田沁濤 黑悅 伊西才 魏禮洲 王博晨 劉衛(wèi)平
·臨床研究·
RET的表達(dá)與生長激素型垂體腺瘤患者生長激素水平的相關(guān)性分析
田沁濤 黑悅 伊西才 魏禮洲 王博晨 劉衛(wèi)平
目的探討RET的表達(dá)和單純生長激素型垂體腺瘤(GH-PA)術(shù)后緩解情況、術(shù)后GH水平的相關(guān)性。方法收集并隨訪2010年4月至2013年4月收治于第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院神經(jīng)外科的單純GH-PA經(jīng)鼻蝶內(nèi)鏡手術(shù)患者20例(不緩解10例、即刻緩解6例、延遲緩解4例),監(jiān)測術(shù)前、術(shù)后1周、3個月和1年血清GH水平,并取病理標(biāo)本采用免疫組化檢測RET的表達(dá)。結(jié)果延遲緩解患者RET表達(dá)水平相比即刻緩解、不緩解患者較低 (P<0.05);RET的表達(dá)水平與GH激素水平(術(shù)前、術(shù)后3個月、術(shù)后1年)無顯著相關(guān)性(P>0.05),但與術(shù)后GH激素水平的升高(GH1年~GH1周)呈正相關(guān) (P<0.05)。結(jié)論RET表達(dá)水平一定程度上能夠預(yù)測患者的延遲緩解,且與術(shù)后GH激素水平升高正相關(guān)。
生長激素型垂體腺瘤;內(nèi)鏡;延遲緩解;遠(yuǎn)期預(yù)后
生長激素型垂體腺瘤 (growth hormone-pituitary adenoma,GH-PA)是常見的功能性垂體腺瘤(20%左右),目前最為安全有效的治療方法為經(jīng)鼻蝶的垂體瘤切除術(shù)[1-3]。術(shù)后1周內(nèi)低生長激素(growth hormone,GH)(<2.5 ng/ml)和與年齡、性別相適的胰島素類生長因子(insulinlike growth factor-1,IGF-1)水平預(yù)示即刻緩解[4],而部分患者有延遲緩解癥狀,即未達(dá)到即刻緩解之標(biāo)準(zhǔn)但激素水平緩慢下降至正?!,F(xiàn)有實驗室指標(biāo)如GH、IGF-1等不足以準(zhǔn)確提示遠(yuǎn)期預(yù)后和延遲緩解,所以GH-PA的術(shù)后療效預(yù)測仍然有待深入研究[5,6]。RET是一種跨膜酪氨酸激酶受體,目前已經(jīng)證實與多種內(nèi)分泌腫瘤的轉(zhuǎn)歸和預(yù)后有密切聯(lián)系[7,8]。為有效解決對腫瘤預(yù)后的判斷,本研究收集了2010年4月至2013年4月收治于第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院神經(jīng)外科的單純20例GH-PA患者術(shù)前術(shù)后各時間點(diǎn)的血清GH水平,研究RET的表達(dá)和GH-PA術(shù)后GH水平的相關(guān)性。
一、臨床資料
患者為2010年4月至2013年4月收治于第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院的單純GH-PA,一般資料如表1所示。其中,男13例,女7例;年齡19~72歲?;颊呔哂械湫椭R床癥狀[9],臨床表現(xiàn)肢端肥大共16例,頭痛和頭暈共19例,視力下降共17例(其中單側(cè)偏盲者7例,雙側(cè)偏盲者10例),巨人癥者4例,無癥狀者1例。全體患者均為經(jīng)鼻蝶內(nèi)鏡下垂體瘤切除術(shù),術(shù)中術(shù)后MRI提示為大腺瘤(1~3 cm)且手術(shù)為全切。所有患者臨床癥狀、鞍區(qū)矢狀位和冠狀位的MRI掃描與強(qiáng)化掃描等檢查、內(nèi)分泌檢查(中國肢端肥大癥診治指南2013版[9])、口服葡萄糖耐量測試以及IGF-1水平、術(shù)后病理均符合GH-PA的診斷。
表1 本研究中患者的一般資料
二、研究方法
20例患者于術(shù)前(1周內(nèi))、術(shù)后的1周、3個月和1年抽取空腹下早晨7∶00至9∶00外周血并測定血清生長激素水平(放免法)。鞍區(qū)MRI成像判斷術(shù)前術(shù)后的腫瘤直徑和體積。術(shù)后的病理標(biāo)本取材固定后做RET免疫組化染色。大致步驟為:常規(guī)石蠟包埋,冠狀切片(厚度為2 mm)常規(guī)脫蠟至水,后pH6.0的檸檬酸修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)、0.3%H2O2溶液封閉內(nèi)源性的過氧化酶、驢血清后封閉、兔抗人RET(1∶800,Abcam,美國)抗體4℃孵育過夜、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔免疫球蛋白G二抗、二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)染色后,蘇木素復(fù)染,常規(guī)脫水透明后封片,并于光鏡下分析計數(shù)。RET表達(dá)水平用0~5等級表示:0級,陰性(<1%);1級,極少陽性 (1%<10%);2級,少量陽性 (10%<30%);3級,中等陽性(30%<50%);4級,較多陽性(50%<70%);5級,強(qiáng)陽性(>70%)。
