席 苑，張 琦，田 艷，張志千，庚 迪，林宏英，孫毅坤

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 100102）

雙夏湯改善老年果蠅片段式睡眠的藥效學(xué)研究＊

席 苑，張 琦，田 艷，張志千，庚 迪，林宏英，孫毅坤＊＊

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院 北京 100102）

目的：本文主要探究雙夏湯水煎液凍干粉對(duì)正常雌性老年果蠅片段式睡眠活動(dòng)的改善作用。方法：以果蠅為模式生物，使用果蠅自主活動(dòng)監(jiān)測(cè)軟件對(duì)果蠅的自主活動(dòng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，探究雙夏湯對(duì)老年果蠅片段式睡眠的調(diào)節(jié)。結(jié)果：雙夏湯凍干粉的最佳給藥濃度為2.5%，最佳給藥天數(shù)為4天。相比于正常對(duì)照組，雙夏湯給藥組、陽(yáng)性藥組的35日齡處女蠅睡眠時(shí)間均有所延長(zhǎng)。但陽(yáng)性藥主要影響其白天的睡眠行為，雙夏湯則顯著影響其夜晚的睡眠行為，延長(zhǎng)片段睡眠時(shí)間。結(jié)論：雙夏湯水煎液凍干粉能有效改善年老果蠅的片段式睡眠，相比于陽(yáng)性藥，在治療夜間間歇性失眠的同時(shí)，并未顯著影響果蠅白天的活動(dòng)，雙夏湯可能更有助于果蠅睡眠-覺醒節(jié)律的調(diào)節(jié)。

雙夏湯 老年果蠅 片段式睡眠 自主活動(dòng)監(jiān)測(cè)

失眠癥是最常見的一種睡眠障礙性疾病，指患者對(duì)睡眠時(shí)間或質(zhì)量不滿足并影響日間社會(huì)功能的一種主觀體驗(yàn)。目前，隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，生活節(jié)奏的不斷加快，失眠癥的發(fā)病率也在不斷升高。據(jù)2006年流行病學(xué)調(diào)查顯示，失眠癥發(fā)病率在美國(guó)為33%，在歐洲為4%-22%，在中國(guó)也高達(dá)10%-20%[1]。作為一種常見的生理心理疾患，失眠癥可發(fā)生于各個(gè)年齡段，但在老年患者中發(fā)病率較其他年齡段明顯增高，并且長(zhǎng)期失眠加快衰老速度，與其他臟器功能紊亂和免疫功能下降也有一定的相關(guān)性[2]。在治療方面，西醫(yī)多用安定、佳樂定、水合氯醛等鎮(zhèn)靜藥[3]，雖然見效快，但副作用明顯。醫(yī)藥工作者正尋找各種替代和補(bǔ)充醫(yī)學(xué)療法用于失眠癥的治療[4]。

中醫(yī)對(duì)于失眠的描述始見于《內(nèi)經(jīng)》，稱其為“目不瞑”、“不得眠”、“不得臥”，《難經(jīng)》中亦有“不寐”的說法[2]?！澳赀^半百，其氣自半”，因此老年人的失眠多是由正氣虧虛、陰陽(yáng)失調(diào)所致[3]。明代《醫(yī)經(jīng)秘旨》曰：“蓋半夏得陰而生，夏枯草得陽(yáng)而生，是陰陽(yáng)配合之妙也”，準(zhǔn)確地闡述了半夏、夏枯草的配伍意義[5]。明代《重訂靈蘭要覽》言：“不寐之證，椿田每用制半夏、夏枯草各五錢，取陰陽(yáng)相配之義，濃煎長(zhǎng)流水，競(jìng)覆杯而臥”，所以半夏、夏枯草二藥合用治療失眠古而有之，并且主治陰陽(yáng)失調(diào)、痰火內(nèi)壅的失眠，又稱雙夏湯。

黑腹果蠅為節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱雙翅目果蠅科黑腹果蠅，幼蟲腹部一側(cè)可見到黑色的消化道，由此稱之為黑腹果蠅。1830年人類首次描述黑腹果蠅，1901年Morgan將果蠅作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料，此后發(fā)現(xiàn)黑腹果蠅在遺傳、代謝、節(jié)律、成癮等方面與哺乳動(dòng)物均具有很多相同的標(biāo)準(zhǔn)化特征[6-9]。加之其體型小、飼養(yǎng)簡(jiǎn)便、繁殖周期短等特性，使其具有作為模式生物的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。果蠅應(yīng)用于睡眠相關(guān)的研究始于2000年，在睡眠的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制和相關(guān)基因研究方面日益受到人們的高度關(guān)注[10]。

