侯麗麗，韓立，鞏忠福，晏永新

( 1. 山西省獸藥監(jiān)察所，太原 030027；2. 河南省獸藥監(jiān)察所，鄭州 450008；3. 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081；4. 江西新世紀民星動物保健品有限公司，南昌 330096)

黨參多糖口服液對大鼠的長期毒性研究

侯麗麗1，韓立2，鞏忠福3，晏永新4

( 1. 山西省獸藥監(jiān)察所，太原 030027；2. 河南省獸藥監(jiān)察所，鄭州 450008；3. 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081；4. 江西新世紀民星動物保健品有限公司，南昌 330096)

為了解長期使用黨參多糖口服液對機體的毒性反應，以便指導臨床長期用藥的安全性。大鼠灌胃給藥黨參多糖口服液，在給藥4周和停藥2周內(nèi)，觀察大鼠一般行為活動等情況，進行血液學、血液生化學和主要臟器病理學檢查，考察黨參多糖口服液給藥的長期毒性。結(jié)果顯示，各組大鼠在給藥期間和恢復期內(nèi),一般情況和行為活動、糞便等均無異常變化，血液學、血液生化學和主要臟器病理學檢查，均無明顯變化。因此，連續(xù)大鼠灌胃給藥黨參多糖口服液未見明顯毒性反應，說明黨參多糖口服液具有較高的臨床用藥安全性。

黨參多糖口服液；大鼠；長期毒性

黨參為臨床常用的傳統(tǒng)補益中藥，在我國產(chǎn)地眾多，主要分布于山西、陜西、寧夏等地，資源豐富。黨參味甘性平，具有補中益氣，健脾益肺之功效，用于畜禽脾胃虛弱，少食腹瀉，肺虛咳喘，體倦無力，氣虛垂脫等癥[1]。黨參的主要成分包括多糖、黨參苷、三萜類成分等，現(xiàn)代藥理研究表明，黨參具有調(diào)節(jié)血糖、促進造血機能、降壓、抗缺氧、耐疲勞、增強機體免疫力、調(diào)節(jié)胃收縮及抗?jié)兊榷喾N作用[2]。其主要活性成分之一黨參多糖具有免疫調(diào)節(jié)、消除自由基、造血、抗疲勞及提高動物生產(chǎn)性能等作用[3-4]。黨參多糖口服液對動物的長期用藥毒性目前未見報道。本試驗擬研究黨參多糖口服液對大鼠的長期毒性，以了解長期使用黨參多糖口服液對機體的毒性反應，指導臨床長期用藥的安全性。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 清潔級SD種大鼠80只，體重80～100 g, 雌雄各半，由江西中醫(yī)學院實驗動物中心提供。1.2 藥品、試劑與儀器 黨參多糖口服液(100 mL/瓶，2 g生藥/mL)，江西新世紀民星動物保健品有限公司，批號：20100501；血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)均由濟南希森美康醫(yī)用電子有限公司提供，批號：ZG6004；十萬分之一電子分析天平(AB204-N，METTLER TOLEDO)；全自動生化分析儀(Sysmex chemix-180，日本FURUNO ELECTRIC)；血細胞計數(shù)儀(SWELAB AC900+，瑞典Boule Medical AB)。

1.3 方法 將大鼠隨機分為高、中、低劑量組及對照組，每組20只。試驗組給藥劑量為1 mL/100 g體重，每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥4周，對照組給予等體積生理鹽水。每天觀察動物精神狀態(tài)、行為、活動、毛色、二便等一般體征，每7 d稱重1次，并依體重變化調(diào)整藥量。給藥結(jié)束后，每組取14只大鼠，禁食12 h，進行血液學指標檢查、血液生化學指標檢查，系統(tǒng)尸檢和病理組織學檢查。各組余下動物停藥進行可逆性觀察2周后，同前批動物一樣進行處理[5-6]。

