唐紅珍 張 曼 黃宏妙 蔣凌風(fēng)

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)亞急性衰老模型小鼠免疫功能的影響

唐紅珍 張 曼 黃宏妙 蔣凌風(fēng)

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

目的 觀察亞急性衰老模型小鼠免疫功能的變化及復(fù)方扶芳藤合劑的干預(yù)效果。方法 以D-半乳糖皮下注射法制備小鼠亞急性衰老模型，將144只小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(空白組)、衰老模型對(duì)照組(模型組)、維生素E組(西藥組)、復(fù)方扶芳藤合劑高、中、低劑量組(中藥高、中、低劑量組)，每組24例，造模結(jié)束后觀察各組小鼠的體重變化、行為學(xué)變化情況，測(cè)定各組小鼠的腦指數(shù)、胸腺指數(shù)以及脾腺指數(shù)。結(jié)果 與空白組比較，模型組的體重增加量顯著下降，潛伏期顯著延長，穿過平臺(tái)的次數(shù)顯著減少，抗缺氧時(shí)間明顯縮短，腦指數(shù)、脾腺指數(shù)和胸腺指數(shù)均明顯減小(P<0.05)；與模型組比較，中藥中、低劑量組的體重增加速度明顯增加，中藥組隨著劑量的減少，潛伏期縮短，穿過平臺(tái)的次數(shù)增加(P<0.05)，且低劑量組有顯著差異(P<0.01)；抗缺氧時(shí)間均明顯延長，中藥各劑量組的免疫指標(biāo)均增加明顯(P<0.05)。結(jié)論 復(fù)方扶芳藤合劑可有效改善衰老模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力、智力及免疫功能，有效控制小鼠體重減輕等現(xiàn)象，但改善程度未呈現(xiàn)量效關(guān)系。

衰老；復(fù)方扶芳藤合劑；行為學(xué)；免疫學(xué)

人類壽命與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)〔1〕，復(fù)方扶芳藤合劑為廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠產(chǎn)品，系國家中藥保護(hù)品種、國家基本藥物。既往研究證實(shí)：該復(fù)方在止血鎮(zhèn)痛、延緩膝骨關(guān)節(jié)退行性病變和提高機(jī)體免疫功能等方面均有一定功效〔2〕，但其對(duì)于衰老的干預(yù)機(jī)制如何尚無相關(guān)報(bào)道，本研究探討復(fù)方扶芳藤合劑對(duì)于衰老模型鼠免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 144 只健康成年SPF級(jí)小鼠，體重(18±2)g，雌雄各半，由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證 SCXK(桂)20090002。

1.2 藥物、試劑及儀器 復(fù)方扶芳藤浸膏(127 g/kg生藥)：復(fù)方扶芳藤合劑制由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠提供；D-半乳糖(D-Galactose,分子式C6H12O6)：上海制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：041016。WFJ7200 型紫外-可見分光光度儀(尤尼柯上海儀器有限公司)；XHF21 高速分離器(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；5000B 低溫冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；HH-S 恒溫水浴鍋(江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組及造模 將144 只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后隨機(jī)分為7組，空白對(duì)照組(空白組)、衰老模型對(duì)照組(模型組)、維生素E組(西藥組)、復(fù)方扶芳藤合劑高、中、低劑量組(中藥高、中、低劑量組)，每組各24例。采用 D-半乳糖皮下注射法制備小鼠亞急性衰老模型〔3〕。

1.3.2 給藥措施 造模的同時(shí)，中藥高、中、低劑量組分別按照15，7.5，3.75 g·kg-1·d-1予以復(fù)方扶芳藤合劑浸膏水溶液灌胃，西藥組按100 mg·kg-1·d-1給藥，空白組與模型組以同等容量蒸餾水灌胃。連續(xù)給藥8 w，每3天稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整用藥量。

1.3.3 標(biāo)本采集 最后一次給藥后，禁食不禁水12 h，將小鼠摘除眼球取血,血液靜置30 min，在4℃下以3 000 r/min離心15 min,常規(guī)分離血清，取上層血清放冰箱冷藏備用；將動(dòng)物斷頸處死后于冰袋上迅速取出胸腺、脾臟、腦等組織器官，用冰生理鹽水沖洗，吸去血液，修去脂肪、系膜，用濾紙吸干水分，用電子天平稱其濕重；加入生理鹽水，制成10%的組織勻漿，在4℃下以3 000 r/min，離心10 min，取上清液置冰箱內(nèi)冷藏備用。