2012年，英國(guó)學(xué)者Gilestro在Nature上發(fā)表文章[11]，首次介紹了新型果蠅活動(dòng)采集處理系統(tǒng)。該系統(tǒng)是監(jiān)測(cè)果蠅睡眠-覺醒活動(dòng)的多媒體平臺(tái)，旨在建立實(shí)驗(yàn)人員與無脊椎動(dòng)物之間的通信關(guān)系。該系統(tǒng)也是一個(gè)完整的果蠅睡眠數(shù)據(jù)采集及分析系統(tǒng)，可通過視頻成像分析數(shù)據(jù)。軟件支持9通路同時(shí)監(jiān)測(cè)，每組32只果蠅，不僅大大降低實(shí)驗(yàn)成本，還能提高實(shí)驗(yàn)效率。

本課題組前期已將該軟件成功應(yīng)用于果蠅睡眠的行為學(xué)監(jiān)測(cè)，并且已研究證實(shí)雙夏湯可改善睡眠剝奪果蠅的睡眠。在對(duì)果蠅進(jìn)行的連續(xù)行為學(xué)觀察后發(fā)現(xiàn)，果蠅在進(jìn)入老年后出現(xiàn)與人類類似的睡眠現(xiàn)象——覺醒早、易被喚醒、入睡慢等?；谝陨涎芯?，本文旨在應(yīng)用該軟件對(duì)果蠅進(jìn)行行為學(xué)監(jiān)測(cè)，探究雙夏湯對(duì)老年果蠅片段式睡眠的改善作用，為中醫(yī)臨床治療失眠癥提供參考。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Canton S品系野生型黑腹果蠅的雌性處女蠅，由中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所提供。

1.2 藥物

夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗（批號(hào)：002256374638）。半夏為天南星科植物半夏Pinelliaternata (Thunb.) Breit.的干燥塊莖，本研究所用為半夏的炮制品法半夏（批號(hào)：310039125308）。上述藥材均購(gòu)于安國(guó)東方藥城中藥材有限公司，并由北京市藥品檢驗(yàn)所常增榮主任藥師鑒定。戊巴比妥鈉（批號(hào)：WS20060401），購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 試劑

玉米粉、黃豆粉、酵母粉（食品級(jí)），瓊脂粉、麥芽糖、丙酸，購(gòu)于北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司。

1.4 儀器

新型果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，自制；果蠅麻醉裝置，自制；冷凍干燥機(jī)（北京松源華興科技發(fā)展有限公司，型號(hào)：LGJ-12）；智能人工氣候箱（寧波江南儀器廠，型號(hào)：RXZ-280B）。

2 方法

2.1 雙夏湯凍干粉的制備

取夏枯草25 g、法半夏25 g，10倍量蒸餾水浸泡30 min后煎煮兩次，每次1 h。水煎液過濾濃縮后冷凍干燥，凍干粉得率為25.0%，凍干粉密封置-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 正常培養(yǎng)基的制備

取玉米粉，瓊脂粉適量，加蒸餾水，煮沸，備用；另取酵母粉，黃豆粉適量，加蒸餾水煮沸后，加入麥芽糖繼續(xù)煮沸，與上述玉米粉溶液合并，攪拌均勻，稍涼后加入丙酸，混勻，倒入高壓滅菌后的果蠅培養(yǎng)管，每管培養(yǎng)基厚度約為2 cm。冷卻、待培養(yǎng)基凝固后備用。

2.3 含藥培養(yǎng)基的制備

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基原料中加入一定量雙夏湯凍干粉，按照基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制方法，配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.10%、0.25%、0.50%、1.00%、2.50%、5.00%、8.00%的含藥培養(yǎng)基。將含藥培養(yǎng)基倒入一次性無菌平皿中，培養(yǎng)基厚度約為2 mm，冷卻凝固備用。將監(jiān)測(cè)管一端內(nèi)插入培養(yǎng)基后拔出并蘸取融化好的蠟液進(jìn)行蠟封，待蠟液冷卻凝固后將另一端用棉球封住。

