徐玉玲，吳南軒，李鵬程，伍蕊嗣，賈裕杰，劉 濤

（成都大學藥學與生物工程學院，四川 成都 610106）

基于化學成分臨床利用量的不同產地黃柏質量評價

徐玉玲，吳南軒，李鵬程，伍蕊嗣，賈裕杰，劉 濤

（成都大學藥學與生物工程學院，四川 成都 610106）

采用小檗堿臨床利用量對黃柏藥材的質量進行再評價研究。通過正交試驗優(yōu)選黃柏小檗堿最佳臨床提取工藝，根據最佳提取工藝采用HPLC法測定5批不同產地黃柏小檗堿含量，然后計算其臨床利用量。黃柏小檗堿最佳臨床提取工藝為加藥材10倍量的水提取3次，每次1.5h。貴州、陜西、湖北、天津、新疆的小檗堿臨床利用量（g/100g）分別為11.10，7.30，1.35，1.30，1.40g。該文建立的方法將中藥材中的有效成分與臨床實際利用情況相聯(lián)系，為黃柏及其他的中藥材品質評價提供新思路。

黃柏；小檗堿；臨床利用量；質量評價

0 引 言

黃柏為一種常用中藥，是蕓香科植物黃皮樹（Phellodendron chinense Schneid.）的干燥樹皮，具有清熱瀉火、解毒退虛熱之功效，小檗堿為其主要成分之一[1]。小檗堿為臨床上常用的一種廣譜抗菌藥，主要用于菌痢、胃腸炎、癰腫等細菌性感染[2]。研究證明小檗堿還具有抗腫瘤、抗心律失常、降血糖、將壓等作用[3]。目前藥材質量評價主要以化學有效成分含量為指標，但一些研究發(fā)現(xiàn)有些有效成分在臨床上利用量不高，出現(xiàn)了“質優(yōu)用劣”的現(xiàn)象?！吨袊幍洹?015版一部里收載的中藥材有效成分含量為（過三號藥典篩）藥粉含量，即用部分藥材含量來作為藥材的整體含量，一些研究表明，取過篩后的細粉進行含量測定，所得結果并不能完全代表藥材整體真實的含量。因此劉濤等[4]提出用藥材真實含量結合有效成分臨床利用量來評價藥材的質量?！爸兴幊煞峙R床利用量”是指藥材成分在臨床應用時，藥材中的化學成分可被臨床使用時的使用量?；凇爸兴幊煞峙R床利用量”的中藥材藥用質量評價指標，符合中醫(yī)藥臨床應用特點，是體現(xiàn)中藥特色的中藥質量評價方法。本文對5個產地的黃柏采用小檗堿臨床利用量的方法進行品質考察，對其有效成分在臨床上的應用具有重要參考價值，也為其他藥材的品質評價提供了一種新思路。

1 儀器與試劑

iChrom P5100型高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司），BS-6KH型電子天平（上海友聲衡器有限公司），F(xiàn)A2004型電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司生產）。黃柏藥材購自各地大型藥材市場及藥房,共6個樣品，經成都大學鑒定四川、貴州、天津、陜西、湖北、新疆產地購買的實驗藥材為黃柏干燥樹皮（詳情見表5）；其中四川黃柏（批號20150523）購自成都市荷花池中藥材市場，用于工藝條件研究。小檗堿對照品（批號150623-160724），由中國食品藥品檢定研究所提供。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

長期以來，人們習用水作為溶媒煎煮黃柏藥材，供患者服用，因此結合臨床實際應用，本實驗用水作為提取溶媒，不超過3次提取次數和1.5h提取時間對黃柏藥材的臨床利用量進行考察。

2.1 黃柏小檗堿含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱GS-120-5-C18-AP（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈-0.1%磷酸（ν∶ν，50∶50）（100 mL加0.1g十二烷基磺酸鈉），檢測波長265nm，柱溫室溫，流量1mL/min。

