田富明，楊華甫，梁迎東，陳 瑩，藍 海

（大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000）

普洱茶對牛切牙抗酸脫礦的動力學研究

田富明，楊華甫，梁迎東，陳 瑩，藍 海*

（大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000）

目的：研究不同濃度的普洱生茶、熟茶對牛切牙脫礦速率的影響。方法：運用恒pH法，通過動力學實驗比較經(jīng)去離子水、NaF、不同濃度的普洱生茶、熟茶處理過的牛切牙抗酸脫礦作用的強弱。結果：脫礦速率曲線表明，NaF組消耗HAc的量最少，脫礦速率最慢，96 mg∕mL生茶組、6 mg∕mL和12 mg∕mL的熟茶組較去離子水組脫礦速率慢，同濃度的熟茶組消耗的HAc的量少于生茶組。結論：高濃度生茶組、低濃度熟茶組都具有抗酸脫礦作用，但作用不及NaF組，提示熟茶的防齲作用強于生茶。

普洱茶；抗酸；脫礦；動力學

齲齒是牙體組織脫鈣、有機質(zhì)分解牙體解剖形態(tài)溶解破壞引起的口腔常見疾病〔1〕，它的發(fā)生與細菌、口腔環(huán)境、宿主的行為習慣等多種因素都有著緊密的聯(lián)系〔2〕。早期采用的抗生素類（如青霉素、紅霉素、四環(huán)素或螺旋霉素等）雖然具有一定的防齲效果，但長期使用可引起口腔和腸道細菌群失調(diào)從而導致其他疾病。氟化物防齲是研究最廣且被認為最有效的方法，但其應用還是有諸多局限，這種局部用氟的臨床療效和不良反應（氟中毒）尚存疑問〔3〕。

中國盛產(chǎn)茶葉，同時也是茶文化的發(fā)源地。劉鑫等〔4〕在不同種類茶對牛牙釉質(zhì)脫礦影響的體外研究中，得出普洱茶中富含茶多酚，能抑制齲齒菌的生長，增加釉質(zhì)的抗酸能力。本文通過動力學研究〔5〕不同濃度的生茶、熟茶處理牛切牙，比較普洱生茶、熟茶抗酸脫礦作用的強弱。

1 材料

1.1儀器BCD-218C冷藏冷凍箱（長沙中意集團股份有限公司）；SB25-120超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；PHS-25C數(shù)字酸度計（上海鵬順科學儀器有限公司）；電子天平Ohaus Corporation（奧豪斯儀器上海有限公司制造）；雷磁ZDJ-4A自動電位滴定儀（上海精科儀器有限公司）；雷磁E-201C型pH復合電極（上海精科儀器有限公司）。

1.2藥材玖妙普洱茶（云南大葉種曬青毛茶與云南大葉種曬干毛茶），購于大理市下關鎮(zhèn)沃爾瑪超市，由普洱市圣普茶葉有限公司生產(chǎn)的圣邦普洱茶禮盒，生產(chǎn)日期2011年5月28日。

1.3試劑HAc、C2H5OH、C2H6OH、KCl，脫礦液：0.15 mol∕L KCl，用HAc調(diào)pH至4.00〔6〕。以上試劑均為分析純。

2 方法

2.1普洱茶實驗液的制備稱取9.6 g的生茶放于燒杯中，加入蒸餾水，加熱煮沸5 min，冷卻至室溫，過濾得濾液100 mL，即為濃度為96 mg∕mL的生茶溶液，倍比稀釋后，得到濃度分別為48、24、12、6 mg∕mL生茶溶液。熟茶溶液的制備方法同生茶溶液的制備方法。

2.2牛切牙標本的制備市場上買新鮮拔出的牛切牙100顆，去除牙根、牙髓和軟組織，用注射器抽水沖洗干凈，用0.9%的生理鹽水超聲40 min，自然晾干。從100顆牙齒樣品中篩選出72顆無裂痕，無齲齒和氟斑的牛切牙，再隨機將72顆牛切牙隨機分為12組，每組6顆，分別用去離子水、氟化鈉、生茶（96、48、24、12、6 mg∕mL）、熟茶（96、48、24、12、6 mg∕mL）各100 mL浸泡48 h后自然晾干，最后把經(jīng)過上述處理的牙齒粉碎成20目的細粉，密封，置于-20℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3抗酸脫礦在自動電位滴定儀恒溫杯中加入75 mL的脫礦液，置于（37±0.1）℃恒溫，再準確稱取96 mg∕mL的生茶組牙粉10 mg，放入上述的脫礦液中，用自動電位滴定儀向上述脫礦液中滴加99.09 mmol∕L的醋酸，并用恒pH法控制pH為4.0，每10 min定時記錄1次醋酸的加入量，記錄至150 min，重復3次。醋酸的加入量與時間的關系曲線即為96 mg∕mL的生茶組牙粉的脫礦動力學曲線。同樣的方法繪制生茶組牙粉（48、24、12、6 mg∕mL）、熟茶組牙粉（96、48、24、12、6 mg∕mL）、去離子水組牙粉、NaF組牙粉的脫礦動力學曲線。

