劉群

（祁陽縣畜牧水產(chǎn)局，湖南 祁陽 426100）

魚用疫苗免疫效果評價(jià)的研究進(jìn)展

劉群

（祁陽縣畜牧水產(chǎn)局，湖南 祁陽 426100）

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的飛速發(fā)展，寄生蟲、病毒成為了影響水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的重要因素，并且威脅著人們的飲食安全。魚用疫苗作為目前控制魚類病害的主要方法，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展帶來了機(jī)遇。本文就魚用疫苗免疫效果評價(jià)的發(fā)展進(jìn)行研究，以期對控制魚類病害，促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有影響作用。

魚用疫苗；免疫效果；評價(jià)指標(biāo)

病害是影響我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的關(guān)鍵因素，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)因病害造成的經(jīng)濟(jì)損失十分巨大。疫苗免疫是控制病害發(fā)展的重要方法之一，但截至目前我國還沒有完善的評價(jià)疫苗免疫效果的體系。本文就魚用疫苗免疫效果評價(jià)的發(fā)展進(jìn)行探討，希望對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有重要意義。

1 如何判定疫苗免疫的效果

為了準(zhǔn)確判定魚苗在接受免疫之后的應(yīng)答情況，除了使用活菌病毒來檢測以外，還可以通過測定受免魚血清里的抗體等方法來判定。對于結(jié)構(gòu)較為簡單的疫苗，可以通過測定血清中被中和的抗體，準(zhǔn)確判定疫苗的免疫水平以及受免魚的防御水平。但對于一些結(jié)構(gòu)復(fù)雜、利用致病機(jī)制的細(xì)菌性疫苗來說，僅僅觀察一兩項(xiàng)檢測指標(biāo)是很難判定受免魚免疫防御水平的。這關(guān)鍵在于盡管研究者可以檢測血清中中和抗體、調(diào)理抗體的情況，但是由于受免魚在接受免疫之后應(yīng)答情況較為復(fù)雜，是多種免疫細(xì)胞及其細(xì)胞因子共同完成的生理學(xué)過程。所以，僅僅依據(jù)一兩項(xiàng)指標(biāo)是很難反映受免魚免疫應(yīng)答情況的。但是，通過對以上指標(biāo)的檢測可以判定受免魚某項(xiàng)特異性或非特異性應(yīng)答的變化程度。

2 魚用疫苗免疫效果評價(jià)指標(biāo)

2.1 特異性免疫效果評價(jià)指標(biāo)

2.1.1 血清抗體效果評價(jià)。特異性免疫主要包括由T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞分別介導(dǎo)的細(xì)胞免疫及體液免疫。因?yàn)轸~類屬于低等的脊椎動物，具有特異性免疫功能但不完善。目前，我國對魚類細(xì)胞免疫的研究還比較少，大多是通過體液免疫來評定受免魚的免疫效果。通過了解諸多研究結(jié)果可知，受免魚血清的抗體效價(jià)可以很好地反映免疫應(yīng)答的水平。受免魚接種之后，其血清抗體的效價(jià)就會明顯提高，這代表受免魚得到了較好的免疫效果。所以，經(jīng)常將血清抗體效價(jià)作為評價(jià)疫苗免疫效果的關(guān)鍵指標(biāo)。但經(jīng)過一些研究專家的深入研究發(fā)現(xiàn)，僅僅依據(jù)血清抗體效價(jià)有時(shí)也無法體現(xiàn)受免魚免疫效果。這就代表著對于一些疫苗，體液免疫產(chǎn)生的特異性抗體是無法準(zhǔn)確反映疫苗的免疫情況的，影響疫苗的免疫效果還有其他影響因子。