2.1.2 對照品溶液的制備

精密稱取小檗堿適量，用2.1.1的流動相稀釋成質量濃度為0.0743mg/mL的溶液，其 HPLC圖譜如圖1（a）所示。

圖1 黃柏小檗堿的HPLC圖譜

2.1.3 供試品溶液的制備

供試品溶液1 精密稱定過三號篩的粉末約0.1 g，置于100 mL容量品中，加流動相80 mL超聲處理，40min冷卻，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

供試品溶液2 精密稱定供試品溶液1制備粉碎時未過三號篩的部分藥材約0.1g，置于100mL容量品中，加流動相80mL超聲處理，40min冷卻，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

供試品溶液3 精密量取2.2.2、2.2.3、2.3.2項下的提取2mL至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再按2.1.1的色譜條件測定，其 HPLC圖譜如圖1（b）所示。

2.1.4 精密度試驗

精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液10 μL，按照2.1.1的色譜條件重復進樣6次，測定其峰面積，計算RSD為1.04%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 加樣回收率試驗

精密吸取已知含量的黃柏提取液1mL于50mL量瓶中，精密加入對照品溶液3mL（1.01mg/mL），按2.1.3中供試品溶液2的方法制成供試品溶液，平行6份，按2.1.1的色譜條件分別測定鹽酸小檗堿峰面積，結果平均回收率為98.96%，RSD為1.55%，表明本方法回收率良好。結果見表1。

表1 鹽酸小檗堿回收率試驗結果

2.2 正交試驗設計優(yōu)選提取工藝

2.2.1 因素及水平的選擇

以水為提取溶媒[5-6]，選取溶媒用量、提取次數、提取時間為考察因素，以提取液中小檗堿的量為考察指標[7-8]，采用L9（34）正交表安排實驗。其因素水平表如表2所示。

表2 黃柏小檗堿臨床提取工藝正交試驗因素水平

2.2.2 正交試驗設計及結果

分別取9組四川黃柏藥材（每組80g）按照正交試驗設計表進行實驗，測量提取液的體積，根據2.1.1和2.1.3的步驟進行含量測定，以小檗堿含量為指標進行分析[9-10]。結果如表3所示，方差分析如表4所示。

表3 黃柏小檗堿提取工藝正交試驗

表4 方差分析表

由表3可得，水的用量、提取次數以及提取時間3個因素對小檗堿的提取影響程度不同，R值大小依次為RC>RB>RA，提取時間對于含量的影響最大。表4可得，水的用量（A）對實驗結果有顯著性影響，提取次數（B）和提取時間（C）對實驗結果有極顯著性影響，根據此分析結果，選擇最佳提取工藝為A3B3C3，即用10倍藥材量的水提取3次，每次1.5h。

2.2.3 提取工藝驗證

取3組黃柏藥材，1、2組80g，第3組160g，1、2組分別加入800 mL水，第3組加入1 600 mL水，每組提取3次，每次1.5h。測定提取液的體積，計算小檗堿的量，結果如表5所示。

表5 黃柏小檗堿提取工藝驗證

結果表明，3組驗證試驗小檗堿的量分別為6.388 9，6.560 7，13.590 1 g，表明所選擇的提取工藝穩(wěn)定、可行。

2.3 不同產地黃柏小檗堿真實含量以及臨床利用量測定

2.3.1 不同產地黃柏小檗堿真實含量測定

按2.1.3供試品溶液制備方法和2.1.1的色譜條件分別測定5批不同產地黃柏，其通過三號藥典篩的粉末與未通過的部分藥材的小檗堿含量，然后計算出黃柏整體藥材小檗堿含量，即為藥材真實含量。結果如表7所示。

表6 黃柏樣品來源表

表7 不同產地黃柏小檗堿的真實含量測定結果1）

2.3.2 不同產地黃柏小檗堿臨床利用量測定

分別取每批不同產地的黃柏藥材2組，每組100 g，分別加入1 000 mL水，每組提取3次，每次1.5h。測定提取液的體積，計算小檗堿的臨床利用量，結果如表8所示。

