吳 芳 王仁生 張 勇 方業(yè)穎 胡 凱

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院放療科，南寧市 530021，E-mail：96160f@163.com)

論著·臨床研究

p53凋亡刺激蛋白抑制因子表達(dá)水平與鼻咽癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系▲

吳 芳 王仁生 張 勇 方業(yè)穎 胡 凱

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院放療科，南寧市 530021，E-mail：96160f@163.com)

目的 探討p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)表達(dá)水平與鼻咽癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。方法 采用免疫組化法檢測(cè)iASPP在62例鼻咽癌患者鼻咽癌組織中的表達(dá)情況，比較不同臨床病理特征者的iASPP表達(dá)情況。結(jié)果 62例患者中iASPP陽(yáng)性表達(dá)者44例(71.0%)，陰性表達(dá)者18例(29.0%)。不同性別、年齡、病理分型、T分期和臨床分期患者的iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，而不同N分期患者的iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。N分期與iASPP陽(yáng)性表達(dá)率呈正相關(guān)(r=0.368，P=0.003)。結(jié)論 鼻咽癌患者的N分期與iASPP陽(yáng)性表達(dá)有關(guān)，iASPP的表達(dá)水平有可能成為鼻咽癌預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

鼻咽癌；p53凋亡刺激蛋白抑制因子；臨床病理特征

鼻咽癌是我國(guó)南方地區(qū)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，放射治療是鼻咽癌的主要治療手段，單純放療的5年生存率為50%～60%。隨著調(diào)強(qiáng)放療越來(lái)越廣泛地應(yīng)用于臨床，目前鼻咽癌治療失敗的主要原因是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。因此尋找影響鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物，對(duì)鼻咽癌的預(yù)后判斷及抗鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移有著非常重要的意義。p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family，iASPP)是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)重要的蛋白質(zhì)，能競(jìng)爭(zhēng)性地與p53結(jié)合，抑制p53基因誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，是p53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of p53，ASPP)家族中唯一的抑制蛋白，被認(rèn)為是一種新的癌基因。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)iASPP的研究主要針對(duì)肺癌、乳腺癌及白血病等，在鼻咽癌中尚缺乏研究。本研究應(yīng)用免疫組化的方法，檢測(cè)iASPP在鼻咽癌組織中的表達(dá)情況，探討iASPP在鼻咽癌組織中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2012年1～6月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院經(jīng)病理證實(shí)的鼻咽癌患者的鼻咽癌組織石蠟病理標(biāo)本62例。患者入組標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)病理檢查確診為鼻咽癌且尚未進(jìn)行任何放療、化療等抗癌治療者；(2)按照鼻咽癌[2009美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(American Joint Committee on Cancer，AJCC)第7版]分期[2]為Ⅰ～Ⅳb期的患者；(3)功能狀態(tài)(performance status，PS)評(píng)分[3]≤2分；(4)放療前均行全身檢查，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和其他腫瘤病史；(5)放療前血常規(guī)、肝腎功能等各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)發(fā)生任何遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者；(2)既往或目前患任何其他惡性腫瘤的患者；(3)任何其他疾病或狀況為放化療禁忌證(如感染活躍期，心肌梗死后6個(gè)月內(nèi)，癥狀性心臟病，包括不穩(wěn)定心絞痛、充血性心衰或未控制的心律失常，免疫抑制治療)；(4)妊娠、哺乳期婦女；(5)嚴(yán)重骨髓功能障礙者；(6)具有出血傾向者。共納入患者62例，男47例，女15例，年齡19～71歲，中位年齡46歲。世界衛(wèi)生組織分型[3]Ⅰ型2例、Ⅱ型3例、Ⅲ型57例。按美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì) 2009分期系統(tǒng)分期，Ⅰ期0例，Ⅱ期3例，Ⅲ期30例，Ⅳa-b期29例。T1、T2、T3、T4期分別為3、9、29、21例。N0、N1、N2、N3期分別為2、15、32、13例。

1.2 主要試劑 兔抗人iASPP多克隆抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司(批號(hào)bs-0284R)，Supervision即用型二步法檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司(批號(hào)ZKSP-10446)。