2.1.2 主要組織相容性復(fù)合體基因變化。主要組織相容性復(fù)合體是產(chǎn)生免疫效應(yīng)的關(guān)鍵成分，由其編碼的蛋白附著于細(xì)胞的表面位置，能夠?qū)⒖乖镔|(zhì)傳遞給T淋巴細(xì)胞。主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ將抗原傳遞給CD8和T細(xì)胞，而主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ?qū)⑼庠葱钥乖瓊鬟f給CD4和T細(xì)胞。斑馬魚在接種魯氏耶爾森菌弱毒之后，主要組織相容性復(fù)合體的Ⅰ和Ⅱ指標(biāo)會呈現(xiàn)上升的趨勢，而給斑馬魚接種愛德華氏菌弱毒以后，卻發(fā)現(xiàn)主要組織相容性復(fù)合體的Ⅰ的指標(biāo)上升，而Ⅱ的指標(biāo)下調(diào)，并且此疫苗呈現(xiàn)出較好的免疫效果。

2.2 非特異性免疫效果評價(jià)指標(biāo)

非特異性免疫系統(tǒng)是魚類抵抗外來病原體的第一道防線，通過凝集沉淀、細(xì)胞溶解、酶抑制、微生物抑制4種方法來發(fā)揮效果。魚類在接種疫苗以后，非特異性免疫就可以產(chǎn)生應(yīng)答。

2.2.1 溶菌酶活動。溶菌酶主要存在于魚類的組織細(xì)胞、黏液及血清當(dāng)中，是反映魚類非特異性免疫的一項(xiàng)重要指標(biāo)。溶菌酶經(jīng)過水解可以產(chǎn)生病菌黏多糖，以此來抵抗外來病菌的侵入，并且還對寄生蟲、真菌等有一定的抑制效果。但研究發(fā)現(xiàn)魚類體表的溶菌酶對外來病原體沒有明顯的抗菌效果，這一研究得到了Magarinos等的證實(shí)。由此可以看出，利用溶菌酶作為評價(jià)免疫魚免疫效果的重要指標(biāo)要非常慎重，因?yàn)槿芫覆皇怯绊戶~類免疫效果的唯一因素。

2.2.2 超氧化物歧化酶活性。這一活性酶廣泛存在于各種需養(yǎng)生物體中，是需養(yǎng)生物機(jī)體當(dāng)中抗氧化系統(tǒng)的重要成分，其能夠清除或抑制超養(yǎng)陰離子自由基，以避免機(jī)體遭受氧化損傷。超氧化物歧化酶的活性與生物機(jī)體當(dāng)中的免疫水平有著緊密的聯(lián)系，能夠提高巨噬細(xì)胞活性，增強(qiáng)機(jī)體的免疫水平。劉秋鳳等［1］的研究證實(shí)了這一點(diǎn)，在生物機(jī)體注入疫苗后，超氧化物歧化酶的活性會明顯提高，機(jī)體的免疫水平也會明顯增強(qiáng)，因此可以將超氧化物歧化酶的活性作為評價(jià)疫苗免疫效果的指標(biāo)之一。

2.2.3 血清抑菌活性。血清抑菌活性是由體液免疫和細(xì)胞免疫共同作用的效果，其體現(xiàn)的是對機(jī)體外來的病原體的抵御能力，同時(shí)也是衡量機(jī)體免疫水平的關(guān)鍵指標(biāo)。許增輝等［2］也證實(shí)了注入疫苗的魚體血清抑菌的活性會明顯高出未注入疫苗的魚體。由此可以看出，血清抑菌活性也是影響免疫魚免疫效果的指標(biāo)之一［3］。

2.2.4 外周血細(xì)胞的變化。因?yàn)橥庵苎?xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，研究人員可以通過測量免疫魚體中的各種外周血細(xì)胞的數(shù)量變化，來了解機(jī)體的免疫水平。接種疫苗的魚體外周血細(xì)胞的數(shù)量會明顯增加。白細(xì)胞當(dāng)中的嗜中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞是魚體當(dāng)中的主要吞噬細(xì)胞，起到防御外來病原體入侵的作用，是反映魚體非特異性免疫能力的關(guān)鍵指標(biāo)。如果在魚體中接種疫苗，那么其白細(xì)胞的吞噬活性會與接種疫苗的免疫能力呈正比例關(guān)系。另外，張波等［4］在對青魚注入嗜水氣單胞菌疫苗之后，發(fā)現(xiàn)外周血細(xì)胞中的紅細(xì)胞存在一定的吞噬能力，對免疫魚的免疫能力也有一定的影響作用。

