胡萍　徐曉棟　任琦

·論著·

HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素的含量

胡萍徐曉棟任琦

目的 探討HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素含量。方法 鹽酸多西環(huán)素含量測(cè)定應(yīng)用HPLC法，采用AlltimaC 18柱，草酸銨溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氫二銨溶液0.2mol/L（65：30：5）為流動(dòng)相，監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)為280 mm。結(jié)果 48～489 mg/L，線性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均為98.35%，RSD 為1.30%。結(jié)論 HPLC法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，可作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法。

鹽酸多西環(huán)素；HPLC法；含量；高效液相色譜

鹽酸多西環(huán)素是一種半合成四環(huán)素，具有抗菌活性以及抑制膠原酶作用，是治療牙周病較為有效的藥物［1-2］。牙周病主要是因菌斑微生物所導(dǎo)致感染性疾病，長(zhǎng)期給予抗生素，易產(chǎn)生耐藥菌株或者是菌群失調(diào)。報(bào)道顯示［3-5］，生物降解鹽酸多西環(huán)素，牙周袋注射，能控制齦下菌斑，對(duì)牙周致病菌產(chǎn)生抑制，緩釋時(shí)間能達(dá)到7 d。本文主要探討HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素含量，具體如下。

1　儀器與試劑

1.1HPLC法

高效液相色譜分析法（HPLC法）將經(jīng)典液相色譜作為基礎(chǔ)，以高壓下液體為流動(dòng)相色譜過程。固定相所用固定相粒度小，為5～10 μm，且傳質(zhì)快、柱效高。

1.2儀器

高效液相色譜儀（島津LC-10AT），AlltimaC 18柱，紫外檢測(cè)器（SPD-10AV）；電子天平、pH計(jì)、真空抽濾泵、超聲儀、干燥烘箱、恒溫水浴鍋、N 2000色譜工作站。

1.3試劑

中國藥品生物制品檢定所提供美他環(huán)素、土霉素、β-多西環(huán)素、多西環(huán)素，鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線、自制重蒸水，其他試劑均分析純。

2　方法

2.1色譜

填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，AlltimaC 18柱為4.6 mm×250 mm，5 μm；pH值調(diào)節(jié)使用氨試液，直至（8.1±2.2）；草酸銨溶液0.05 mol/L：二甲基甲酰胺：磷酸氫二銨溶液0.2 mol/L（65∶30∶5）為流動(dòng)相；流速為1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 mm，柱溫為35℃。

2.2制備對(duì)照品溶液與供試品溶液

取適量的多西環(huán)素，加鹽酸溶液0.01 mol/L，制成每1 ml中含200 μg多西環(huán)素對(duì)照組品溶液。取100 mg鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，搖晃均勻，取5.0 ml，并流動(dòng)相稀釋定容于量瓶（10 ml）獲取供試品溶液。

2.3系統(tǒng)適應(yīng)性

稱取8 mg美他環(huán)素、土霉素、β-多西環(huán)素、多西環(huán)素，并放置于棕色量瓶（10 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，并吸取1 ml，放置于棕色量瓶（10 ml），稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，制成混合溶液（約含0.08 mg/L），吸取20 μl進(jìn)樣。理論塔板數(shù)：β-多西環(huán)素＞1.5、多西環(huán)素＞1.5、多西環(huán)素色譜峰＞1 500。

2.4輔料干擾

鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線（自制），陰性樣品溶液制備參照供試品溶液制備方法，取20 μl，根據(jù)色譜條件，將其注入色譜儀，多西環(huán)素對(duì)照品對(duì)應(yīng)位置敷料無色譜峰，提示不會(huì)干擾主藥含量測(cè)定。

3　結(jié)果

3.1繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

取24.5 mg多西環(huán)素對(duì)照品溶液，放置于棕色量瓶（50 ml），溶解稀釋使用鹽酸溶液0.01 mol/L，直至刻度，對(duì)照品儲(chǔ)備液濃度為0.49 mg/ml，分別取儲(chǔ)備液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml，稀釋使用10 ml甲醇，20 μg進(jìn)樣，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，濃度線性回歸，獲取回歸方程（A=43 765 C+562 000，r=0.999 6），結(jié)果顯示48～489 mg/L，線性良好。

3.2精密度

取200 mg/L多西環(huán)素對(duì)照品溶液，吸取20 μl，參照色譜，并注入色譜儀，持續(xù)6次進(jìn)樣，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，峰面積平均為12 610 111 RSD%=0.70%，提示精密度好。

3.3樣品穩(wěn)定性

取批號(hào)20 100 610、20 100 611、20 100 612制成供試品溶液，放置于棕色瓶，于室溫儲(chǔ)存，于1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進(jìn)行測(cè)定，RSD為1.00%、0.97%、1.13%，提示避光條件下，樣品24 h內(nèi)可保持穩(wěn)定。

