朱淑玲

【摘要】 目的 探討淀粉樣變性腎病的染色方法及體會。方法 對15例淀粉樣變性腎病患者的活檢標本進行常規(guī)染色、剛果紅、高錳酸鉀氧化剛果紅染色后以偏振光顯微鏡觀察， 同時予以免疫熒光、免疫組化染色， 使用透視電鏡觀察， 分析淀粉樣變性腎病的染色方法及效果。結(jié)果 15例標本可見淀粉樣蛋白沉積區(qū)HE呈均質(zhì)、淡染的嗜伊紅狀， PASM染色呈毛刷樣結(jié)構(gòu)， 剛果紅染色呈磚紅色、偏振光下呈青綠色。免疫組化染色中AA染色均為陰性， κ染色顯示14例為陰性， λ染色顯示14例為陽性。電鏡下觀察有纖維狀結(jié)構(gòu)且排列紊亂。結(jié)論 對淀粉樣變性腎病需采用多種染色方法結(jié)合效果較好， 使用堿性剛果紅染色較為便利使用， 使用免疫組化染色后透視電鏡觀察有助于發(fā)現(xiàn)早期不典型病變。

【關(guān)鍵詞】 淀粉樣變性腎??；病理技術(shù)；染色方法

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.05.088

腎臟是淀粉樣變性常見的受累器官， 約占腎活檢的1.25%， 多發(fā)生于年齡在50歲以上的老年人群中。淀粉樣變性腎病是指淀粉纖維大量沉積于腎臟引起的病變， 隨著我國人口老齡化的進程不斷加快， 其發(fā)病率也呈逐年上升的趨勢[1]。而關(guān)于淀粉樣變性腎病的診斷率一直較低， 確診率低， 更需要探尋更佳的病理技術(shù)進行診斷。本文主要探討淀粉樣變性腎病的染色方法及體會， 旨在提高病理技術(shù)， 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院2012年3月～2014年12月收治的淀粉樣變性腎病患者的活檢標本共15例作為本次實驗的實驗標本。

1. 2 方法

1. 2. 1 對15例標本進行常規(guī)染色及特殊染色。①標本的常規(guī)處理。首先使用10%福爾馬林進行固定， 并給予梯度酒精脫水， 每個步驟進行30 min， 使用二甲苯透明10 min×2， 給予60℃浸蠟后進行石蠟包埋。切片厚度為5 μm， 并置于45℃水浴展開， 干燥時間為20 min。脫蠟至水。②染色配置分別為：HE、儲備液、堿性工作液、堿性剛果紅工作液、酸性高錳酸鉀溶液、5%草酸溶液。③堿性剛果紅染色方法：使用mayer氏蘇木素液進行內(nèi)染色10 min后蒸餾水洗， 給予鹽酸乙醇分化再用蒸餾水洗， 隨后放入到堿性工作液內(nèi)進行染色20 min， 再放入堿性剛果紅工作液內(nèi)20 min， 進行無水乙醇三次脫水， 二甲苯透明后固封。④酸性高錳酸鉀氧化剛果紅染色。

1. 2. 2 免疫組織化學染色。首先對標本進行常規(guī)處理， 包括對標本進行固定、以石蠟包埋、冰凍切片、脫蠟至水、抗原修復(fù)并TBS洗5 min×3。再利用3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過氧化物酶， TBS洗5 min×3。其次， 進行抗體顏色， 使用抗鼠抗人淀粉樣蛋白A、兔抗人輕鏈蛋白κ、兔抗人清點蛋白λ， 孵育1 h；TBS洗5 min×3；滴入EnVision， TBS洗5 min后加色源底物DAB。使用蒸餾水漂洗， 進行蘇木素的對比顏色， 封片， 觀察。標本使用偏振光顯微鏡觀察和透視電鏡觀察。

2 結(jié)果

2. 1 15例淀粉樣變性腎病患者的標本通過HE切片可以觀察到特殊蛋白沉淀， 出現(xiàn)腎小球的局部階段性均質(zhì)粉染， 且無結(jié)構(gòu)；部分標本小動脈壁也有特殊蛋白的沉淀。通過PAS染色顯示為紅色；Masson染色為9例淺綠色、6例粉色；PASM套染Masson染色為灰綠。堿性剛果紅染色出現(xiàn)15例陽性， 光鏡下觀察有腎小球系膜區(qū)域和毛細血管壁， 小動脈有磚紅色團塊， 使用偏振光鏡檢查為蘋果綠。使用酸性高錳酸鉀氧化處理后標本仍均為陽性。