表8 不同產地黃柏小檗堿臨床利用量測定結果1）

2.3.3 實驗結果

從表7中可以得知，貴州與陜西的黃柏小檗堿的真實含量最高，分別為15.7%、16.4%；湖北與新疆的相差不大，分別為3.42%、5.07%；天津的最低，其小檗堿真實含量為1.56%。藥材的真實含量低于過三號藥典篩的粉末的含量。

從表8中可以得知，不同產地黃柏小檗堿的臨床利用量各不相同，臨床利用量最高的是貴州，為11.10 g/100 g；其次是陜西的黃柏臨床利用量，為7.30 g/100 g；天津、湖北、新疆的臨床利用量相差不大，分別為1.30，1.35，1.40g/100g。

2.3.4 結 論

由表7可知，5個產地黃柏的真實含量比藥典中的方法低，將會對提取轉移率的計算產生一定的影響，故在計算提取轉移率時，采用真實含量計算較好。由表8可知，陜西的黃柏含量最高，但提取轉移率較低，而天津的黃柏含量最低，轉移率卻較高，表明藥材含量的高低與提取轉移率并非成正比關系，因此，在“真實含量”以及提取轉移率基礎上提出的“中藥成分臨床利用量”評價中藥品質的方法具有一定意義。中藥成分臨床利用量[11-12]不僅可以反映藥材真實含量和轉移率的高低，同時對該成分在臨床上實際被利用的情況具有重要參考價值，為中藥材的品質評價提供了一種新思路。

3 結束語

本文采用小檗堿臨床利用量對黃柏藥材進行質量評價，測定貴州、陜西、湖北、天津、新疆等地小檗堿的真實含量和臨床利用量，建立了中藥有效成分與臨床實際利用的關系。在“真實含量”以及提取轉移率基礎上提出的“中藥成分臨床利用量”評價中藥品質的方法就具有一定的優(yōu)勢?！爸兴幊煞峙R床利用量”是指藥材成分在臨床應用時，藥材中的化學成分可被臨床使用時利用的量[4]。中藥成分臨床利用量不僅可以反映指標成分或有效成分含量以及提取轉移率的高低，同時對其在臨床上實際被利用的情況具有重要參考價值，為中藥材的品質評價提供了一種新的方法。

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（編輯：徐柳）

Study on quality evaluation for cortex phellodendri from different habitats based on the clinical dosage of chemical composition

XU Yuling，WU Nanxuan，LI Pengcheng，WU Ruisi，JIA Yujie，LIU Tao
（School of Pharmacy and Bioengineering，Chengdu University，Chengdu 610106，China）

Re-evaluation and restudy on the quality of cortex phellodendri were carried out based on the clinical dosage of berberine.Optimum clinical extraction process for berberinein cortex phellodendri was preferentially selected via orthogonal test，and HPLC method was adopted to measurethecontentof5 batchesofberberinein cortexphellodendrifrom differenthabitats according to optimum extraction process，so as to calculate its clinical dosage.Optimum clinical extraction process for berberinein cortex phellodendri:add water（10 times of medicinal materials）and extract for three times（1.5h/time）.Clinical dosage（g/100g）of berberine in Guizhou，Shaanxi，Hubei，Tianjin and Xinjiang is respectively 11.10 g，7.30 g，1.35 g，1.30 g and 1.40 g.The method in this paper is related to the effective components of medicinal materials and the clinical practice，which provides a new thought for quality evaluation and study of Chinese medicinal materials and cortex phellodendri.

cortex phellodendri；berberine；clinical dosage；quality evaluation

A

：1674-5124（2016）12-0045-04

10.11857/j.issn.1674-5124.2016.12.010

2016-04-12；

：2016-06-09

四川省千人計劃項目（2013332）

徐玉玲（1975-），女，云南曲靖市人，高級工程師，碩士，主要從事中成藥開發(fā)及再評價研究。

劉 濤（1976-），男，四川南充市人，研究員級高級工程師，博士，主要從事中成藥新藥開發(fā)及再評價工作。