2.2.5 測定一些免疫基因的表達(dá)量。因?yàn)轸~體在接種疫苗后其非特異性免疫的相關(guān)基因會發(fā)生一定的變化，以此來增強(qiáng)魚體的免疫水平，所以研究人員可以通過測定一些免疫基因的表達(dá)量，來評價(jià)疫苗的免疫水平。

首先是對補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4基因表達(dá)量的測定。在魚類的非特異性免疫系統(tǒng)中，補(bǔ)體系統(tǒng)占據(jù)重要地位，通過經(jīng)典、凝聚、激活3條途徑來抵御外來病原體的入侵，其中的補(bǔ)體C3是這三條途徑的匯合點(diǎn)，起著重要的樞紐作用；而補(bǔ)體C4則是凝聚與經(jīng)典途徑的起點(diǎn)，在補(bǔ)體系統(tǒng)中占據(jù)重要地位。如果補(bǔ)體C3、C4的基因表達(dá)量提高，代表著生物機(jī)體的免疫能力增強(qiáng)。

其次是測定細(xì)胞因子的基因表達(dá)量。白細(xì)胞介素1β屬于促炎癥細(xì)胞因子，是由巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞共同產(chǎn)生的，經(jīng)過研究者發(fā)現(xiàn)給魚體注入弱毒疫苗時(shí)能夠很好地激活魚體脾臟中的巨噬細(xì)胞，進(jìn)而使得提高白細(xì)胞介素1β的基因表達(dá)量。但是，當(dāng)注入沒有生物活性的疫苗時(shí)，采取浸浴的方式接種以后，無法刺激白細(xì)胞介素1β的數(shù)量上升。另外，白細(xì)胞介素8和白細(xì)胞介素10分別是CXC趨化因子和抗炎癥細(xì)胞因子，再給魚體接種疫苗后，這兩項(xiàng)指標(biāo)都會出現(xiàn)上調(diào)，從而增強(qiáng)免疫魚的免疫水平。

最后是測定其他非特異性免疫相關(guān)基因表達(dá)量，比如α趨化因子、細(xì)胞分化簇8、轉(zhuǎn)化生長因子等，這些相關(guān)基因的表達(dá)量也在一定程度上能夠反映魚體在接種疫苗后的免疫水平。但將這些影響因素作為評價(jià)免疫效果的研究試驗(yàn)還比較少，因此未完全將這樣因素作為評價(jià)免疫效果的指標(biāo)。

3 結(jié)語

隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，無公害健康養(yǎng)殖逐步占據(jù)養(yǎng)殖業(yè)主流。免疫預(yù)防是魚類病蟲控制的主要發(fā)展方向，做好研究工作，研究出副作用小的高效疫苗已是養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容。采取有效的方法來評價(jià)疫苗的免疫效果越發(fā)顯得重要。因此，不斷改進(jìn)評價(jià)疫苗免疫效果的方法，完善評價(jià)指標(biāo)，對疫苗及水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展具有良好的促進(jìn)作用。

［1］劉秋鳳.草魚呼腸孤病毒微載體培養(yǎng)技術(shù)與滅活疫苗浸泡免疫效果研究［D］．上海：上海海洋大學(xué)，2013.

［2］徐增輝，陳漢忠，陳明，等.海豚鏈球菌疫苗對羅非魚免疫功能的影響［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008（6）：413-418.

［3］梁海鷹，陳永新，簡紀(jì)常，等.溶藻弧菌鞭毛蛋自flac基因DNA疫苗對紅笛鯛的免疫保護(hù)［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2013（1）：125-131.

［4］張波，曾令兵，羅曉松，等．嗜水氣單胞菌3種疫苗免疫的青魚外周血免疫指標(biāo)的變化［J］．華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2012（1）：100-105.

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