(nèi)外尚屬空白,本課題初步探討了補(bǔ)腎疏肝方對AN的HPOA可能的調(diào)控機(jī)制,其調(diào)控途徑還有待于深入研究。

        參考文獻(xiàn):

        [1]趙朋,毛富強(qiáng),李振濤.神經(jīng)性厭食癥的臨床特點(diǎn)及精神科干預(yù)對策[J].國際中華神經(jīng)精神醫(yī)學(xué)雜志, 2005, 6(3):208.

        [2]呂朝暉,竇京濤,陸菊明.神經(jīng)性厭食患者內(nèi)分泌功能的改變[J]. 臨床內(nèi)科雜志, 2002, 19(6): 449-450.

        [3]Shimizu N, Oomura Y, Kai Y. Stress-induced anorexia in rats mediated by serotonergic mechanisms in the hypothalamus[J]. Physiol Behav, 1989, 46(5), 835-841.

        [4]Siegfried Z, Berry EM, Hao S, et al. Animal models in the investigation of anorexia[J]. Physiol Behav, 2003, 79(1): 39-45.

        收稿日期(2015-10-08)

        doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2016.01.024

        中圖分類號:R741.02

        文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B

        文章編號:1004-7115(2016)01-0065-02

        作者簡介:*胡文曉(1986-),女,山東寧陽人,主治醫(yī)師,碩士研究生,主要從事中醫(yī)婦科臨床工作。

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