閆永平 ， 郭永勝 ， 田麗芳

(保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系， 河北保定071051)

芪加術(shù)散對雛雞新城疫和傳染性囊病疫苗免疫效果的影響

閆永平 ， 郭永勝 ， 田麗芳

(保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系， 河北保定071051)

為了研究芪加術(shù)散對小鼠血清溶血素和脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的影響，以及芪加術(shù)散對于雞傳染性囊病和雞新城疫疫苗免疫后抗體水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，芪加術(shù)散使環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠血清溶血素的含量由55.892±2.795提高到72.209±6.680(P<0.01)。小鼠脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞(A413值表示)由0.416±0.038提高至1.071±0.232(P<0.01)。芪加術(shù)散顯著提高雞新城疫疫苗的抗體，Log2數(shù)值由14日齡4.7提高到28日齡和42日齡的7.6以上(P<0.05)。傳染性囊病疫苗抗體(Log10)數(shù)值由用藥前2.7提高到42日齡的3.6以上(P<0.05)。表明芪加術(shù)散能夠提高雞新城疫和傳染性囊病疫苗的免疫效果。

芪加術(shù)散；雞；新城疫；傳染性囊?。豢贵w

目前集約化養(yǎng)殖中畜禽的免疫抑制已成為引發(fā)其他重癥或傳染病的重要因素之一。不管是接種雞傳染性囊病疫苗，還是接種新城疫疫苗后，都不同程度的出現(xiàn)新城疫或傳染性囊病病例。究其原因是與多種免疫抑制因素有關(guān)。研究開發(fā)中藥免疫調(diào)節(jié)劑，配合疫苗使用來提高免疫抗體水平，具有一定的使用價值。眾多學(xué)者對中藥提高肉雞，蛋雞的生產(chǎn)性能及免疫方面進(jìn)行了大量的研究。本試驗根據(jù)河北某獸藥企業(yè)的臨床用藥經(jīng)驗，在經(jīng)典方“玉屏風(fēng)散”基礎(chǔ)上加減，組成芪加術(shù)散(黃芪、白術(shù)、刺五加、甘草)。方中黃芪、白術(shù)合用, 使氣旺表實, 則汗不能外泄, 邪不易內(nèi)侵。黃芪與刺五加合劑上調(diào)免疫抑制小鼠NK細(xì)胞、TNFα、IL-2水平[1]。甘草具有補(bǔ)氣益脾、和中緩急、調(diào)和諸藥之功效。芪加術(shù)散對雛雞的抗體產(chǎn)生有何影響尚未見報道。本試驗探討了芪加術(shù)散對免疫抑制小鼠體液免疫的調(diào)節(jié)作用，以及對雛雞新城疫疫苗和傳染性囊病疫苗抗體效價的影響，以期為中藥誘導(dǎo)雞體免疫活性提供理論依據(jù)，更好地應(yīng)用于健康養(yǎng)殖業(yè)中。

1 材料與方法

1.1 對免疫抑制小鼠血清溶血素和脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的影響 實驗動物：6周齡雌性健康昆明系小鼠，購自斯貝福北京實驗動物科技有限公司，許可證編號SCXK(京)2011—0004。常規(guī)飼養(yǎng)1周后，參照文獻(xiàn)[2]報道的方法，建立小鼠環(huán)磷酰胺免疫抑制模型。

藥物炙黃芪、白術(shù)、刺五加、甘草按3∶3∶2∶1比例混合，煎3次合并濾液濃縮，得1∶1芪加術(shù)散水煎液(QJZS)。

1.1.1 小鼠血清溶血素的測定 健康對照小鼠10只，即空白對照組(A組)。免疫抑制小鼠40只，隨機(jī)分為模型對照組(B組)，中藥高劑量組(C組)，中劑量組(D組)和低劑量組(E組)。A組和B組小鼠灌服蒸餾水0.4 mL；C組灌服1∶1QJZS 0.4 mL；D組灌服2倍稀釋QJZS 0.4 mL；E組灌服4倍稀釋QJZS 0.4 mL。連續(xù)給藥7 d。在給藥3 d時分別腹腔注射20 g/L綿羊紅細(xì)胞(SRBC)0.2 mL致敏，當(dāng)給藥7 d后，采血分離血清。測定血清溶血素。

1.1.2 小鼠脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的測定 分組同上。腹腔注射20 g/L綿羊紅細(xì)胞(SRBC)0.2 mL致敏，給中藥7 d后，頸椎脫臼處死小鼠取脾臟，收集脾細(xì)胞處理，測定脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞。

1.2 雛雞抗體檢測

1.2.1 試劑 雞傳染性囊病中等毒力活疫苗(B87株)由瑞普(保定)生物藥業(yè)有限公司提供，批號 130807006；雞傳染性囊病抗體檢測試劑盒，購自IDEXX公司(批號 13360-KC875)。雞新城疫LaSota活疫苗購自山東濱州沃華生物工程公司(批號130807)；雞新城疫抗原，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

藥物：炙黃芪、白術(shù)、刺五加、甘草按比例制粉混勻。

1.2.2 動物分組與處理 健康雛雞300只， 飼養(yǎng)到7日齡, 隨機(jī)分為5組, 每組60只, 中藥高(A)、中(B)、低(C)劑量組分別在飼料中按1 %、0.75 %、0.5 %的比例添加QJZS, 連續(xù)添加至42 d。空白對照組(D)不添加中藥, 雛雞7 d和21 d四組采用滴鼻、點(diǎn)眼方式接種雞新城疫LaSota系弱毒活苗2羽份，14 d 3羽份進(jìn)行傳染性囊病疫苗免疫。空白對照組(E)不做任何處理。

