廖　楠

（遼寧省環(huán)境監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)中心遼寧沈陽110161）

高效液相色譜法測(cè)定水中微囊藻毒素

廖楠

（遼寧省環(huán)境監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)中心遼寧沈陽110161）

微囊藻毒素本身含有七肽類干毒素成分，促癌作用極為明顯，容易為居民用水帶來較大威脅。對(duì)此問題，較多學(xué)者致力于構(gòu)建相應(yīng)的檢測(cè)體系，使水中的微囊藻毒素得以確定，而所選用的檢測(cè)方法主要以高效液相色譜為主，其可依托于自身重現(xiàn)性、靈活性以及準(zhǔn)確性等優(yōu)勢(shì)，使微囊藻毒素測(cè)定更為精確。本文主要通過一定的試驗(yàn)方式，判斷微囊藻毒素測(cè)定中高效液相色譜法的有效性。

高效液相色譜法；微囊藻毒素；測(cè)定

微囊藻毒素測(cè)定中HPLC的應(yīng)用極為常見，其可直接引入如HPLC-FL、HPLV-UV或HPLC-CL等方式，其中前兩種方式在應(yīng)用中盡管可滿足pg級(jí)檢測(cè)限要求，然而整個(gè)操作過程中較為復(fù)雜，且有較多的雜質(zhì)干擾，所以不具備較強(qiáng)的實(shí)用性。而后者在應(yīng)用中較為簡(jiǎn)便易行，但因藻毒素在識(shí)別中容易因干擾問題而影響測(cè)定準(zhǔn)確度。因此，本文在試驗(yàn)過程中對(duì)HPLC的應(yīng)用考慮將這三種方式進(jìn)行配合應(yīng)用，可使水中微囊藻毒素得以有效檢測(cè)。

1　水中微囊藻毒素檢測(cè)中的HPLC應(yīng)用試驗(yàn)分析

1.1試劑與儀器的選擇與色譜條件設(shè)定

試驗(yàn)中在試劑選擇方面，主要以MC-YR、MC-RR、MC-LR為標(biāo)樣，且選取相應(yīng)的雙蒸水、甲醇、三氟乙酸等作為試劑。在儀器選用方面，可將Agilent1100型設(shè)備引入，并將其他相應(yīng)的超聲波儀器、萃取柱以及可調(diào)氮吹儀等儀器引入。另外，試驗(yàn)中所設(shè)定的色相分析條件主要為，色譜柱恒溫箱、進(jìn)樣量分別設(shè)定在25℃與20uL，而甲醇主要以45：55（V/V）為主，且在流動(dòng)相方面，使水溶液包含0.05%的三氟乙酸。同時(shí)，做好紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的設(shè)定，在此基礎(chǔ)上使MC-YR、MC-RR、MC-LR等峰面積能夠在譜圖中體現(xiàn)出來，最后根據(jù)標(biāo)樣峰面積與譜圖中顯示的峰面積比值，便可判定藻毒素在水樣中的濃度[1]。

1.2相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)液的制備

試驗(yàn)過程中，可選擇2.00mL甲醇，使其與0.100mg藻毒素進(jìn)行相溶，對(duì)于該溶液應(yīng)保證在放置中做好避光冷凍工作，其可作為儲(chǔ)備液。因在標(biāo)準(zhǔn)液制備中，完全選用甲醇，將存在測(cè)定時(shí)間較短問題，容易影響最終結(jié)果。所以可考慮，在甲醇水溶液方面控制于55%，這樣藻毒素測(cè)定中，可使其出峰時(shí)間保持適中，且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度較高。

1.3實(shí)際樣品的制備

在樣品制備中，主要需考慮到銅綠微囊藻冷凍、藻毒素提取以及樣品制備等問題。如在銅綠微囊藻方面，需將其置于一定環(huán)境下進(jìn)行冷凍干燥，確保其在離心后能夠使沉淀物形成干藻粉。而在提取藻毒素過程中，需選擇10mL蒸餾水，將干藻粉置于其中，此時(shí)通過超聲波儀器完成清液的提取，并對(duì)清液做好存儲(chǔ)工作。另外，在制備樣品過程中，主要需將制備好的清液進(jìn)行過濾，在此基礎(chǔ)上使10mL甲醇加入濾液中。此時(shí)需將萃取柱引入，使水樣按照一定的流速?gòu)牡妮腿≈M(jìn)行流過，以此達(dá)到富集濃縮的目標(biāo)。完成這些操作后，要求對(duì)樣品利用甲醇水進(jìn)行凈化，直至萃取柱被吹干后，將過濾后的溶液收集于瓶?jī)?nèi)。最后，對(duì)甲醇水溶液進(jìn)行分析，完成微囊藻毒素濃度判定過程[2]。

