王海英 王慶輝 孫亞東

(吉林省人民醫(yī)院，吉林 長春 130021)

復(fù)方丹參滴丸對糖尿病大鼠心肌組織的保護(hù)作用

王海英 王慶輝 孫亞東

(吉林省人民醫(yī)院，吉林 長春 130021)

目的觀察不同劑量復(fù)方丹參滴丸對2型糖尿病大鼠心肌組織炎癥和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。方法 以高糖高脂飲食聯(lián)合腹腔注射鏈脲佐菌素誘導(dǎo)制備2型糖尿病大鼠模型。將2型糖尿病大鼠模型隨機(jī)分為復(fù)方丹參滴丸大、小劑量組和模型組，正常對照組普通飼料喂養(yǎng)。8 w后檢測各組大鼠心肌組織超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量、血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)及腫瘤壞死因子(TNF)-α水平。結(jié)果 與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸組大鼠血清hs-CRP、TNF-α降低，心肌組織中MDA含量降低，SOD活性有所恢復(fù)(均P<0.05)。結(jié)論 復(fù)方丹參滴丸可減輕2型糖尿病大鼠心肌組織的炎癥及氧化應(yīng)激，對糖尿病大鼠心肌組織有明確的保護(hù)作用。

糖尿病心肌??；復(fù)方丹參滴丸；氧化應(yīng)激；腫瘤壞死因子α

早期預(yù)防和延緩糖尿病(DM)心血管并發(fā)癥的進(jìn)展是降低2型糖尿病(T2DM)患者病死率的重要環(huán)節(jié)。目前已有大規(guī)模的研究證實(shí)〔1，2〕，血糖升高可以使多種炎癥細(xì)胞因子表達(dá)增加，如，腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應(yīng)蛋白(CRP)、多種白細(xì)胞介素等，引起心血管系統(tǒng)細(xì)胞凋亡以及氧化應(yīng)激反應(yīng)。本研究通過觀察復(fù)方丹參滴丸對DM大鼠心肌組織炎癥及氧化應(yīng)激的影響，探討復(fù)方丹參滴丸對T2DM大鼠心肌病變的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備 鏈脲佐霉素(STZ)購自美國Sigma 公司；Wistar雄性大鼠由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供；復(fù)方丹參滴丸(DSP)為天津天士力集團(tuán)有限公司產(chǎn)品；羅氏便攜式血糖儀及血糖檢測試紙為德國羅氏公司產(chǎn)品；空腹胰島素(FINS)測定試劑盒購自北方生物技術(shù)研究所；TNF-α ELISA試劑盒為美國ADL公司產(chǎn)品；超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 DM動物模型制備及分組 選8周齡健康Wistar雄性大鼠45只，體重(270±20)g。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為模型組 (DM，35只)和正常對照組 (CT，10只)。參照文獻(xiàn)方法〔3〕，給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)制模，4 w末一次性腹腔注射STZ 30 mg/kg。72 h后隨機(jī)取尾靜脈血用便攜式血糖儀測血糖2次，血糖≥16.7 mmo1/L為T2DM模型大鼠。存活的DM模型大鼠共24只，隨機(jī)分組，給藥情況：DSP小劑量組(DL)，8只，按2 mg·kg-1·d-1+蒸餾水3 ml灌胃治療;DSP大劑量組(DH)，8只，按4 mg·kg-1·d-1+蒸餾水3 ml灌胃治療;模型組(DM)，8只，蒸餾水3 ml灌胃治療；正常對照組(NC)同時(shí)給予蒸餾水3 ml灌胃治療。以上處理方法每周根據(jù)個(gè)體體重變化隨時(shí)調(diào)整。用藥8 w后，斷尾采血、留取血清標(biāo)本。斷頸處死大鼠，抽凈心腔內(nèi)血液，取出心臟組織，用冷等滲鹽水洗凈，濾紙吸干，組織標(biāo)本編號，-70℃液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 觀察項(xiàng)目及方法 使用羅氏便攜式血糖儀經(jīng)尾靜脈采血測定空腹血糖(FBG)。血清FINS通過放射免疫法測定，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，HOMA-IR=In(FBG×FINS/22.5)。血清hs-CRP由全自動生化分析儀測定。血清TNF-α通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。取少許心尖組織制成組織勻漿，離心后留取上清液，MDA含量測定采用硫代巴比妥酸法，波長532 nm處比色，測各管吸光度值；SOD活力測定采用黃嘌呤氧化法，波長550 nm處比色。剩余心臟組織標(biāo)本以4%多聚甲醛固定、石蠟包埋、切片，進(jìn)行蘇木精伊紅染色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS10.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 心肌組織HE染色結(jié)果 正常對照組心肌纖維、心肌細(xì)胞排列整齊，胞質(zhì)染色均勻，細(xì)胞核大小均一；模型組心肌細(xì)胞排列紊亂，纖維斷裂，部分胞質(zhì)濃縮深染，細(xì)胞核大小不規(guī)則；藥物治療后心肌組織改變有所減輕。見圖1。