1.2.3 傳染性囊病疫苗抗體和新城疫抗體的測定 在雛雞21、28、35日齡和42日齡，各組隨機(jī)選取10只翅下靜脈采血分離血清， ELISA法測抗體。14、21、28日齡和42日齡時的血清，紅細(xì)胞凝集抑制試驗檢測ND抗體的效價。

1.3 統(tǒng)計分析 用SPASS 17.0 軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以單變量方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.01為差異極顯著，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 芪加術(shù)散水煎液對免疫抑制小鼠血清溶血素和脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的影響 環(huán)磷酰胺顯著降低正常小鼠血清溶血素HC50和脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞(A413值)的數(shù)量(P<0.01)，QJZS不同劑量組均顯著提高免疫抑制小鼠HC50及A413值, 見表1。

表1 QJZS對免疫抑制小鼠血清溶血素和脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的影響

注：A組空白對照組，B組=環(huán)磷酰胺組，C組=環(huán)磷酰胺+中藥高劑量組，D組=環(huán)磷酰胺+中藥中劑量組，E組=環(huán)磷酰胺+中藥低劑量組。不同小寫字母為P<0.05，不同大寫字母為P<0.01

2.2 雞血清傳染性囊病抗體水平的變化 雛雞在28日齡時，A組的抗體水平顯著高于D、B、C組(P<0.05)。B、C、D組之間差異不顯著。在雛雞35日齡、42日齡，A組的抗體水平極顯著高于其余各組(P<0.01)。B、C組的抗體水平顯著高于D組(P<0.05)。3個中藥組的抗體滴度在雛雞42日齡時仍顯著高于D組(P<0.05)。結(jié)果說明，芪加術(shù)散能夠提高抗體水平，延長抗體的保存時間。見表2。

表2 血清中傳染性囊病抗體的含量 (nLog10)

注：A組=中藥高劑量組，B組=中藥中劑量組，C組=中藥低劑量組，D組=中藥空白對照組，E組=中藥(不免疫)對照組。

不同小寫字母為P<0.05，不同大寫字母為P<0.01

2.3 雞血清新城疫抗體水平(nlog2)的變化 在雛雞21日齡時，C組與A、B組相比差異顯著(P<0.05)， 28日齡時，C組與E組相比差異極顯著(P<0.01)，不同日齡C組抗體水平均高于其余組。見表3。

表3 不同試驗組ND效價

注:同列內(nèi)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01),不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

3 討論

本試驗中，各劑量的芪加術(shù)散水煎液均可顯著提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平，這與以往相關(guān)報道接近[3]。提示芪加術(shù)散水煎液可增強(qiáng)體液免疫功能。脾內(nèi)抗體形成細(xì)胞的數(shù)量在一定程度上反映機(jī)體體液免疫的強(qiáng)弱。玉屏風(fēng)散對人工培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞可通過活化NF-kB，提高前炎性細(xì)胞因子mRNA和蛋白的表達(dá)，上調(diào)巨噬細(xì)胞的吞噬活性[4]。小鼠在灌服玉屏風(fēng)散水煎液后 β 防御素-2基因表達(dá)水平達(dá)到對照組的 9倍[5]。本試驗中芪加術(shù)散水煎液顯著提高免疫抑制小鼠脾內(nèi)抗體的分泌，表明該方可以提高免疫抑制小鼠的體液免疫。

芪加術(shù)散是在玉屏風(fēng)散基礎(chǔ)上化裁而來。關(guān)于玉屏風(fēng)散提高機(jī)體免疫的研究日益活躍。王海龍等報道，玉屏風(fēng)散可顯著提高血清IBDV 抗體水平 (P<0.01)[6]。玉屏風(fēng)散刺激小鼠巨噬細(xì)胞抗病毒蛋白基因的表達(dá)[7]。本試驗結(jié)果顯示，芪加術(shù)散顯著地提高了傳染性囊病疫苗免疫雛雞后的抗體水平和LaSota疫苗誘導(dǎo)的特異性免疫反應(yīng)。這一結(jié)果提示，芪加術(shù)散有提高雛雞體液免疫功能的作用，與上述有關(guān)報道結(jié)果相近。對于該方劑的作用機(jī)制和安全用量，需要繼續(xù)試驗探索。

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Effects of Qijiazhu San on Immune Responses of Chichens Immunized With Newcastle Disease and Infectious Bursal Disease Vaccines

YAN Yong-ping， GUO Yong-sheng， TIAN Li-fang

(Baoding Vocational and Technical College, Baoding 071051, China)

In order to develop clinically safe and efficient herbals for healthy poultry farming industry the effects of a selected herbal formula Qijiazhu San(QJZS) were investigated on serum hemolysin levels and antibody producing cells (APC) in immunosuppressive mice. Furthermore, the effects of QJZS on antibody titers to Newcastle Disease (ND) and Infectious Bursal Disease (IBD) in chichens were studied. QJZS elevated the serum hemolysin levels from 55.892±2.795 to 72.209±6.680 (P<0.01) and the antibody producing cells (in A413value ) from 0.416±0.038 to 1.071±0.232 (P<0.01) in immunosuppressive mice. Results of the chichen immunization studies revealed that the antibody titers to ND vaccine was enhanced from 4 Log2 on day 14 to 7 Log2 on day 42 (P<0.05). The anbodies to IBD was also up-regulated from 2 Log10 to 3.5 Log10 post-herbals (P<0.05). The results suggest an elevation influence of the herbal QJZS on the vaccination.

Qijiazhu san; chicken; Newcastle Disease; Infectious Bursal disease; antibody

2016-04-07

河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項目(課題編號: ZC2016147 )

閆永平(1977—)，女，講師，碩士，主要從事家禽生產(chǎn)與研究工作，E-mail:yyping2005@aliyun.com

S852.65+9.5

A

0529-6005(2016)12-0056-03