3 結果

3.1 HAc體積消耗比較NaF組，96 mg∕mL的生茶組，6、12 mg∕mL的熟茶組HAc的消耗量都比去離子水組消耗的少，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；同濃度的生茶組和熟茶組相比較，生茶組消耗的HAc比熟茶組消耗的多，且消耗HAc的量差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組脫礦消耗HAc的體積（）

表1 各組脫礦消耗HAc的體積（）

注：與空白組比較*P＜0.05，**P＜0.05；生茶與熟茶組間比較P＜0.05。

消耗HAc的體積∕mL 1.684±0.263 0.872±0.015*1.758±0.134 1.764±0.007 2.418±0.493 1.870±0.530 1.476±0.675**1.222±0.175**1.381±0.030**2.823±0.753 3.293±0.164 2.197±0.174組別去離子水組NaF組測定次數(shù)生茶■■■■ ■■■■■ ■ ■■■■■熟茶■■■■ ■■■■■ ■ ■■■■■6 mg∕mL 12 mg∕mL 24 mg∕mL 48 mg∕mL 96 mg∕mL 6 mg∕mL 12 mg∕mL 24 mg∕mL 48 mg∕mL 96 mg∕mL 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3時間∕min 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150 150

3.2脫礦動力學曲線的考察繪制生茶組、去離子水組、NaF組消耗HAc與時間的關系曲線，見圖1。結果表明，消耗HAc越多，脫礦速率越快，抗酸能力越弱。脫礦速率由高到低分別為低濃度生茶組、去離子水組、高濃度生茶組、NaF組，其中抗酸作用最強的是NaF組。

圖1 生茶組、去離子水組、NaF組脫礦動力學曲線

同法繪制熟茶組、去離子水組、NaF組消耗HAc與時間的關系曲線，見圖2。脫礦速率由高到低分別為高濃度熟茶組、去離子水組、低濃度熟茶組、NaF組，其中抗酸作用最強的是NaF組。

圖2 熟茶組、去離子水組、NaF組脫礦動力學曲線

4 討論

牙釉質(zhì)是由釉柱構成的無細胞結構且高度礦化的結構，而釉柱的化學結構是以富含鈣和磷的羥基磷灰石晶體為主〔7〕。在正常生理條件下口腔唾液pH為6.6～7.1，但隨著牙菌產(chǎn)酸增加，口腔唾液pH降低至5.5以下時〔8〕，牙齒中的鈣、磷被H+置換，使得羥基磷灰石晶體不穩(wěn)定甚至崩解?？顾崦摰V就是為了防止牙齒中羥基磷灰石晶體的崩解。

普洱茶是原產(chǎn)于我國西雙版納及思茅一帶的一類歷史名茶〔9〕，是由大葉種茶樹的樹葉經(jīng)加工制成，根據(jù)加工方式的不同可分為生茶與熟茶。生茶是指鮮茶葉經(jīng)過殺青、揉捻、干燥而制成的曬青毛茶，而熟茶是指鮮茶葉經(jīng)過殺青、揉捻、干燥、發(fā)酵（潮水渥堆再曬干）而制成的曬干毛茶〔10〕。普洱茶中的防齲主要成分為氟、茶多酚。茶多酚的主要成分是兒茶素、黃酮類、黃酮醇類、花青素類〔11〕等。茶多酚的防齲機制主要體現(xiàn)為：通過抑制致齲菌的生長發(fā)育和抑制不溶性葡萄糖的合成以減少細菌的黏附、聚集，從而控制菌斑，其中后者是預防齲病的關鍵〔12〕。普洱茶里的氟主要以氟化物的形式存在，氟有保護牙齒的事已達成共識，適量的氟能形成牙釉質(zhì)使羥基磷灰石生成硬度更高、穩(wěn)定性更好的氟磷灰石，增強其抗酸性，從而起到防齲的作用。曬青毛茶制成熟茶的過程中，雖然水溶性茶多酚含量下降〔13〕，但熟茶的氟含量是生茶的32.7倍〔14〕，所以低濃度的熟茶就具有明顯的抗酸脫礦作用。高濃度生茶的抗酸作用可能和茶多酚有關，濃度越高，茶多酚含量越高。另外，高濃度的熟茶抗酸作用不明顯可能和茶葉中的茶黃素、沒食子酸有關（具有酚羥基消耗HAc）。由于牙齒中的脂、糖、蛋白質(zhì)等的含量不足5%，且牙齒在脫礦處理時脂、糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)沒有明顯變化，故而可以排除這些物質(zhì)的影響。