1.4 觀察指標(biāo) Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過7 d的訓(xùn)練后，第7天通過隨機(jī)選入水點(diǎn)檢測(cè)記錄小鼠尋找平臺(tái)的潛伏期，以及記錄60 s內(nèi)小鼠穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)。常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)：造模成功后將各組小鼠逐只放入裝有20 g鈉石灰的250 ml密閉的廣口瓶內(nèi),每瓶1只,加蓋以凡士林密封瓶口,觀察并記錄每只小鼠呼吸停止作為缺氧死亡時(shí)間。臟器指數(shù)測(cè)定：腦指數(shù)、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)按公式臟器重量(mg)/小鼠體重(g)計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體重變化分析 與空白組〔(11.98±5.76)g〕比較，模型組的體重增加量顯著下降〔(8.67±3.72)g，P<0.05〕；與模型組比較，中藥中、低劑量組的體重增加速度明顯增加〔(12.29±5.03)、(10.54±4.82)g，P<0.05〕。西藥組〔(9.71±6.15)g〕與中藥高〔(13.15±6.02)g〕、中、低劑量組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.2 各組小鼠行為學(xué)變化情況比較 與空白組比較，模型組的潛伏期顯著延長，穿過平臺(tái)的次數(shù)、抗缺氧時(shí)間顯著減少(P<0.05)。與模型組比較，中藥組隨著劑量的減少，潛伏期縮短，穿過平臺(tái)的次數(shù)增加(P<0.05)，且低劑量組有顯著差異(P<0.01)。中藥組各劑量組的抗缺氧時(shí)間均明顯延長(P<0.05)。西藥組與中藥高、中、低劑量組比較，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

組別Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)潛伏期(s)穿過平臺(tái)次數(shù)(次)抗缺氧時(shí)間(min)空白組35 53±21 346 56±3 1027 38±9 36模型組51 36±15 141)4 33±3 561)21 29±5 151)中藥高劑量組33 93±25 202)7 63±3 172)25 85±4 942)中藥中劑量組41 82±21 462)7 28±5 052)26 89±8 182)中藥低劑量組41 64±22 553)6 59±5 933)25 75±4 502)西藥組31 77±22 077 95±2 8424 63±5 40

與空白組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01，下表同

2.3 各組小鼠臟器指數(shù)比較 與空白組比較，模型組腦指數(shù)、脾腺指數(shù)和胸腺指數(shù)均明顯減小(P<0.05)。與模型組比較，中藥各劑量組臟器指數(shù)均增加明顯(P<0.05)。西藥組與中藥高、中、低劑量組比較均無顯著差異(P>0.05)。見表2。

組別脾腺指數(shù)胸腺指數(shù)腦指數(shù)空白組3 79±0 942 21±0 9512 67±2 13模型組3 13±0 521)1 60±0 541)10 26±1 271)中藥高劑量組3 74±1 192)2 07±0 692)12 61±1 543)中藥中劑量組3 67±0 902)1 83±0 7010 81±2 25中藥低劑量組3 73±1 072)1 99±0 732)10 84±2 40西藥組3 77±2 071 95±0 8413 02±2 433)

3 討 論

復(fù)方扶芳藤合劑系由扶芳藤、黃芪、紅參組成，具有益氣補(bǔ)血、健脾養(yǎng)心之功效，用于治療氣血不足，心脾兩虛等證，其在提高機(jī)體免疫功能等方面均有一定功效〔2〕，故而本研究將其用于衰老模型的干預(yù)之中，以期探索其抗衰老療效及機(jī)制。

D-半乳糖致哺乳動(dòng)物亞急性衰老模型以其可較好的反應(yīng)衰老變化，且造模方法穩(wěn)定而廣泛應(yīng)用于衰老的研究之中〔3〕，其主要通過在一定時(shí)間內(nèi)，連續(xù)給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物注射大劑量的D-半乳糖，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、功能障礙、代謝紊亂，最終導(dǎo)致衰老的發(fā)生〔4〕，本研究中復(fù)制的衰老小鼠出現(xiàn)行動(dòng)遲緩、皮毛松散無光澤，體質(zhì)量增加量明顯下降等體征變化。

現(xiàn)今，隨著免疫學(xué)研究的不斷深入，免疫衰老與個(gè)體壽命之間的關(guān)系得到了大量證據(jù)支持〔5，6〕。胸腺指數(shù)和脾指數(shù)是衡量動(dòng)物模型體內(nèi)非特異性免疫水平的基本指標(biāo)〔7，8〕，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，衰老模型存在免疫功能降低的表現(xiàn)，復(fù)方扶芳藤合劑可逆轉(zhuǎn)此現(xiàn)象。

同時(shí)，衰老作為一多環(huán)節(jié)的生物學(xué)過程，以記憶力減退、免疫功能下降以及糖脂代謝紊亂和肝腎功能的異常等癥狀為主要表現(xiàn)〔1〕，本研究中采用的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)主要用于測(cè)試動(dòng)物對(duì)空間位置覺和方位覺的學(xué)習(xí)記憶能力〔9〕，以及可較好地估量動(dòng)物智力的腦指數(shù)進(jìn)行評(píng)估〔8〕，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：衰老大鼠模型出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶力下降，智力降低的表現(xiàn)，并隨著時(shí)間的推移衰老癥狀加重，這與人類的自然衰老癥狀與衰老進(jìn)程類似，亦與國內(nèi)研究報(bào)道相一致〔10〕，可見，衰老模型中出現(xiàn)學(xué)習(xí)與記憶力下降、智力減退的表現(xiàn)，復(fù)方扶芳藤合劑可有效改善這一現(xiàn)象。

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〔2015-08-28修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

廣西校地校企共建科技創(chuàng)新平臺(tái)立項(xiàng)建設(shè)項(xiàng)目(2013年)

張 曼(1982-)，女，博士，主要從事中醫(yī)藥、民族醫(yī)藥防治情志病及抗衰老研究。

唐紅珍(1968-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥防治肥胖、糖尿病及抗衰老的研究。

R285.5

A

1005-9202(2016)24-6095-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.023