金桂花，安賢蘭

延邊州食品藥品檢驗所，吉林延吉133000

微生物檢定法在抗生素質(zhì)控分析中的應用

金桂花，安賢蘭

延邊州食品藥品檢驗所，吉林延吉133000

微生物檢定法作為常量、微量分析中的最常見檢測方法之一，其近年來的應用呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢，這與高效液相色譜法的應用有關(guān)。該文就微生物檢定法進行分析，總結(jié)其在抗生素質(zhì)控中的實施價值以及具體方法，分析未來發(fā)展以及應用的趨勢。

微生物檢定法；常量分析；微量分析；抗生素；質(zhì)控

所謂微生物檢定法，就是指將抗生素對微生物的殺傷以及抑制指標作為衡量標準的抗生素效價方法之一[1]。在研究過程中，一般需要確保供試品以及已知效價的標準品之間的對比才能確保效價。以抗生素為例，在實驗的過程中抗生素分子結(jié)構(gòu)以及組成等方面均顯示出較為復雜的一面，而在藥物進行開發(fā)的早期階段，不存在專屬的化學測定方法，因此，微生物鑒定方法因其具有直觀結(jié)果的特點成為了抗生素含量測定的基本方法之一?，F(xiàn)對微生物檢定法在抗生素質(zhì)控分析中的應用以及進展進行如下分析。

1 抗生素常量

1.1 抗生素成品質(zhì)量控制工作分析

對微生物檢定法進行分析，其涉及到管碟法、稀釋法、比濁法3個類別[2]。其中，稀釋法檢定結(jié)果僅能測定兩個濃度的范圍，無法得到有效的絕對數(shù)值，所以具有應用上明顯的局限性特點，一般不予以采用。與稀釋法進行對比，比濁法具有獲得結(jié)果快速的特點，一般均可在當天得到檢定結(jié)果，且整個方法操作上相對簡單，易于操作，使用液體培養(yǎng)基，不會受到擴散因素的影響，方法執(zhí)行中借助儀器，具有高精密度、高靈敏度的特點[3]。但是從此方法的不足上進行分析，比濁法可能受到培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度情況以及培養(yǎng)管等因素的影響造成抗生素效價不準確的測定結(jié)果。所以，目前最為常用的微生物檢定方法是管碟法?？股匚⑸餀z定法特點：較高的靈敏度，能夠?qū)股乜咕r有一個直接且明確的顯示，但是整體操作的步驟相對較多，且需要經(jīng)歷較長的實驗研究時間，另外對于實驗操作人員的技術(shù)以及操作能力均提出較高要求，以保證實驗結(jié)果和真實值之間的接近，降低誤差問題。微生物檢定法的要求之一就是標準品、供試品一定要是同質(zhì)的抗生素，不同質(zhì)抗生素可能會出現(xiàn)曲線不平行問題[4]。

1.2 抗生素工業(yè)生產(chǎn)中間品質(zhì)控

微生物檢定法分析的周期時間較長，且操作過程相對復雜，所以在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中的中間品質(zhì)控中很少使用此方法?？股厣a(chǎn)中含量測定，其目的是對生產(chǎn)執(zhí)行過程進行優(yōu)化控制，所以對抗生素的分析法要求簡單以及快速，對于方法具有的靈敏度、特異度沒有較高的要求[5]。例如在對鏈霉素生產(chǎn)時，效價的測定可以采取麥芽酚顯色法，而不需要采用微生物檢定法。近年來，為了適應工業(yè)自動化控制的需求，開始對自控分析方向進行研究，自動分析儀器涉及到采樣器、反應器、檢測器等部件，能夠從取樣一直到獲得結(jié)果均在自動化條件下完成[6]。就工業(yè)化生產(chǎn)而言，其控制的理想方法是生物傳感器分析，例如微生物電極、酶電極等，借助生物傳感器在抗生素發(fā)酵中進行含量分析，并進行有效的監(jiān)測工作。

2 抗生素微量

2.1 體內(nèi)抗生素

從機體組織器官中藥物的分布情況來看，當機體內(nèi)吸收及代謝效用評價時，為了能夠確保臨床的安全性，一般需要對其采取血藥濃度進行監(jiān)測，這就需要分析體內(nèi)抗生素含量。一般情況下，在體液中抗生素的濃度相對較低，但在實際測定的過程中，因其具有較多的干擾因素，加上抗生素代謝物具有抗菌活性的特點，導致在體內(nèi)抗生素分析中，微生物鑒定法在實際鑒定中的特異度不高。因此，很多檢測方法開始應用于生物體內(nèi)抗生素分析中，其中包括生化分析法以及免疫測定法等。就當前來看，在體液測定的過程中最常用方法是HPLC技術(shù)，主要原因在于此方法在檢測的過程中具有較高的靈敏度以及特異性，因而成為體內(nèi)藥物測定的常規(guī)方法代表[7]。

