褚 燕

（沈陽市紅十字會醫(yī)院呼吸內(nèi)科，遼寧 沈陽 110013）

不同劑量阿托伐他汀對肺纖維化小鼠Smad3/7蛋白表達的影響

褚 燕

（沈陽市紅十字會醫(yī)院呼吸內(nèi)科，遼寧 沈陽 110013）

目的研究不同劑量阿托伐他汀對肺纖維化小鼠肺組織中smad3，smad7蛋白表達影響。方法小鼠隨機分為對照組，模型組，阿托伐他汀（10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg）治療組。對照組小鼠氣管內(nèi)灌注生理鹽水，其余小鼠氣管內(nèi)灌注博來霉素制備肺纖維化模型。給藥后第2天開始阿托伐他汀組給予不同劑量阿托伐他汀灌胃，其余兩組給予等量生理鹽水灌胃，于第7，14，28天分別處死各組小鼠4只，取肺組織進行HE染色觀察病理變化，免疫組化法測定肺組織smad3，smad7蛋白表達情況。結(jié)果與模型組比較，阿托伐他汀治療組smad3蛋白表達均降低，smad7蛋白表達升高，且降低及升高程度均與阿托伐他汀劑量呈正相關(guān)。結(jié)論阿托伐他汀可減輕小鼠肺纖維化程度，其減輕與Smad3/7通路密切相關(guān)，且具有劑量依賴性。

阿托伐他??；TGF-β1；smad3蛋白；smad7蛋白

肺間質(zhì)纖維化是多種病因引起的肺部破壞性疾病，一旦確診，預后極差，由于目前尚無有效治療手段，故提高對肺纖維化發(fā)生機制認識，有利于幫助我們研究新的治療手段[1]。在前期試驗中，我們已證實阿托伐他汀可以通過對轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）及Samd3/7蛋白通路的調(diào)節(jié)，干預肺纖維化程度。本實驗就在此基礎(chǔ)上，研究不同劑量阿托伐他汀對肺纖維化影響。

1 材料與方法

1.1 動物及試劑：健康清潔級雌性C57BL-6小鼠100只，體質(zhì)量約20 g（中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院實驗動物中心提供），博萊霉素粉劑（日本株式會社，15毫克/支），兔抗鼠Smad3及Smad7抗體免疫組化試劑盒（購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司）。

1.2 分組與建模：將100只小鼠分為5組，空白組20只，模型組20只，阿托伐他汀（10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg）每組各 20只。將小鼠適應性喂養(yǎng)5 d，開始模型制作，用10%水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔內(nèi)注射麻醉，起效后于頸部正中縱向切口，暴露氣管，除空白組外，其余4組均用1 mL注射器抽取含博萊霉素(7 mg/kg)的生理鹽水0.3 mL，氣管內(nèi)給藥，隨后逐層縫合肌肉皮膚，消毒。將小鼠左側(cè)臥位放回鼠籠，對照組為同法注入同等劑量的生理鹽水。約10 min后小鼠清醒，送回動物間，再原有條件下繼續(xù)飼養(yǎng)。

1.3 給藥：造模后第2天開始，每日給空白組和模型組小鼠生理鹽水2 mL灌胃，阿托伐他汀組按10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg進行灌胃治療。

1.4 留取標本：各組分別于造模后第7，14，28天隨機處死4只，剖胸取肺組織，固定于4%多聚甲醛1周，常規(guī)固定，石蠟包埋，切片。

1.5 組織病理學觀察：切片行HE染色。比較不同時間點各組標本的肺泡炎和肺纖維化程度。

1.6 免疫組化檢測：smad3，smad7蛋白表達 按照試劑盒要求對切片進行免疫組化SP法染色。

1.7 統(tǒng)計學分析：所有數(shù)據(jù)以表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件，各實驗組和對照組之間采用多組單因素方差分析，組間比較用t檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 鏡下觀：空白組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)完整，無纖維增生。模型組小鼠第7天肺泡腔內(nèi)大量炎性細胞浸潤，但肺泡間隔無明顯增厚，無明顯纖維增生；第14天炎性細胞浸潤較前減輕，但肺泡間隔明顯增厚，偶見纖維增生，第28天肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間隔增厚，可見明顯膠原纖維增生。各劑量阿托伐他汀組上述癥狀均較相應時間點模型組明顯減輕，且隨著阿托伐他汀劑量的增加，上述癥狀緩解越明顯。

2.2 阿托伐他汀對肺纖維化小鼠組織Smad3及Smad7表達的影響：通過統(tǒng)計學分析，與模型組比較，阿托伐他汀治療組smad3蛋白表達均降低，smad7蛋白表達升高，且降低及升高程度均與阿托伐他汀劑量呈正相關(guān)。

3 討 論

肺纖維化是多種肺間質(zhì)疾病最終結(jié)局，也是呼吸系統(tǒng)最嚴重的疾病之一，預后極差，最終可以引起呼吸功能衰竭而死亡，5年生存率不超過50%。近年來，多種抗纖維化藥物用于治療該病，但效果均不理想。阿托伐他汀作為調(diào)脂類藥物已經(jīng)廣泛應用于臨床，近些年對其抗纖維化的研究也成為國內(nèi)外熱點。TGF-β1是公認的促纖維化因子，可調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、凋亡、移行、分泌ECM、調(diào)試細胞與細胞間、細胞與ECM間相互作用[2]。Smads蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)參與TGF-β超家族信號在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)導的一組信號蛋白[3]。TGF-β本身是以無活性的形式存在于細胞內(nèi)，它的表達需要借助其相對應的信號通路，其中Smads通路是最重要的信號轉(zhuǎn)導分子。 Smad蛋白作為TGF-β1下游信號分子，將TGF-β1信號從細胞外轉(zhuǎn)導到細胞內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，使膠原過度沉積，從而導致肺纖維化的發(fā)生發(fā)展[4]。在本實驗中，通過測試發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀治療組smad3蛋白表達均降低，smad7蛋白表達升高，且降低及升高程度均與阿托伐他汀劑量呈正相關(guān)。

綜上所述，阿托伐他汀可減輕小鼠肺纖維化程度，其減輕與Smad3/7通路密切相關(guān)，且具有劑量依賴性。

[1] Gameau-Tsodikova S,Thannickal VJ.Protein kinase inhibitors in the treatment of pulmonary fibrosis[J]. CurrMed Chem,2008,15 (25):2632-2640.

[2] Kim IY,Kim MM,Kim SJ.Transforming growth factor-: biology and clinical relevance[J]. Biochem Mol Biol,2005,38(1):1-8.

[3] Attisano L,Wrana JL.Signal transduction by the TGF- β superfamily[J].Science,2002,296(5573):1646-1647.

[4] Gressner AM,Weiskirchen R,Breitkopf K,et al.Roles of TGF-beta in hepatic fibrosis[J].Front Biosci,2002,7(7):d793-807.

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1671-8194（2016）33-0018-01