取戊巴比妥鈉水溶液2.5 mg·mL-1，配制成0.05 mg·mL-1的含藥培養(yǎng)基。將含藥培養(yǎng)基倒入一次性無菌平皿中，培養(yǎng)基厚度約為2 mm，冷卻凝固備用。將監(jiān)測(cè)管一端內(nèi)插入培養(yǎng)基后拔出并蘸取融化好的蠟液進(jìn)行蠟封，待蠟液冷卻凝固后將另一端用棉球封住。

2.4 果蠅飼養(yǎng)環(huán)境

將果蠅置于溫度25±1℃、相對(duì)濕度50%-70%的環(huán)境中飼養(yǎng)，12 h自動(dòng)光照-黑暗循環(huán)。

2.5 果蠅睡眠-覺醒活動(dòng)監(jiān)測(cè)

收集處女蠅，移入含培養(yǎng)基的果蠅監(jiān)測(cè)管，開口端用棉花塞住，每支檢測(cè)管內(nèi)放1只果蠅。將果蠅監(jiān)測(cè)管嵌入到果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)盤上，每個(gè)攝像頭可同時(shí)監(jiān)測(cè)32只果蠅的活動(dòng)情況。通過數(shù)據(jù)采集軟件自動(dòng)記錄果蠅即時(shí)活動(dòng)距離。數(shù)據(jù)采集軟件以1 min為單位記錄每一幀的活動(dòng)情況測(cè)算距離，克服以往僅記錄通過終點(diǎn)的次數(shù)以造成的假睡眠[11]。若5 min以內(nèi)活動(dòng)次數(shù)記錄為零，即果蠅靜止時(shí)間持續(xù)5 min時(shí)，此休息狀態(tài)符合睡眠行為標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為果蠅處于睡眠狀態(tài)，記為果蠅睡眠時(shí)間。待果蠅適應(yīng)24 h后進(jìn)行睡眠監(jiān)測(cè)，統(tǒng)計(jì)24 h平均每只果蠅睡眠總時(shí)間、白天睡眠時(shí)間和夜間睡眠時(shí)間。

2.6 雙夏湯凍干粉對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)的量效關(guān)系研究

以野生型Canton S品系黑腹果蠅作為觀察對(duì)象，收集12 h內(nèi)羽化未交配的處女蠅，采用乙醚麻醉，將處女蠅置于含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的監(jiān)測(cè)管中飼養(yǎng)，分為空白組和給藥組，每組32只。于第4日早7點(diǎn)給藥，即將果蠅移入含有含藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.10%、0.25%、0.50%、1.00%、2.50%、5.00%、8.00%的含藥培養(yǎng)基檢測(cè)管中?？瞻捉M移入不含藥物的培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)管中。監(jiān)測(cè)前適應(yīng)環(huán)境24 h。

從第7日上午7：00至次日上午7：00，采用新型果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，以果蠅睡眠時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)進(jìn)行24 h連續(xù)監(jiān)測(cè)。

2.7 雙夏湯凍干粉對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)的時(shí)效關(guān)系研究

以野生型Canton S品系黑腹果蠅作為觀察對(duì)象，收集12 h內(nèi)羽化未交配的處女蠅。麻醉后，將處女蠅置于含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的監(jiān)測(cè)管中飼養(yǎng)，分為空白組和給藥組，每組32只。分別于第2、3、4、5日早7：00給藥，即第2、3、4、5日將果蠅移入含有含藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.50%的含藥培養(yǎng)基檢測(cè)管中。空白組移入不含藥物的培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)管中。監(jiān)測(cè)前適應(yīng)環(huán)境24 h。從第7日上午7：00至次日上午7：00，采用新型果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，以果蠅睡眠時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，果蠅睡眠活動(dòng)進(jìn)行24 h連續(xù)監(jiān)測(cè)。

2.8 雙夏湯對(duì)果蠅片段式睡眠的影響

以野生型Canton S品系黑腹果蠅作為觀察對(duì)象，收集12 h內(nèi)羽化未交配的處女蠅。乙醚麻醉后，將處女蠅置于含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的監(jiān)測(cè)管中飼養(yǎng)，分為空白組、陽(yáng)性藥組和雙夏湯給藥組，每組32只。31日后將空白組移入不含藥物的培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)管中，陽(yáng)性藥組（給予戊巴比妥鈉）移入含戊巴比妥鈉培養(yǎng)基中，32日后將雙夏湯給藥組移入含有含藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.50%的含雙夏湯培養(yǎng)基檢測(cè)管中，監(jiān)測(cè)前適應(yīng)環(huán)境24 h，在監(jiān)測(cè)管飼養(yǎng)過程中死亡的果蠅，不再補(bǔ)充。從第35日上午7：00至次日上午7：00，采用新型果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)裝置，以果蠅睡眠時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)進(jìn)行24 h連續(xù)監(jiān)測(cè)。