1.4 觀察和檢測指標

1.4.1 一般觀察 每天觀察并記錄各組動物一般行為活動、糞便、毛發(fā)等情況。

1.4.2 血液學指標檢查 大鼠尾靜脈取血，用血細胞計數(shù)儀測定血紅蛋白(HGB)、紅細胞(RBC)、血小板(PLT)、白細胞(WBC)及分類。

1.4.3 血液生化學指標檢查 大鼠采血，分離血漿，用生化分析儀測定血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)等指標。

1.4.4 系統(tǒng)尸檢和病理組織學檢查 對心、肝、脾、肺、腎進行稱重及肉眼觀察有無異常，分別計算每100 g動物體重的臟器比重量( g/l00 g體重)即臟器系數(shù)[7]，并對上述臟器用10%福爾馬林固定、切片厚5 μm、H·E染色，用200倍顯微鏡觀察進行病理組織學檢查。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)經(jīng)過方差齊性檢驗，用均數(shù)±標準差表示，組間差異比較用獨立樣本t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 一般觀察 給藥期間和停藥2周內(nèi)，各組大鼠精神、行為、活動、毛色、二便等一般體征均未見異常，也未出現(xiàn)因藥物毒性而致死亡的情況。

2.2 體重 各給藥組，給藥4周與停藥2周后的體重明顯增長，經(jīng)t檢驗，與對照組比較無顯著變化(P>0.05)(表1-表2)。

表1 黨參多糖口服液對大鼠給藥4周的體重增長的影響±s)

同列數(shù)據(jù)標注字母不同者差異顯著，以下表同。

表2 黨參多糖口服液對大鼠停藥2周的體重增長的影響±s)

2.3 血常規(guī)指標變化 各給藥組，給藥4周后與停藥2周后的紅細胞(RBC)計數(shù)、白細胞(WBC)計數(shù)、白細胞分類(DC)、血紅蛋白(HGB)含量的檢測結(jié)果和凝血時間，經(jīng)t檢驗，與對照組比較均無明顯變化(P>0.05)(表3)。

表3 黨參多糖口服液對大鼠血液學指標的影響±s)

2.4 血清生化指標變化 各給藥組，給藥4周后與停藥2周后AST、ALT、Crea、 BUN的檢測結(jié)果，經(jīng)t檢驗，與正常對照組比較無明顯變化(P>0.05)(表4)。

表4 黨參多糖口服液對大鼠血液生化學指標的影響±s)

2.5 系統(tǒng)尸檢和病理組織學 給藥4周后與停藥2周后，動物尸體解剖，肉眼逐個觀察各臟器，未見異常變化。取大鼠心、肝、脾、肺、腎分別稱重，計算出臟器系數(shù)，各組之間的臟器系數(shù)無明顯變化(P>0.05)(表5)。各臟器病理組織學檢查未發(fā)現(xiàn)異常。

表5 黨參多糖口服液對大鼠給藥的臟器系數(shù)的影響 ±s)

圖1 主要臟器組織病理切片(第1～5行分別為心、肝、脾、肺、腎，第1～4列分別為對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組)

3 討論與小結(jié)

長期毒性試驗可以觀察連續(xù)反復給藥時，實驗動物出現(xiàn)的毒性反應、劑量與毒性效應的關(guān)系、毒性靶器官、毒性反應的性質(zhì)和程度、毒性反應是否可逆等；還可觀察在連續(xù)反復給藥時，動物的耐受量、無毒反應劑量、毒性反應劑量及安全范圍；并可了解毒性產(chǎn)生時間、達峰時間、持續(xù)時間及可能反復產(chǎn)生毒性反應的時間，有無遲發(fā)毒性反應、有無蓄積毒性或耐受性等[8]?？梢姡L期毒性試驗在產(chǎn)品的安全性評價中起到非常重要的作用。

何國耀[9]等以黨參莖葉為研究對象，考察了黨參莖葉的急、慢性毒性，血液學檢查。結(jié)果表明，紅細胞數(shù)、血色素、非蛋白氨、麝香草酚濁度、硫酸鋅濁度、谷草和谷丙轉(zhuǎn)氨酶等均在正常范圍，剖檢未見明顯的肉眼變化，電鏡檢查組織細胞正常。表明黨參莖葉的毒性甚微，安全范圍很大，與本試驗結(jié)果基本一致。另外，胡麗萍等[10]研究了以黨參為主藥的溫經(jīng)顆粒對大鼠的長期毒性反應，結(jié)果提示該藥臨床應用是安全的，但應注意使用劑量和療程。