三、統(tǒng)計學(xué)分析
一、RET表達(dá)水平和GH-PA患者術(shù)后緩解情況的關(guān)系
20例患者一般資料如表1所示,均為大腺瘤全切手術(shù)以保證預(yù)后的一致性。RET染色示例如圖1所示,GH-PA術(shù)后緩解的標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)診治指南,各組患者的年齡,性別等一般資料并無顯著性差異(P>0.05)?;颊叩男g(shù)前和術(shù)后 1周、3個月和 1年的RET染色等級與患者預(yù)后的相關(guān)性采用秩和檢驗,結(jié)果顯示RET的表達(dá)水平在GH-PA手術(shù)患者不同預(yù)后組別中有顯著性差異(H=6.524,P<0.05),進(jìn)一步根據(jù)鄧恩多重比較發(fā)現(xiàn),延遲緩解組RET的表達(dá)水平低于即刻緩解組(P<0.05)和未緩解組(P<0.05),其他兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。
二、RET表達(dá)和GH-PA患者GH水平的相關(guān)性分析
RET的表達(dá)等級和術(shù)前、術(shù)后1周、3個月、1年的血清GH水平以及術(shù)后GH水平波動 (1年~1周)的相關(guān)性散點(diǎn)圖見圖2。全部A~D中,X軸為RET表達(dá)等級(0~5),Y軸為各個時間點(diǎn)的血清GH水平。根據(jù)Spearman相關(guān)性分析,RET的表達(dá)水平和術(shù)前、術(shù)后1周和1年的GH水平均沒有顯著相關(guān)性 (分別為 r=0.020,P>0.05;r=0.078,P>0.05;r= 0.420,P>0.05),但是和血清GH水平的變動(術(shù)后1周~1年)正相關(guān),r=0.709,P=0.007<0.01,表明 RET的表達(dá)水平越高,GH-PA患者術(shù)后的GH水平可能緩慢上調(diào)。
圖1 RET免疫組化染色示例(標(biāo)尺所示為50 μm)
表2 患者術(shù)前術(shù)后各時間點(diǎn)生長激素水平變化(ng/ml)和相應(yīng)的RET表達(dá)水平(0~5)
圖2 RET表達(dá)水平(等級)和血清生長激素(ng/ml)變化的散點(diǎn)圖與相關(guān)性
生長激素型垂體腺瘤多為良性,但對患者的發(fā)育、生育以學(xué)習(xí)工作能力均產(chǎn)生不良影響[1,9]。內(nèi)分泌激素水平的檢測對GH-PA的術(shù)后療效判斷有重要作用[2,4,10]。雖然經(jīng)蝶骨的內(nèi)鏡手術(shù)對其控制率近年來明顯提升[11],但術(shù)后仍有10%~40%的患者GH處于持續(xù)高水平狀態(tài),且年齡、實驗室檢查指標(biāo)(GH、IGF-1等)無法準(zhǔn)確判斷延遲預(yù)后的發(fā)生來指導(dǎo)臨床二次治療[1,12]。
RET作為一種酶受體,定位于細(xì)胞膜,選擇性表達(dá)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及腎臟[7,13]。正常情況下,RET在被 RET配體膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glialcellline-derived neurotrophic factor,GDNF)激活后,介導(dǎo)RAS/ERK.PI3K/AKT,p38MAPK和Rac/JNK信號通路,與細(xì)胞的生存,分化和遷移密切相關(guān)[14,15]。然而RET基因重排和調(diào)控方式的改變可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[13,16]。目前已經(jīng)證實與甲狀腺癌、多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤等內(nèi)分泌腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后相關(guān)[17],而RET在垂體腺瘤中的作用尚不明確。近來有研究顯示促生長激素細(xì)胞通過RET介導(dǎo)的凋亡/生存途徑控制GH分泌:RET和GDNF表達(dá)于GH-PA中,缺乏GDNF的環(huán)境下RET可以介導(dǎo)RET/Pit1/p14ARF/ p53相關(guān)促生長激素細(xì)胞凋亡通路[14],并進(jìn)一步在離體PA組織和GH-PA細(xì)胞等環(huán)境下證明了此觀點(diǎn)。本研究結(jié)果顯示GH-PA患者腫瘤標(biāo)本RET的表達(dá)水平與術(shù)后延遲緩解、GH水平波動呈明顯相關(guān)性:(1)延遲緩解病例的RET表達(dá)水平低于緩解和未緩解者;(2)RET的表達(dá)水平和術(shù)后GH升高(1年~1周)呈正相關(guān)。