統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)以 表示，采用IBM SPSS Statistics 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，多組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié)果

3.1 正常雌性果蠅睡眠規(guī)律

35日齡果蠅出現(xiàn)片段式睡眠（圖1）。正常3日齡果蠅和7日齡果蠅睡眠行為無顯著差異（表1）。為縮短實(shí)驗(yàn)周期，選擇3-7日齡作為時(shí)效關(guān)系研究的日齡段。結(jié)果發(fā)現(xiàn)7日齡后果蠅睡眠時(shí)間有所縮短，但在一個(gè)月后出現(xiàn)延長(zhǎng)且呈現(xiàn)片段式睡眠。

3.2 不同給藥濃度雙夏湯凍干粉對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)的影響

在給予果蠅0.10%雙夏湯凍干粉后，果蠅的總睡眠時(shí)間與空白組未見顯著差異（P＞0.05）。給予果蠅0.25%雙夏湯凍干粉后，果蠅的睡眠時(shí)間與空白組有明顯差異（P＜0.05），即雙夏湯凍干粉起效濃度為0.25%，隨著給藥濃度的增加，果蠅睡眠總時(shí)間持續(xù)延長(zhǎng)至給藥濃度為2.50%后出現(xiàn)平臺(tái)期，即給藥濃度2.50%、5.00%、8.00%組果蠅睡眠時(shí)間未見顯著性差異。雙夏湯凍干粉含藥量大于0.25%后，對(duì)果蠅夜間睡眠活動(dòng)調(diào)節(jié)效果顯著（P＜0.001）。結(jié)果見表2、圖2。

3.3 不同給藥時(shí)間2.50%雙夏湯凍干粉對(duì)果蠅睡眠的影響

由于3-7日齡果蠅睡眠時(shí)間較為穩(wěn)定，故于果蠅羽化后第2、3、4、5日早7：00給藥，結(jié)果與空白對(duì)照組比較。給藥第2、3日與空白組比較未見顯著差異，給藥第4天差異最為顯著，第4日后出現(xiàn)平臺(tái)期，且有微弱下降趨勢(shì)，但未見顯著差異（P＞0.05），詳見表3、圖2。

3.4 雙夏湯對(duì)年老果蠅睡眠活動(dòng)影響

正常35日齡果蠅夜間出現(xiàn)間歇性睡眠，圖3中黑色代表睡眠，白色代表覺醒，黑白均勻分布，代表年老果蠅夜間睡眠規(guī)律性覺醒。與正常組相比，雙夏湯給藥組、陽(yáng)性藥組睡眠時(shí)間均有所延長(zhǎng)，但睡眠行為表現(xiàn)并不一致。陽(yáng)性藥組果蠅白天睡眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)，夜間睡眠表現(xiàn)為：前半夜依然表現(xiàn)為規(guī)律性覺醒，而在凌晨果蠅出現(xiàn)了持續(xù)睡眠。因此，陽(yáng)性藥并未顯著延長(zhǎng)果蠅夜間睡眠，而主要對(duì)白天睡眠行為影響較大。雙夏湯并未影響果蠅白天睡眠時(shí)間，也并沒有影響果蠅的間歇性睡眠，而是延長(zhǎng)了果蠅夜間睡眠時(shí)間，表現(xiàn)為：延長(zhǎng)了每個(gè)睡眠-覺醒周期中的睡眠時(shí)間，黑色條帶出現(xiàn)展寬，黑色條帶并未見

出現(xiàn)在某一時(shí)期的集中展寬，展寬較為平均。結(jié)果見表4、圖3。

圖1 正常果蠅睡眠節(jié)律圖

表1 正常雌性果蠅睡眠情況表

表2 不同雙夏湯凍干粉濃度對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)的影響（n=32）

圖2 量效關(guān)系曲線（A）、時(shí)效關(guān)系曲線（B）

4 討論

本研究通過對(duì)正常果蠅睡眠行為的連續(xù)監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，35日齡果蠅出現(xiàn)片段式睡眠，前期研究結(jié)果表明雌性果蠅的睡眠-覺醒周期與人類睡眠行為更為接近，故本實(shí)驗(yàn)采用35日齡雌性果蠅為研究對(duì)象。雌果蠅生殖器官的受精囊可保存交配所得的大量精子而使卵細(xì)胞受精[12]，為便于后期研究，本實(shí)驗(yàn)采用的雌性果蠅均為處女蠅。

