吳照宇

MicroRNA在惡性胸腹膜腔積液中的表達(dá)及診斷意義

吳照宇

作者單位：810001 青海大學(xué)附屬醫(yī)院介入科現(xiàn)教學(xué)科研部

【摘要】目的探討MicroRNA分子在惡性胸腹膜腔積液中的表達(dá)，為惡性腫瘤的判斷和治療提供指導(dǎo)。方法隨機(jī)選擇60例胸腹腔積液標(biāo)本，根據(jù)病理學(xué)結(jié)果分為4組，分別為良性胸腔積液組(A組)、惡性胸腔積液組(B組)、良性腹水組(C組)和惡性腹水組(D組)，每組各15例標(biāo)本，采用熒光定量RT-PCR法監(jiān)測MicroRNA在良、惡性胸腹膜積液中的表達(dá)。結(jié)果A組15例標(biāo)本中MicroRNA表達(dá)均為陰性，B組13例陽性(86.7%)，C組1例陽性(6.7%)，D組14例陽性(93.3%)。結(jié)論MicroRNA在惡性胸腹膜腔積液中具有較高的表達(dá)水平，MicroRNA有望作為分子標(biāo)志物用于惡性腫瘤的診斷。

【關(guān)鍵詞】MicroRNA；惡性胸腹膜腔積液；分子標(biāo)志物

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:033～034)

惡性胸腹膜腔積液主要包括惡性胸腔積液和腹腔積液，是多種惡性腫瘤晚期一種常見的并發(fā)癥。目前臨床上確診惡性胸腹膜腔積液主要依靠細(xì)胞學(xué)檢測，但細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確率只有50%~70%，約5%~10% 的惡性胸腔積液未發(fā)現(xiàn)明顯的病灶[1-2]。MicroRNA又稱微小RNA，是一類普遍存在于細(xì)胞中的非編碼小分子RNA，它可以抑制mRNA的翻譯或降解mRNA，發(fā)揮對蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用[3]。近年來人們不斷探索發(fā)現(xiàn)，MicroRNA作為一種小分子在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，而且它具有很好的組織特異性，可作為惡性腫瘤診斷的分子標(biāo)志物[4-5]。本文通過采用熒光定量RT-PCR方法檢測我院60例胸腹腔積液標(biāo)本中MicroRNA的表達(dá)水平，探索這類小分子與惡性腫瘤間的關(guān)系，為腫瘤的盡早診斷奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1　對象

隨機(jī)選擇于2011年3月至2012年3月在我院治療的60例患者的胸腹膜腔積液標(biāo)本，根據(jù)病理學(xué)檢查結(jié)果，分為30例良性胸腹膜腔積液標(biāo)本和30例惡性胸腹膜腔積液標(biāo)本。30例良性標(biāo)本包括5例肺結(jié)核，11例充血性心力衰竭，8例肺栓塞，5例肝硬化和1例慢性腎炎，男性17例，女性13例，年齡為18~58歲，平均年齡為(41.7±2.3)歲；30例惡性標(biāo)本包括14例肺癌，7例乳腺癌，6例胃癌，2例淋巴瘤和1例卵巢癌，男性15例，女性15例，年齡為21~62歲，平均年齡為(42.6±1.9)歲。

1.2　方法

60例胸腹腔積液標(biāo)本，根據(jù)病理學(xué)結(jié)果分為4組，分別為良性胸腔積液組(A組)、惡性胸腔積液組(B組)、良性腹水組(C組)和惡性腹水組(D組)，每組各15例標(biāo)本，采用熒光定量RT-PCR法檢測MicroRNA在良、惡性胸腹膜積液中的表達(dá)。

1.3　熒光定量RT-PCR法

4組患者分別采用常規(guī)方法行胸腔穿刺或腹部穿刺抽取胸腔或腹腔積液100 mL，按照既定方法提取RNA后在-70 ℃環(huán)境中保存，經(jīng)紫外分光光度計(jì)分析和變性瓊脂糖凝膠電泳法確定RNA質(zhì)量。向反應(yīng)體系中加入1 μg RNA，1μg dNTP，補(bǔ)充焦碳酸二乙酯、水至10 μl，70 ℃孵化3 min后加入逆轉(zhuǎn)錄酶1 μl，37 ℃反應(yīng)60 min，即得cDNA溶液，于-80 ℃保存?zhèn)溆?。使用Real-time PCR儀分析該基因序列的表達(dá)，所用試劑為TagMan MicroRNAAssay試劑盒，U6作為內(nèi)參。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1　MicroRNA在A組和B組標(biāo)本中的表達(dá)

A組和B組標(biāo)本均為胸腔積液，熒光定量RT-PCR法 結(jié)果顯示，A組15例良性胸腔積液標(biāo)本中MicroRNA表達(dá)均呈陰性，陽性表達(dá)率為0，B組15例惡性胸腔積液標(biāo)本中有13例為陽性，表達(dá)率為86.7%，兩組標(biāo)本的表達(dá)率具有顯著性差異，P<0.05,兩組標(biāo)本的男女比例、平均年齡無顯著性差異。B組Micro RNA表達(dá)為陽性的樣本中，7例肺癌，4例乳腺癌和2例淋巴瘤，兩組患者基本信息及病歷資料對比見表1。