2　HPLC測(cè)定微囊藻毒素的結(jié)果分析

2.1流動(dòng)相選擇與靈敏度判斷

通過試驗(yàn)測(cè)定分析，在等度洗脫情況下，MC出峰在甲醇體積具有較高的分?jǐn)?shù)時(shí)較早，以MC-RR為典型，其受到的干擾較為明顯，但在甲醇體積分?jǐn)?shù)減小情況下，出峰時(shí)間較晚，尤其MV-LR較為明顯。另外，當(dāng)流動(dòng)相中甲醇體積分?jǐn)?shù)為其55%情況下，無論MC-YR、MC-RR或MC-LR，在譜圖中都保持平滑的譜線，且分離效果較為明顯，雜質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾影響較小。而從靈敏度情況看，根據(jù)試驗(yàn)中的色譜分析條件，測(cè)定中可發(fā)現(xiàn)三種藻毒素都具有較高的分離度，假定以3為信噪比，可測(cè)得的絕對(duì)量檢測(cè)限可達(dá)到1ng。由此可見，在流動(dòng)相、靈敏度等方面，HPLC測(cè)定方法的應(yīng)用都可起到明顯的效果。

2.2樣品處理優(yōu)化效果分析

試驗(yàn)過程中選取甲醇水溶液進(jìn)行雜質(zhì)的清除，能夠判定在甲醇水溶液具有較高濃度的情況下，很容易使微囊藻毒素流失，不利于檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的提高。所以在試驗(yàn)中考慮所選用的甲醇溶液水控制在10%用量上。另外在洗脫液方面，試驗(yàn)中主要以100%甲醇為主，這樣可使?jié)饪s時(shí)間得以縮短，雜質(zhì)干擾問題因此得到解決，同時(shí)回收率與準(zhǔn)確度等都可得到保障。所以HPLC方法運(yùn)用下，樣品處理優(yōu)化效果也較為明顯。

2.3HPLC方法精密度分析

在微囊藻毒素測(cè)定過程中，HPLC方法運(yùn)用下可對(duì)其加標(biāo)回收率進(jìn)行判定，可得到MC-YR、MC-RR、MC-LR都超出94.0%的回收率。另外，在樣品分析過程中也可發(fā)現(xiàn)，HPLC方法測(cè)定微囊藻毒素過程中，檢測(cè)限可維持在0.01ug/L～0.05ug/L。由此得出HPLC在精密度、回收率等方面都較高[3]。

3　結(jié)語

微囊藻毒素的測(cè)定是保證水質(zhì)的關(guān)鍵所在。實(shí)際測(cè)定中高效液相色譜法的應(yīng)用可取得良好的效果，由文中試驗(yàn)可發(fā)現(xiàn)，HPLC方法應(yīng)用下，流動(dòng)相、靈敏度、樣品處理優(yōu)化以及精密度等方面都可得以保障，有利于微囊藻毒素的準(zhǔn)確測(cè)定。

[1]施儉,景澍閩,陸峰,向華.在線固相萃取-二維高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水中微囊藻毒素-LR[J].凈水技術(shù),2013,03: 52-54+58+66.

[2]林瑤,張瓊,李一丹.固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定水中痕量微囊藻毒素[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2010,09:2174-2175.

[3]馮桂學(xué),劉莉,王明泉,孫韶華,賈瑞寶.在線固相萃取-液相色譜法測(cè)定水中3種微囊藻毒素[J].化學(xué)分析計(jì)量,2014,06:34-36.

遼河流域水環(huán)境安全監(jiān)控與監(jiān)測(cè)體系建設(shè)(課題編號(hào)：2012ZX07505-003)。