2. 2 免疫組化染色中， AA染色均為陰性， κ染色顯示14例為陰性， λ染色顯示14例為陽性。電鏡下觀察有纖維狀結(jié)構(gòu)且排列紊亂。κ染色、λ染色陽性表現(xiàn)為小動脈壁、毛細血管壁和（或）腎小球系膜區(qū)有團塊沉淀， 直徑為9 nm左右， 且無分支。

3 討論

淀粉樣變性主要可以分為兩種， 即局灶性和系統(tǒng)性淀粉樣變性， 系統(tǒng)性淀粉樣變性主要包括血清淀粉樣物質(zhì)、免疫球蛋白輕鏈、衰老性、家族性的淀粉樣變性以及透析性的淀粉樣變性；局灶性淀粉樣變性主要包括快速性進展相關(guān)的疾?。搜挪〉龋?、帕金斯病以及局灶的免疫球蛋白輕鏈淀粉樣變性。

近年來， 隨著免疫和分子生物學的進展， 臨床上對淀粉樣變性腎病已有較為清晰的認識， 關(guān)于淀粉樣蛋白的檢驗技術(shù)日趨先進[2]。而對淀粉樣病變的生化研究也分離出17種， 其中以輕鏈蛋白最為常見， 其次為淀粉樣蛋白A。

HE染色是光鏡檢查腎標本中必備的染色方法之一， 能充分顯示腎小管上皮細胞的損傷和炎細胞浸潤程度， 還能顯示腎小球的細胞增生情況[3]。PAS染色不僅具有HE染色的功能， 同時還能很好的顯示基底膜， 辨別內(nèi)皮細胞、系膜細胞和上皮細胞， 可使檢測者了解基底膜增生情況和毛細血管塌陷情況。PASM染色能清晰的觀察到腎小球各種細胞及免疫復(fù)合物的成分和沉積情況， 并能幫助判別膜性腎病、淀粉樣腎病、膜增生性腎小球腎炎[4]。Masson染色較為繁瑣， 但染色效果較好， 可區(qū)分腎間質(zhì)水腫和腎間質(zhì)纖維化， 顯示腎小球內(nèi)沉積或聚集的IC或其他血漿蛋白成分。剛果紅主要是觀察腎淀粉樣變性腎病， 染色方法簡單[5， 6]。

在以往的臨床研究中， 免疫組化法一直較多被用于診斷AA型， 并取得較好的效果， 但在診斷AL型時可能會發(fā)生輕鏈斷裂的現(xiàn)象， 導(dǎo)致部分抗原決定簇缺失， 對抗體無任何反應(yīng)， 出現(xiàn)誤診。因此， 在檢測時可應(yīng)用多種抗體進行免疫組化染色， 將輕鏈蛋白、淀粉樣蛋白A聯(lián)合使用， 使得診斷更為準確。

而在病理染色的過程中本研究認為， 堿性剛果紅染色出15例陽性， 且沒有過多的分化步驟， 不會因為過度分化導(dǎo)致染色結(jié)果受到影響， 因此更為可靠， 加之使用偏振光顯微鏡使用， 可信度較高。但免疫組化染色使用透視電鏡觀察， 可以更好地發(fā)現(xiàn)淀粉樣纖維， 對剛果紅染色不明顯的標本可以做補充觀察。

綜上所述， 對淀粉樣變性腎病需采用多種染色方法結(jié)合效果較好， 使用堿性剛果紅染色較為便利， 使用免疫組化染色后透視光鏡觀察有助于發(fā)現(xiàn)早期不典型病變。

參考文獻

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[2] 李敏， 姚梅宏， 曾玲， 等. PASM-Masson染色法在腎穿刺活檢特殊染色中的應(yīng)用與體會.臨床與實驗病理學雜志， 2014， 30（6）：693-694.

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[收稿日期：2015-10-29]