根據(jù)量效關(guān)系、時(shí)效關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.50%的雙夏湯凍干粉，連續(xù)給藥4天。結(jié)果表明雙夏湯可對(duì)老年果蠅的片段式睡眠有顯著的改善作用。但根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測(cè)，雙夏湯與戊巴比妥鈉治療老年性睡眠的機(jī)制并不完全相同，陽(yáng)性藥組雖延長(zhǎng)了果蠅睡眠活動(dòng)時(shí)間，且夜間出現(xiàn)不間斷性睡眠，但夜間睡眠時(shí)間并未延長(zhǎng)。雙夏湯并未顯著延長(zhǎng)果蠅白天睡眠時(shí)間，但卻影響了果蠅夜間睡眠，延長(zhǎng)了片段式睡眠的片段時(shí)長(zhǎng)。

Izac等[13]研究認(rèn)為睡眠受晝夜節(jié)律和穩(wěn)態(tài)過程相互作用的調(diào)節(jié)。晝夜節(jié)律的紊亂，最終引起睡眠障礙。其中，由松果體釋放的褪黑素是調(diào)節(jié)人體節(jié)律的重要物質(zhì)。除此之外，泌乳激素、和皮質(zhì)醇等激素的分泌紊亂都有可能是引起失眠癥的原因[14]。而隨著年齡的增高，老年人機(jī)體內(nèi)的環(huán)境穩(wěn)定性和順應(yīng)性降低，生物機(jī)能紊亂，從而出現(xiàn)失眠的發(fā)病率增加[15]。

表3 不同給藥時(shí)間雙夏湯凍干粉對(duì)果蠅睡眠活動(dòng)的影響（n=32）

表4 雙夏湯對(duì)年老果蠅睡眠時(shí)間的影響

圖3 雙夏湯對(duì)年老果蠅睡眠行為的影響

因此，出于對(duì)老年患者機(jī)體老化的特殊性的考慮，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)以“按需治療”和“小劑量間斷”為治療原則[16]，重視患者心理、環(huán)境及睡眠習(xí)慣的自我調(diào)節(jié)。與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究類似，雙夏湯通過調(diào)理陰陽(yáng)，循行營(yíng)衛(wèi)來改善老年患者的睡眠質(zhì)量，兩者的思路不謀而合。

王東明[17]研究表明，半夏可以通過降低血紅細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶活性及血清和肝組織中一氧化氮合酶活性，同時(shí)抑制組織中脂質(zhì)過氧化程度等多種途徑抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而達(dá)到鎮(zhèn)靜催眠的作用。

半夏與夏枯草這一藥對(duì)配伍，“半夏得陰而生，夏枯草得陽(yáng)而長(zhǎng)”，順應(yīng)天時(shí)，交陰陽(yáng)二氣，使陽(yáng)入于陰而化寐，故推斷其對(duì)心腎不交造成的老年失眠有很好的改善。

雙夏湯治療老年間歇性失眠作用機(jī)制尚不明確，本課題組將針對(duì)該問題進(jìn)行下一步研究。在此做出大膽猜想，雙夏湯相對(duì)于本實(shí)驗(yàn)所用的陽(yáng)性藥，在治療夜間間歇性失眠的同時(shí)，并未影響白天果蠅活動(dòng)，可能更有助于睡眠節(jié)律的調(diào)節(jié)。

1 張麗萍,夏猛.失眠癥的治療現(xiàn)狀分析及思考.環(huán)球中醫(yī)藥,2011,4(1)：66-68.

2 游秋云.老年失眠的中醫(yī)發(fā)病機(jī)制及防治探討.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,21(11)：2966-2967.

3 趙宗剛,李傳森,喻曉.活血化瘀法是治療老年失眠的重要法則.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2003,9(7)：14,19.

4 Benca R M. Diagnosis and treatment of chronic insomnia： a review. Psychiatr Serv, 2005, 56(3)：332-343.

5 王康鋒,張洪斌,張立娟.半夏夏枯草合用治療失眠的理論探討及臨床應(yīng)用.中醫(yī)藥學(xué)刊,2006,24(3)：484-485.