其他因素包括:(1)腫瘤體積、質(zhì)地和侵襲性;(2)術(shù)前GH、IGF-1的水平;(3)手術(shù)切除垂體瘤的體積以及有無剩余等等亦可以影響術(shù)后療效[4,9,12]。本研究固定收集了大腺瘤(1~3 cm)病例,且患者一般資料在各組中并無顯著性差異。Schwyzer等[2]統(tǒng)計了11例GH-PA患者并發(fā)現(xiàn)手術(shù)切除腫瘤的體積與術(shù)后GH、IGF-1水平密切相關(guān),且發(fā)現(xiàn)特定腫瘤的單位體積GH產(chǎn)生量不盡相同,所以為了盡量控制變量本研究嚴(yán)格控制入組標(biāo)準(zhǔn),術(shù)中和術(shù)后的MRI等影像學(xué)資料顯示手術(shù)為全切無殘留。
總之,RET的表達(dá)水平和GH-PA患者術(shù)后激素水平變動、術(shù)后緩解的相關(guān)性。在患者術(shù)后隨訪的過程中,神經(jīng)外科醫(yī)生需建立規(guī)范科學(xué)的隨訪機(jī)制,結(jié)合病理、影像、內(nèi)分泌檢查,對相應(yīng)情況的患者及早正確治療。
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Analysis of the correlation of RET expression with growth hormone level of patients with growth hormone-secreting pituitary adenoma
Tian Qintao,Hei Yue,Yi Xicai,Wei Lizhou,Wang Bochen, Liu Weiping.Department of Neurosurgery,Xijing Hospital,Fourth Military Medical University,Xi’an 710032,China
Liu Weiping,Email:liuwp@fmmu.edu.cn
ObjectiveTo investigate the correlation of RET expression with postoperative remission and growth hormone levels of patient with growth hormone-secreting pituitary adenoma(GHPA).MethodsCollected and followed up 20 patients (no remission 10,immediate remission 6, delayed remission 4)underwent transsphenoidal endoscopic surgery for GH-PA from from april 2010 to april 2013 in Xijing Hospital,Fourth Military Medical University to measure the changes of GH levels at different time points(before surgery,1 week,3month and 1 year after surgery),and the specimen were collected for RET immunohistochemical staining.ResultsThe level of RET expression in the delayed remission ones tend to be lower than no remission and immediate remission groups(P<0.05).There is no significant relationship between RET expression and GH levels before,3 months and 1 year after surgery (P>0.05),however the GH elevation (1 year-1 week)tend to have a positive relationship with RET expression.ConclusionRET expression to some degree helps predict delayed remission,and tend to have a positive relationship with GH elevation after surgery in GH-PA patients.
Growth hormone-secreting pituitary adenoma;Endoscopes;Delayed remission; Long-term curative rate
2016-03-18)
(本文編輯:張麗)
10.3877/cma.j.issn.2095-9141.2016.04.002
陜西省科技統(tǒng)籌基金資助項目(2013KTCL03-08)
710032西安,第四軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院神經(jīng)外科
劉衛(wèi)平,Email:liuwp@fmmu.edu.cn
田沁濤,黑悅,伊西才,等.RET的表達(dá)與生長激素型垂體腺瘤患者生長激素水平的相關(guān)性分析[J/CD].中華神經(jīng)創(chuàng)傷外科電子雜志,2016,2(4):198-201.