試驗所采集的數(shù)據(jù)包括健康狀況、體重情況，以及血液學、血液生化學等參數(shù),黨參多糖口服液大鼠連續(xù)給藥4周和停藥2周后，高、中、低劑量組均未見明顯的毒性反應。試驗大鼠在健康狀況、體重情況，以及可能的急性反應、血液學、血液生化學等參數(shù)指標與對照組相比無顯著性差異，剖檢和組織學觀察主要內(nèi)臟器官的形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)均未發(fā)現(xiàn)異常變化，故未發(fā)現(xiàn)黨參多糖口服液明顯的長期毒性。試驗結(jié)果表明黨參多糖口服液安全范圍大，具有較高的臨床用藥安全性。

[1] 中國獸藥典委員會主編.中華人民共和國獸藥典(2010年版二部)[S].

[2] 王潔,鄧長泉,石磊,等.黨參的現(xiàn)代研究進展[J]. 中國醫(yī)藥指南, 2011, 9 (31):279-281.

[3] 陳克克,王喆之.黨參多糖的研究進展[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學研究進展, 2007, 7 (4):635-637.

[4] 許會軍,潘永全.中藥添加劑復方黨參多糖散在肉仔雞日糧中的應用效果[J].中國飼料,1997,(4):17-18.

[5] 陳奇主編.中藥藥理研究方法學.北京:人民衛(wèi)生出版社.2006年:110-113.

[6] 王林麗,李卓恒,呂金勝,等.益精靈口服液大鼠長期毒性實驗研究[J].中國藥業(yè), 2014(19):34-35.

[7] 王林麗,李卓恒,呂金勝,等.乳寧口服液大鼠長期毒性試驗研究[J].中國藥業(yè) ,2013, 22(14):14-15.

[8] 許迪,孔利佳,杜佐華,等.大鼠長期毒性試驗質(zhì)量控制探討[J].中國比較醫(yī)學雜志,2010, 20(1):61-63.

[9] 何國耀,王建國,郭福存,等.黨參莖葉的急、慢性毒性試驗[J].中國獸醫(yī)科學, 1988(1): 51-52.

[10]胡麗萍,張惠穎,馬杰.溫經(jīng)顆粒動物長期毒性試驗.全國藥物毒理學會議,2007:312-312.

(編輯：陳希)

Effects ofCodonopsispilosulaPolysaccharide Oral Liquids on the Long-term Toxicity of Rats

HOU Li-li1, HAN Li2,GONG Zhong-fu3,YAN Yong-xin4

(1.ShanxiInstituteofVeterinaryDrugControl,Taiyuan030027,China;2.HenanInstituteofVeterinaryDrugControl,Zhengzhou450008,China；3.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081,China；4.Jiangxinewcenturyminxinganimalhealthproductsco.,Ltd,Nanchang330096,China)

In order to understand theCodonopsispilosulapolysaccharide oral liquids’ toxic reaction and degree on organism of rats for the clinical medication safety of long-term use. Rats were givenCodonopsispilosulapolysaccharide oral liquids by intragastrical administration, at the end of 4 weeks and within 2 weeks, observing the general behaviour of rats, using techniques of hematology and biochemical experimental, investigating the long-term toxicity ofCodonopsispilosulapolysaccharide oral liquids. The results showed that the general conditions, activities and faeces of the rats that both in the dosing period and recovery period had no abnormal change, hematology, biochemical experiment and pathological examination of main organs had no obvious abnormal change. Therefore, continuous intragastrical administration had no obvious toxicity, which showed theCodonopsispilosulapolysaccharide oral liquids were safety.

Codonopsispilosulapolysaccharide oral liquids; rats; long-term toxicity

侯麗麗，高級獸醫(yī)師，從事中獸藥檢測及方法研究工作。E-mail:kyzp_090@163.com

2016-07-29

A

1002-1280 (2016) 12-0040-05

S853.74