3.4回收率

取6份5 mg鹽酸多西環(huán)素，分別放置于棕色量瓶（10 ml），將按照比例稱定基質(zhì)加入，溶解稀釋使用甲醇，直至刻度，搖晃均勻后過濾。量取5 ml續(xù)濾液，防治于量瓶（10 ml），加流動(dòng)相，稀釋直至刻度，搖晃均勻，取20 μl鹽酸多西環(huán)素對(duì)照品溶液、供試品溶液，根據(jù)色譜，注入液相色譜儀，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，得出回收率，均回收，回收率平均為98.35%，RSD為1.30%。

3.5樣品

取適量鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線，樣品溶液制備根據(jù)制備供試品溶液方法，去20 μl，按照色譜，注入色譜儀，對(duì)峰面積進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算其含量，20 100 610、20 100 611、20 100 612樣品含量分別為9.84%、10.30%、9.93%。

4　討論

在測(cè)定鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素含量中，紫外分光光度法是即為常用的檢測(cè)方法，雖然簡(jiǎn)單易行、成本低，但其專屬性較差。高效液相色譜分析法（HPLC法）靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。出峰時(shí)間大約為10 min，15 min左右可完成1次測(cè)定。鹽酸多西環(huán)素含量測(cè)定需要避光操作，預(yù)防分解，且有多個(gè)有關(guān)物質(zhì)，HPLC法能將各種物質(zhì)有效分離［6-8］。樣品溶液、對(duì)照品均需要現(xiàn)配先用，注意操作速度，防止鹽酸多西環(huán)素分解，本文研究發(fā)現(xiàn)，48m～489 mg/L，線性良好，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，回收率平均為98.35%，RSD為1.30%。提示提示避光條件下，HPLC法，在樣品24 h內(nèi)可保持穩(wěn)定，可用于鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素含量測(cè)定。

總之，采取HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素緩釋藥線中鹽酸多西環(huán)素含量，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為質(zhì)量控制檢測(cè)方法。

［1］魏榮卿，李晴，劉曉寧，等.多西環(huán)素及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的HPLC方法研究［J］.中國抗生素雜志，2010，35（12）：951-955.

［2］楊美燕，劉慶曉，單利，等.多西環(huán)素牙周緩釋原位凝膠的制備和局部刺激性研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2016，47（16）：1313-1317.

［3］陸瑩梅，李建林，呂華林.多西環(huán)素藥理學(xué)及新型制劑的研究進(jìn)展［J］.湖南畜牧獸醫(yī)，2015，36（6）：8-10.

［4］王麗瑤，王永祿，李學(xué)明，等.鹽酸多西環(huán)素緩釋片體內(nèi)外相關(guān)性研究［J］.中國抗生素雜志，2013，38（10）：765-768.

［5］符華林，張莉，張偉.鹽酸多西環(huán)素微囊制備及其在家兔體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，42（10）：1438-1444.

［6］王笑琴，戴艷，唐建華，等.鹽酸多西環(huán)素緩釋片的研制及釋放度考察［J］.中國藥業(yè)，2013，22（18）：67-68.

［7］袁耀佐，張玫，錢文，等.HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素及其制劑含量和有關(guān)物質(zhì)［J］.藥物分析雜志，2010，30（12）：2304-2310.

［8］蔡正東.HPLC法測(cè)定鹽酸多西環(huán)素軟膠囊中鹽酸多西環(huán)素及有關(guān)物質(zhì)［J］.北方藥學(xué)，2013，10（1）：14-16.

The Content of Doxycycline Hydrochloride in Doxycycline Hydrochloride Sustained-Release Thread by HPLC

HU Ping XU Xiaodong REN Qi Pharmacy Department，Xinyang Vocational and Technical Colleges Affiliated Hospital，Xinyang He'nan 464000，China

Objective To explore the determination of doxycycline hydrochloride doxycycline hydrochloride sustained-release thread HPLC.Methods Doxycycline hydrochloride content determination by HPLC，using AlltimaC 18 column and 0.05 mol / L ammonium oxalate solution：dimethyl formamide：diammonium hydrogen phosphate solution 0.2 mol / L（65：30：5）as mobile phase，wavelength monitoring for 280 mm.Results 48～489 mg/L，linearity was good，A=43 765 C+562 000，r=0.999 6，the average recovery rate was 98.35%，RSD was 1.30%.Conclusion HPLC method is simple and accurate，and can be used as a quality standard for testing.

Doxycycline hydrochloride，HPLC method，Content，High performance liquid chromatography

R927

A

1674-9308（2016）23-0134-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2016.23.084

信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，河南 信陽464000