杜小紅，陳列光，李空飛，張碧波

白血病患者血清VEGF和sFas水平及其相關(guān)性分析

杜小紅，陳列光，李空飛，張碧波

目的分析白血病患者血清血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）和sFas水平及二者的相關(guān)性。方法運用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法對34例白血病患者行血清VEGF和sFas水平同步檢測，并分析其水平的相關(guān)性。結(jié)果難治/復(fù)發(fā)組與初發(fā)組VEGF和sFas水平較緩解組及正常對照組高（＜0.05），難治/復(fù)發(fā)組較初發(fā)組高（＜0.05），緩解組VEGF和sFas水平與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。VEGF與sFas呈正相關(guān)。結(jié)論聯(lián)合檢測血清VEGF與sFas水平可用于血病的病理狀態(tài)及轉(zhuǎn)歸的評價。

白血病；血管內(nèi)皮細胞生長因子；sFas

血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）與血液系統(tǒng)惡性腫瘤存有緊密關(guān)聯(lián)性，其除了以旁分泌方式促進血管內(nèi)皮細胞血管新生的作用之外，還可促進其增強化療藥物相應(yīng)抵抗作用，最終產(chǎn)生細胞耐藥。Fas/FasL為一對膜蛋白分子，在腫瘤細胞凋亡進程中起到一定作用[1]?？扇苄訤as（sFas）是一種跨膜區(qū)缺乏，且具有可溶性的Fas分子，能以競爭性方式，與Fas形成FasL，進而阻斷由Fas介導(dǎo)所造成的細胞凋亡。白血病細胞多藥耐藥（MDR）是造成白血病化療失敗關(guān)鍵性因素，而MDR的發(fā)生，則與凋亡調(diào)控障礙緊密相關(guān)[2]。在白血病的發(fā)生與發(fā)展中，sFas、VEGF與之密切相關(guān)[2-3]，但在二者聯(lián)合檢測方面研究卻較少。本研究采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）法測定白血病患者的VEGF和sFas水平，并分析了二者相關(guān)性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年3月至2016年3月在寧波大學(xué)附屬鄞州醫(yī)院診治的白血病患者34例，排除嚴重活動性感染、糖尿病、肝腎功能異常及糖尿病者。其中男18例，女16例；年齡16～81歲，平均（36.4±2.6）歲。初發(fā)12例，難治/復(fù)發(fā)9例，完全緩解/部分緩解13例。另選取同期健康體檢者30例，設(shè)為對照組，其中男14例，女16例；年齡20～69歲，平均（25.4±1.6）歲。

1.2 標本采集于清晨空腹狀態(tài)下抽取靜脈血5 ml，不抗凝，并于2 h內(nèi)用離心機2 000 r/min離心15 min，取血清標本，并將標本完成分裝，于―18℃凍存，不可反復(fù)凍融。

1.3 sFas和VEGF測定運用ELISA法分別對sFas及血清VEGF水平進行測定，選用武漢尚柏生物技術(shù)有限公司試劑盒，依據(jù)說明書步驟，完成各項操作。選用美國Therrno公司的MuLtiskanMK3，BIO-TEK公司的ELX800酶標儀。平衡血小板數(shù)差異所致系統(tǒng)誤差，每份樣本血小板計數(shù)（PLT）優(yōu)化其VEGF測定值，最終將標化值VEGF/PLT（pg/106），作為本次的研究指標。1.4統(tǒng)計方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示，多組比較采用方差分析，多重比較采用LSD-檢驗；兩組比較采用檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 sFas、血清VEGF在白血病的表達

難治/復(fù)發(fā)組、初發(fā)組VEGF和sFas水平均高于對照組（均＜0.05）；難治/復(fù)發(fā)組VEGF和sFas水平高于初發(fā)組（均＜0.05）；緩解組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。見表1。

2.2 sFas、血清VEGF與乳酸脫氫酶（LDH）的關(guān)系LDH中位值設(shè)為188U/L，將患者分為A組（LDH≤188 U/L）和B組（LDH＞188 U/L），A組sFas、VEGF/ PLT低于B組（均＜0.01）。見表2。