2.2 殘留抗生素

在殘留抗生素中關(guān)于微生物檢定法的應用也是有相關(guān)報道的，例如動物組織中的殘留抗生素[8]。近年來，伴隨抗生素在飼養(yǎng)業(yè)中的應用研究，在牛奶中存在的抗生素殘留問題變得越來越明顯。檢測牛奶中是否存在殘留的抗生素，應用微生物檢定法較為普遍，檢測方法中包含紙片法與TTC法，其中TTC法已經(jīng)成為食品衛(wèi)生標準中規(guī)定的抗生素殘留檢測法。傳統(tǒng)微生物檢測，因其具有較長的檢測時間以及相對較大的誤差，加上操作過程的復雜，使得理化檢測方法的應用越來越廣泛[9]。除此之外，隨著計算機技術(shù)的廣泛發(fā)展和應用，在一定程度上加速了聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，其中包括液質(zhì)以及氣質(zhì)聯(lián)用。近年來，隨著接口技術(shù)的改進，作為一種質(zhì)量流速型檢測器，質(zhì)譜正以較快的速度開始應用于殘留分析的檢測工作中，免疫法也廣泛地應用于殘留抗生素的檢測工作中[10]。對比常規(guī)理化分析技術(shù)，免疫分析技術(shù)在實際應用中具有明顯的優(yōu)勢，例如整個操作的過程相對簡單，研究獲得實驗結(jié)果的速度較快，分析過程所需要的成本相對較低等。就當前為止，牛奶中的殘留抗生素檢測已經(jīng)建立了系統(tǒng)的免疫測定法。

就抗生素而言，無論是常量檢測，還是微量檢測，微生物檢定方法都成為了最為常規(guī)的方法之一，但是微生物檢定方法被HPLC替代是時代、技術(shù)發(fā)展下的必然趨勢。HPLC作為20世紀70年代后發(fā)展最快的分析化學分支，具有高效、快速、靈敏特點的分離分析手段。HPLC的分離檢測過程相對較為溫和，對于沸點高、分子量大的化合物的處理能力較強，所以應用的范圍變得越來越廣泛。

雖然微生物檢定方法在抗生素藥物分析中目前所占據(jù)的比例以及應用的范圍開始變小，但是抗生素藥品的醫(yī)療作用主要表現(xiàn)在抗菌效力，所以借助抗菌效力來檢定和表示含量還是有實際意義的。

若在實驗中，檢定菌與臨床致病菌生理特性相似，檢測的結(jié)果便會與臨床應用的效果保持平行關(guān)系，此時微生物檢定法對比化學法、物理法更為契合實際。作為抗生素藥品含量測定的常用方法之一，因其具有較高的靈敏度、臨床療效確切等優(yōu)勢而廣泛應用。在《中國藥典》中明確指出了不可收錄的品種，包括克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、紅霉素等，這些藥物的含量測定均由HPLC技術(shù)開展。由此來看，微生物檢定方法進行含量測定的比重將不斷縮小，HPLC法具有明顯的替代趨勢，當然目前還未形成這一局面，未來發(fā)展中還需要進一步加以研究。

3 結(jié)語

綜合該文研究內(nèi)容來看，該文就抗生素的常量、微量兩方面進行分析，論述微生物檢定法的應用情況。從文章研究內(nèi)容來看，微生物檢定法在抗生素含量測定中的比例開始逐漸下降，高效液相色譜法在未來的應用價值更為明顯，但是目前還未形成這一特點，未來的應用中還需要不斷進行研究和反復論證。

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Application of Microbiological Assay in the Analysis of Quality Control of Antibiotics

JIN Gui-hua,AN Xian-lan
Yanbian Food and Drug Inspection Institute,Yanji,Jilin Province,133000 China

Microbiological assay,as the most common test method in the analysis of quality control of antibiotics,the application in recent years has taken on an increasing trend,which is related to the application of high performance liquid chromatography,the paper analyzes the microbiological assay,summarizes the implementation value and specific method of it in the quality control of antibiotics and analyzes its future development and application trend.

Microbiological assay;Constant analysis;Microscale analysis;Antibiotics;Quality control

R7

A

1672-5654（2016）12（a）-0061-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.34.061

2016-09-05）

金桂花（1981.1-），女，朝鮮族，吉林龍井人，本科，主管藥師，研究方向：藥品檢驗。