1.3 檢測(cè)方法 采用免疫組化Supervision二步法檢測(cè)鼻咽癌組織中iASPP的表達(dá)，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作：蠟塊按4 μm厚度切片，常規(guī)脫蠟水化。在pH 6.0的0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液中煮沸熱修復(fù)抗原，3% H2O2室溫孵育15 min，非免疫血清封閉40 min，加一抗4℃孵育過(guò)夜，加Supervision鼠/兔-辣根過(guò)氧化物酶廣譜檢測(cè)系統(tǒng)，室溫下孵育20 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染，梯度酒精(70%、80%、90%無(wú)水酒精)脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

1.4 陽(yáng)性結(jié)果判定 iASPP蛋白陽(yáng)性定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，以細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顯色為iASPP蛋白表達(dá)陽(yáng)性。每張病理切片通過(guò)光學(xué)顯微鏡放大400倍，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行iASPP陽(yáng)性細(xì)胞結(jié)果判定。著色強(qiáng)度的判定：不著色為0分，淡黃色為1分，褐色為2分，深棕色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比的判斷：<5%為0分，5%～25%為1分； 26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩部分的得分之和為最后的得分(0～1分為陰性，2分為弱陽(yáng)性，3～5分為陽(yáng)性，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)性)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 鼻咽癌組織中iASPP的表達(dá)情況 62例鼻咽癌組織標(biāo)本中，iASPP陽(yáng)性表達(dá)44例(71.0%)，見(jiàn)圖1，陰性表達(dá)18例(29.0%)。

圖1 鼻咽癌組織中iASPP的表達(dá)(Supervision法，×400)

2.2 iASPP表達(dá)與鼻咽癌臨床病理因素間的關(guān)系 不同性別、年齡、病理分型、T分期和臨床分期患者的iASPP陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，但不同N分期患者的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。進(jìn)一步相關(guān)性分析結(jié)果顯示，iASPP陽(yáng)性表達(dá)率和N分期呈正相關(guān)性(r=0.368，P=0.003)。

表1 iASPP表達(dá)水平與臨床病理因素間的關(guān)系(n，%)

3 討 論

iASPP是2003年發(fā)現(xiàn)的ASPP家族新成員，由PPPIRl3L基因編碼，全長(zhǎng)由828個(gè)氨基酸組成，存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。iASPP與其他兩個(gè)家族成員(ASPP1和ASPP2)在結(jié)構(gòu)上的共同特點(diǎn)是C-末端都含有SH3結(jié)構(gòu)域、錨蛋白重復(fù)序列、富含脯氨酸的結(jié)構(gòu)域。C-末端是ASPP家族的主要作用位點(diǎn)，能與p53 DNA結(jié)合區(qū)域結(jié)合從而發(fā)揮作用。但與其他兩個(gè)家族成員不同的是，iASPP能競(jìng)爭(zhēng)性地與p53結(jié)合，抑制p53基因誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，是ASPP家族中唯一的抑制蛋白，被認(rèn)為是一種新的癌基因。大量研究表明iASPP在多種惡性腫瘤中均呈現(xiàn)高表達(dá)，而在正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)。其中，Zhang等[4]發(fā)現(xiàn)iASPP基因在急性早幼粒細(xì)胞白血病和急性粒-單核細(xì)胞白血病亞型M4EO中的表達(dá)明顯高于其他急性粒細(xì)胞白血病病類(lèi)型，并且在急性白血病患者細(xì)胞中iASPP表達(dá)水平明顯高于完全緩解期患者和健康人，這提示iASPP基因可能在急性粒細(xì)胞白血病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。Liu等[5]在對(duì)109例頭頸鱗癌標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，iASPP蛋白和mRNA在頭頸鱗癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁黏膜組織。Chen等[6]發(fā)現(xiàn)iASPP在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織。在口腔鱗狀細(xì)胞癌[7]、食管癌[8]、宮頸癌[9]、乳腺癌[10]、肝癌[11]、子宮內(nèi)膜癌[12]、卵巢癌[13]等組織中，iASPP均呈高表達(dá)。這些研究結(jié)果提示iASPP的高表達(dá)可能在腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮著非常重要的作用。本研究結(jié)果也顯示，在62例鼻咽癌患者中，iASPP在大部分患者(71.0%)鼻咽癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)。