圖1 心肌組織HE染色結(jié)果

2.2 糖代謝水平比較 與正常對照組比較，模型組大鼠FBG、血清FINS、HOMA-IR均明顯升高(P<0.01)。與模型組比較，復(fù)方丹參滴丸各組FBG降低，DH組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)方丹參滴丸各組血清FINS、HOMA-IR有所降低(P<0.05)。見表1。

組別nFBG(mmol/L)Fins(mU/L)HOMA?IRCT組10105 29±0 389 64±0 822 59±0 42DM組8922 67±4 631)23 41±3 751)26 91±7 091)DL組8821 81±3 771)18 57±2 781)2)18 96±4 121)2)DH組8818 24±3 251)2)16 33±2 121)2)15 45±2 281)2)

與CT組比較：1)P<0.01;與DM組比較：2)P<0.05

2.3 炎癥及氧化應(yīng)激指標(biāo)的比較 與正常對照組比較，糖尿病各組大鼠MAD含量升高，SOD活性降低，hs-CRP、TNF-α水平降低(P<0.05，P<0.01)。用藥8 w后，與模型組相比，各用藥組心肌組織的MAD含量降低，SOD活性有所恢復(fù)，hs-CRP、TNF-α水平降低，DH組上述指標(biāo)改變顯著(P<0.05，P<0.01)，見表2。

組別nMDA(nmol/mg)SOD(nU/mg)hs?CRP(mg/L)TNF?α(mg/L)CT組10107 3±5 2458 98±8 321 39±0 761 98±0 29DM組8919 67±6 192)26 75±7 462)6 39±2 622)3 15±0 512)DL組8814 96±3 151)3)31 39±8 071)3)4 18±0 561)3)2 78±0 423)DH組8810 84±4 681)4)42 67±9 132)4)2 95±0 411)4)2 16±0 311)4)

與CT組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與DM比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3 討 論

DM的防治不只是降低血糖，還要預(yù)防和延緩并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。DM心肌病是DM最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為與能量代謝紊亂、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、微血管病變、心肌間質(zhì)纖維化變等多個(gè)因素相關(guān)聯(lián)〔3〕。

體內(nèi)高血糖引起氧化應(yīng)激是多途徑的，氧化應(yīng)激是DM心肌病病理生理過程，各途徑之間可以將氧化應(yīng)激放大，導(dǎo)致惡性循環(huán)。產(chǎn)生的活性氧簇可通過直接激活TNF-α死亡受體途徑，促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：復(fù)方丹參滴丸可改善早期DM大鼠的胰島素抵抗，降低血糖，降低血清Hs-CRP及TNF-α水平，心肌組織MDA含量降低，心肌組織SOD活性提高，且大劑量治療組更顯著，對DM大鼠的心肌細(xì)胞起到糾正代謝紊亂、抗炎、抗氧化應(yīng)激的保作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)許多能保護(hù)心肌細(xì)胞及血管內(nèi)皮功能的中藥。主要由丹參、三七、冰片三者組成的復(fù)方丹參滴丸，對心臟有良好的保護(hù)作用，藥理及分子生物學(xué)研究也進(jìn)一步證實(shí)〔4，5〕，復(fù)方丹參滴丸通過多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)糖脂代謝而改善胰島素抵抗，抑制促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖效應(yīng)，降低心肌成纖維細(xì)胞膠原蛋白的合成作用。

目前DM心肌病的治療不僅限于調(diào)節(jié)血糖，應(yīng)在DM早期使用藥物延緩DM心肌病的發(fā)生及發(fā)展，針對DM心肌病發(fā)病的各環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，降低糖DM患者發(fā)生致命性心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。復(fù)方丹參滴丸可減輕早期T2DM大鼠心肌組織的炎癥及氧化應(yīng)激，對DM大鼠心肌組織有明確的保護(hù)作用，但相關(guān)機(jī)制還有待進(jìn)一步探索。

1 譚學(xué)瑩，趙林雙. microRNA-30c通過調(diào)節(jié)自噬參與調(diào)控糖尿病心肌病機(jī)制的研究〔J〕.國際內(nèi)分泌代謝雜志，2012；32(2)：127-30.

2 Ofstad AP，Urheim S，Dalen H，etal.Identification of a definite diabetic cardiomyopathy in type 2 diabetes by comprehensive echocardiographicevaluation A cross-sectional comparison with non-diabetic weight-matched controls〔J〕.J Diabetes，2014；(10)：1753-66.

3 劉 奎，周麗諾.氧化應(yīng)激與糖尿病心肌細(xì)胞凋亡〔J〕.國際內(nèi)分泌代謝雜志，2009；29(3)：204-7.

4 郭治昕.復(fù)方丹參滴丸的中藥現(xiàn)代化研究〔J〕.中國中醫(yī)藥信息雜志，2000；7(4)：14-5.

5 陳 頻，鄭全林，陳文玉，等.復(fù)方丹參滴丸對2型糖尿病大鼠腎組織HIF-1α及VEGF表達(dá)的影響〔J〕.中華保健醫(yī)學(xué)雜志，2011；13(3)：200-3.

〔2015-10-19修回〕

(編輯 徐 杰)

王海英(1976-)，女，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，主要從事糖尿病的預(yù)防與治療研究。

R58

A

1005-9202(2016)24-6091-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.021