6 Yamamoto S, Jaiswal M, Charng W L, et al. A Drosophila genetic resource of mutants to study mechanisms underlying human genetic diseases. Cell, 2014, 159(1)：200-214.

7 Coelho A, Fraichard S, Le Goff G, et al. Cytochrome P450-dependent metabolism of caffeine in drosophila melanogaster. PLoS One, 2015, 10(2)：e0117328.

8 Hendricks J C, Finn S M, Panckeri K A, et al. Rest in drosophila is a sleep-like state. Neuron, 2000, 25(1)：129-138.

9 Kaun K R, Devineni A V, Heberlein U. Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction. Hum Genet, 2012, 131(6)：959-975.

10 李廷利.從改善睡眠作用研究四逆散的疏肝解郁功效.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2015,17(7)：1367-1371.

11 Gilestro G F. Video tracking and analysis of sleep in drosophila melanogaster. Nat Protoc, 2012, 7(5)：995-1007.

12 陳曉蕓. 果蠅的飼養(yǎng).生物學(xué)通報(bào),2006,41(2)：51.

13 Izac S M, Eeg T R. Basic anatomy and physiology of sleep. Am J Electroneurodiagnostic Technol, 2006, 46(46)：18-38.

14 袁建平,王江海.褪黑激素新論——(2)老年人褪黑激素分泌與睡眠障礙.中國(guó)食品學(xué)報(bào),2002,2(3)：54-62.

15 姚秋菊.珍棗膠囊治療老年陰虛火旺失眠患者療效觀察及改善睡眠結(jié)構(gòu)作用機(jī)制的研究.南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文,2013：4.

16 趙曉東,時(shí)晶,楊益昌,等.失眠的診斷與中西醫(yī)治療.中華中醫(yī)藥雜志,2011,26(11)：2641-2643.

17 王東明.半夏治療失眠療效觀察及臨床機(jī)制分析.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥,2014(5)：17.

A Pharmacodynamical Study on the Improvement of Senile Drosophilas with Fragmented Sleep with the Administration of Shuang Xia Decoction

Xi Yuan, Zhang Qi, Tian Yan, Zhang Zhiqian, Geng Di, Lin Hongying, Sun Yikun
(School of Chinese Pharmacy, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China)

This study aimed at unfolding the therapeutic effects of freeze-dried powder separated from Shuang Xia decoction (SXD) on female senile drosophila melanogaster with fragmented sleep. Taking drosophilas as the model organisms, the locomotor activity was monitored using the autonomic monitoring software to explore the regulation of fragmented sleep in senile drosophilas by the treatment of SXD. As a result, it was found that the optimum concentration of SXD was 2.50%, while the desirable therapeutic duration was 4 days. In comparison with the control group, 35-day-old virgin drosophilas'sleep was prolonged in the SXD group and the positive control group. The positive drug mainly affected their sleep in the daytime, while SXD impacted their sleep atnight featuring the prolonged fragmented sleep. In conclusion, it was demonstrated that the freeze-dried powder of SXD effectively alleviated intermittent insomnia in the female senile drosophilas. Compared with positive drug, SXD also mitigated intermittent insomnia at night without significant changes in the sleep of the drosophilas in the daytime. Above all, SXD was beneficial in the regulation of sleep-wake rhythm in the drosophilas.

Shuang Xia decoction, senile drosophila melanogaster, fragmented sleep, autonomic activity monitoring

10.11842/wst.2016.11.025

R28

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷，責(zé)任譯審：朱黎婷）

2016-05-06

修回日期：2016-09-30

＊ 國(guó)家自然基金委面上項(xiàng)目（81173521）：基于受體學(xué)說的雙夏湯治療失眠的物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：孫毅坤；教育部中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)自主選題項(xiàng)目（2015-JYB-XS068）：基于果蠅為模式生物的雙夏湯治療失眠作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：張志千；北京中醫(yī)藥大學(xué)2015年國(guó)家級(jí)創(chuàng)新訓(xùn)練及北京市共建項(xiàng)目（BJGJ1527）：基于果蠅行為學(xué)半夏治療失眠的有效組分研究，負(fù)責(zé)人：張琦。

＊＊ 通訊作者：孫毅坤，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥質(zhì)量控制及中藥成分分析。