表1　A組和B組樣本對比

2.2　MicroRNA在C組和D組標(biāo)本中的表達(dá)

C組和D組標(biāo)本均為腹腔積液，在C組15例良性標(biāo)本中，只有1例MicroRNA為陽性，表達(dá)率為6.7%，為肝硬化患者;D組有14例為陽性，表達(dá)率為93.3%，包括7例肺癌，3例乳腺癌和4例胃癌，兩組標(biāo)本中MicroRNA表達(dá)率有顯著性差異，P<0.05，見表2。

表2　C組和D組標(biāo)本對比

3　討論

臨床上引起胸腹膜腔積液的因素是多方面的，例如非惡性疾病中的感染(肺結(jié)核)、心衰、肝硬化等，這一類疾病引起的胸腔、腹腔積液多是良性的，還有一些是由惡性惡性腫瘤引起的，例如肺癌、淋巴瘤、肝癌、消化道癌癥等，這一類積液多屬于惡性胸腹膜腔積液[3-6]。目前臨床上診斷良性和惡性胸膜腔積液的手段主要包括影像學(xué)檢查(如X線平片、CT、B超等)和細(xì)胞學(xué)檢查，近幾年來一些腫瘤標(biāo)志物分子不斷被人們發(fā)現(xiàn)和研究，例如胸液癌胚抗原CEA、乳酸脫氫酶LDH等[7]，以及新興的檢查方法，例如端粒酶檢測[8]、DNA倍體分析等也被證實(shí)可以輔助診斷良性、惡性胸腹膜腔積液，但仍處于基礎(chǔ)研究階段。

本文通過比較15例良性和15例惡性胸腔積液標(biāo)本以及15例良性和15例惡性腹腔積液標(biāo)本的MicroRNA表達(dá)率，證實(shí)胸腹腔積液的性質(zhì)與MicroRNA表達(dá)率有極強(qiáng)的相關(guān)性，為MicroRNA指導(dǎo)下個(gè)性化腔內(nèi)藥物治療奠定理論基礎(chǔ)。良性胸腹膜腔積液的MicroRNA平均表達(dá)率為3.3%，而惡性的表達(dá)率為90%，因此MicroRNA的表達(dá)對于診斷良性、惡性胸腹膜腔積液具有較高的特異性和敏感性[9-10]。

另一方面，本文也證實(shí)了MicroRNA表達(dá)與惡性腫瘤之間的相關(guān)性，B組標(biāo)本的MicroRNA表達(dá)率為86.7%，13例標(biāo)本分別為7例肺癌病例，4例乳腺癌病例和2例淋巴瘤病例，D組標(biāo)本的表達(dá)率為表達(dá)率為93.3%，包括7例肺癌病例，3例乳腺癌病例和4例胃癌病例。近年來關(guān)于MicroRNA與癌癥相關(guān)的研究不斷開展，絕大多數(shù)的研究都認(rèn)為[11]，MicroRNA對于惡性腫瘤的診斷具有極高的特異性和敏感性。

MicroRNA對于胸腹膜腔積液性質(zhì)的判斷和惡性腫瘤早期的診斷具有極好的特異性，尤其是后者的意義非同一般，盡早的確診意味著及時(shí)的治療，這正是臨床診斷迫切需要的分子標(biāo)志物。

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(編輯：甘艷)

Expression and Diagnostic Significance of MicroRNA in Malignant Pleural Effusion

WUZhaoyu.AffiliatedHospitalofQinghaiUniversity,Xining,810001.

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of MicroRNA in malignant pleural effusion,and provide guidance for the judgment and treatment of malignancy.Methods60 cases of abdominal effusion specimens were randomly divided into 4 groups according to the pathological results,benign pleural effusion group (group A),malignant pleural effusion (group B),benign ascites group (group C) and malignant ascites (group D),15 specimens in each group,and the expression of MicroRNA in benign and malignant pleural effusion were monitored using fluorescence quantitative RT-PCR.ResultsThe expression of MicroRNA in group A were all negative,13 cases positive (86.7%) in group B,1 case positive (6.7%) in group C,14 cases positive (93.3%) in group D.ConclusionThe expression of MicroRNA expression is higher in malignant pleural effusions,and MicroRNA is expected as a molecular marker for the diagnosis of malignancy.

【Key words】MicroRNA；Malignant pleural effusion；Molecular marker

中圖分類號：R730.43

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)01-0033-02

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.010

基金項(xiàng)目：青海省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)衛(wèi)生計(jì)生科研指導(dǎo)性計(jì)劃課題

收稿日期(2015-02-09修回日期 2015-07-10)