綜上所述，高濃度的普洱生茶具有抗酸脫礦作用，低濃度的普洱熟茶具有抗酸脫礦作用，提示熟茶的防齲作用優(yōu)于生茶。

〔1〕黃繼芳.兒童齲齒病因綜合分析及防治〔J〕.中國實用醫(yī)藥，2009，4（13）：199.

〔2〕陽宏林，張紹偉，張劍.兒童口腔衛(wèi)生習慣與乳牙齲的相關性研究〔J〕.安徽醫(yī)科大學學報，2008，43（3）：348-350.

〔3〕黃璟，陳智，郭毅.局部用氟預防兒童齲齒的系統(tǒng)評價〔J〕.中國循證醫(yī)學雜志，2012，12（7）：848-854.

〔4〕劉鑫，譚理軍，李濤，等.不同種類茶對牛牙的釉質(zhì)脫礦影響的體外初步研究〔J〕.國際口腔醫(yī)學雜志，2013，40（6）：710-713.

〔5〕藍海，羅常輝.隔山消和五倍子水提物對牛切牙脫礦與再礦化的動力學研究〔J〕.中成藥，2011，33（4）：692-694.

〔6〕藍海，張星星.天然藥物紫地榆不同溶劑提取物對牛切牙脫礦的動力學研究〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學，2010，38（32）：18124-18125.

〔7〕牛少非，王雅俐.氟化物防齲機制及療效的研究進展〔J〕.臨床口腔醫(yī)學雜志，2014，30（10）：632-634.

〔8〕黃繼芳.兒童齲齒病因綜合分析及防治〔J〕.中國實用醫(yī)藥，2009，4（13）：199.

〔9〕趙龍飛，周紅杰，安文杰.云南普洱茶保健功效的研究〔J〕.食品研究與開發(fā)，2005，26（2）：114-118.

〔10〕楊文領，曾繁亮.普洱生茶、熟茶與紅茶主要化學成分的比較研究〔J〕.昆明學院學報，2012，34（3）：43-45.

〔11〕南占東，季鵬章，農(nóng)國富，等.普洱茶的保健功效及其在牙膏中的應用前景〔J〕.口腔護理用品工業(yè)，2013，23（1）：54-56.

〔12〕劉曉靜，鄭寶山，王濱濱，等.茶防齲研究進展〔J〕.地球與環(huán)境，2005，33（2）：91-96.

〔13〕呂海鵬，谷記平，林智，等.普洱茶的化學成分及生物活性研究進展〔J〕.茶葉科學，2007，27（1）：8-18.

〔14〕王白娟，趙艷，戴富強，等.云南普洱茶氟含量研究〔J〕.廣東農(nóng)業(yè)科學，2010，37（5）：45-46.

Research on Kinetics of Demineralization and Anti Acid of Pu'er Tea on Bovine Incisors

Tian Fuming,Yang Huafu,Liang Yingdong,Chen Ying,Lan Hai*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To study the influence of different concentrations of Pu'er Tea,ripe tea on the demineralization rate of bovine incisors.Methods:Through constant pH method,kinetics experiment was used to compare the effect of anti acid and demineralization of bovine incisors processed by deionized water,NaF,different concentrations of raw tea and ripe tea.Results:Demineralization rate curve shows that NaF group consumed the least amount of HAc and had the lowest demineralization rate;raw tea group（96 mg∕mL）, ripe tea group（6 mg∕mL,12 mg∕mL）had the low demineralization rate comparing with the deionized water group and the ripe tea consumed less HAc comparing with raw tea in the same concentrations.Conclusion:NaF group,enjoyed the best effect of anti acid and demineralization compared with the high concentration of raw tea group,low concentration of ripe tea group,which shows that ripe tea has better anti-caries effect than raw tea.

Pu'er tea;acid resistant;demineralization;kinetics

R285

A

2096-2266（2016）12-0047-03

10.3969∕j.issn.2096-2266.2016.12.011

（責任編輯 李 楊）

大理大學大學生科研基金資助項目（KYSX20155096）

2015-11-30

2016-01-10

田富明，2012級藥物制劑專業(yè)本科生. *通信作者：藍海，教授.