隨著對(duì)iASPP基因研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)iASPP與腫瘤的一些生物學(xué)行為密切相關(guān)。Chen等[6]通過(guò)shRNA技術(shù)下調(diào)A459和95D肺癌細(xì)胞中iASPP的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的增殖能力隨之下降。Chen等[14]研究發(fā)現(xiàn)口腔舌鱗癌細(xì)胞中iASPP表達(dá)增加與腫瘤分化差及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而降低iASPP的表達(dá)可導(dǎo)致癌細(xì)胞G0/G1期阻滯，細(xì)胞凋亡減少，增殖能力下降。Laska等[15]認(rèn)為iASPP可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移，并且可能對(duì)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移起重要作用。Liu等[12]用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)45例子宮內(nèi)膜腺癌組織和26例正常子宮內(nèi)膜組織中iASPP的表達(dá)，結(jié)果顯示子宮內(nèi)膜腺癌中iASPP表達(dá)明顯增加，并與腫瘤浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Cao等[9]分析149例早期宮頸鱗癌(FIGO Ⅰb1-Ⅱa期)中iASPP的表達(dá)及其與臨床病理因素間的關(guān)系，結(jié)果顯示iASPP在宮頸鱗癌中表達(dá)升高，并與腫瘤分期、深間質(zhì)浸潤(rùn)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，iASPP高表達(dá)者5年總生存期和無(wú)病生存期明顯低于iASPP低表達(dá)者(P<0.05)，進(jìn)一步行多因素分析顯示iASPP高表達(dá)是宮頸癌總生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。以上研究結(jié)果均提示iASPP可能與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)，其可成為評(píng)估患者預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)。本研究中，不同N分期患者鼻咽癌組織的iASPP陽(yáng)性表達(dá)率存在差異(P<0.05)，兩者呈正相關(guān)性(P<0.05)，即隨著N分期的增高iASPP陽(yáng)性表達(dá)率升高，提示iASPP表達(dá)與鼻咽癌預(yù)后密切相關(guān)，這與上述文獻(xiàn)報(bào)告相似。

綜上所述，iASPP在鼻咽癌組織中的表達(dá)水平與患者的N分期有關(guān)，其有可能成為鼻咽癌預(yù)后的一個(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)，但尚需進(jìn)一步擴(kuò)大病例研究。

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Relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma

WUFang,WANGRen-sheng,ZHANGYong,FANGYe-yin,HUKai

(DepartmentofRadiotherapy,theFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the relationship between expression level of inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family (iASPP) and clinicopathological features in nasopharyngeal carcinoma.Methods Immunohistochemistry was used to detect the expression of iASPP in the carcinoma tissues of 62 patients with nasopharyngeal carcinoma.The clinicopathological features were compared among the patients with different expressions of iASPP.Results Of 62 patients,positive expression of iASPP was observed in 44 patients (71.0%),and negative expression in 18 patients(29.0%).No significant difference in the positive expression rate of iASPP was found among the patients with different genders,ages,pathological types,T stages or clinical stages(P>0.05).But there was significant difference in the positive expression rate of iASPP among the patients with different N stages(P<0.05).The positive expression rate of iASPP positively correlated with N stage(P<0.05).Conclusion N stage correlates with the positive expression of iASPP in patients with nasopharyngeal carcinoma.iASPP expression level may be a prognostic predictor of nasopharyngeal carcinoma.

Nasopharyngeal carcinoma,Inhibitory member of the apoptosis stimulating protein of p53 family,Clinicopathological feature

廣西醫(yī)科大學(xué)青年科學(xué)基金(GXMUYSF2014036)

吳芳(1978～)，女，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：鼻咽癌綜合治療。

王仁生(1963～)，男，博士，主任醫(yī)師，研究方向：鼻咽癌綜合治療，E-mail：13807806008@163.com。

R 739.6

A

0253-4304(2016)08-1075-03

10.11675/j.issn.0253-4304.2016.08.07

2016-03-13

2016-05-31)