2.3 sFas與血清VEGF的相關(guān)性VEGF與sFas呈正相關(guān)（=0.662，＜0.01）。

3 討論

盡管化療方案和新化療藥物的日益增多，但諸多患者依然存有不同程度的細胞耐藥狀況，究其原因多為白血病細胞對化療藥物誘導(dǎo)抵抗的細胞凋亡。

VEGF作為正性血管生成調(diào)節(jié)因子，具較強的調(diào)節(jié)功能，其除了與白血病相應(yīng)發(fā)生、發(fā)展有關(guān)外，還與腫瘤細胞耐藥有關(guān)。在凝血過程中，血小板可釋放VEGF，將其融入至血清中，所以對于血小板數(shù)目而言，其對血清VEGF水平具有明顯影響。本研究把VEGF/PLT作標化值顯示，難治/復(fù)發(fā)組血清VEGF水平高于正常對照組和緩解組（＜0.05），而緩解組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。提示VEGF可能與腫瘤細胞耐藥有關(guān)。有研究報道，將化療藥物及VEGF加入至CMK86細胞系中孵育，結(jié)果在整個未做處理的VEGF對照組中，經(jīng)VEGF處理的CMK86細胞凋亡分數(shù)，所占比重為75%～80%，表明VEGF可抑制化療藥物誘導(dǎo)機制下的CMK86細胞凋亡[4]。有研究報道，在人早幼粒白血病細胞（HL-60）中轉(zhuǎn)染入VEGF165 cDNA后，HL-60細胞在集落及增殖所形成的活力顯著增加[5-6]。通過抑制VEGF，可提升白血病細胞針對所使用化療藥物的敏感性。

表14 組sFas及血清VEGF水平比較

Fas是一種跨膜糖蛋白，為腫瘤壞死因子的一部分。若Fas與抗Fas相結(jié)合，可將死亡信號傳遞給靶細胞內(nèi)，激活Caspase酶原，造成敏感Fas陽性細胞，出現(xiàn)一定程度的凋亡狀況。如若Fas存有基因轉(zhuǎn)錄異常，可造成跨膜區(qū)出現(xiàn)缺乏Fas蛋白狀況，脫落于細胞膜中，形成sFas，其通過競爭性方式結(jié)合于膜Fas，最終便構(gòu)成了FasL，對Fas介導(dǎo)相應(yīng)細胞凋亡具有阻斷作用[7]。本研究顯示，難治/復(fù)發(fā)組與初發(fā)組sFas水平均高于對照組（均＜0.05），難治/復(fù)發(fā)組高于初發(fā)組（＜0.05），緩解組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。至此，可將sFas作為凋亡抑制因子，作用于白血病細胞MDR中，當(dāng)出現(xiàn)持續(xù)升高的sFas，提示對化療不敏感，或細胞凋亡機制處于不利啟動狀態(tài)，造成細胞耐藥[8-9]。sFas、VEGF與白血病MDR間均存在不同程度的相關(guān)性。本研究顯示，白血病患者sFas的表達與VEGF呈正相關(guān)（＜0.05），表明二者抗凋亡機制存在一定關(guān)系，但仍然具有不清晰的相關(guān)機制，需要對其開展深入的研究工作。

表2 兩組sFas、血清VEGF間比較

[1]劉華,梁玉麗.慢性阻塞性肺病患者血清sFas和VEGF濃度的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2014,11(5):37-40.

[2]王心明,陳云波,賈明庫,等.可溶性Fas與VEGF及TIMP-1表達在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系[J].中國生物制品學(xué)雜志,2016,19(6):568-570.

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.12.009

R733.7

A

1671-0800(2016)12-1565-02

2016-05-20

（本文編輯：孫海兒）

315040寧波，寧波大學(xué)附屬鄞州醫(yī)院

杜小紅，Email: 1724321190@qq.com