王 政 梁桂菊 張 婷 汪 益 葉文群 卓 睿 徐 洲 代曉玲 楊 拯

(成都醫(yī)學(xué)院2012級(jí)護(hù)理專科2班，四川 成都 610500)

電針對(duì)三氯化鋁致擬阿爾茨海默病模型小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用

王 政1梁桂菊2張 婷2汪 益2葉文群2卓 睿3徐 洲4代曉玲4楊 拯3

(成都醫(yī)學(xué)院2012級(jí)護(hù)理?？?班，四川 成都 610500)

目的探究電針對(duì)三氯化鋁致擬阿爾茨海默病(AD)模型小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。方法 將40只健康成年小鼠按隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、針刺組、電針組，每組10只。除對(duì)照組外，其余組給予AlCl3(60 mg/kg)，連續(xù)7 d，導(dǎo)致小鼠擬AD模型后，對(duì)各組小鼠進(jìn)行避暗試驗(yàn)，測(cè)定其治療前潛伏期和錯(cuò)誤次數(shù)。針刺組針刺百會(huì)和大椎穴，電針組電刺激百會(huì)和大椎穴，7 d后再次測(cè)定各組小鼠治療后的潛伏期與錯(cuò)誤次數(shù)，并取腦測(cè)定腦重系數(shù)。通過觀察治療前后各組的潛伏期、錯(cuò)誤次數(shù)和小鼠腦重系數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果 治療前模型組、針刺組及電針組潛伏期較對(duì)照組顯著縮短(P<0.01)；錯(cuò)誤次數(shù)較對(duì)照組明顯增加(P<0.05)。治療后潛伏期針刺組、電針組較模型組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，電針組與針刺組相比，潛伏期有所延長(zhǎng)，但差異無顯著性(P>0.05)；錯(cuò)誤次數(shù)電針組較模型組顯著減少(P<0.05)，電針組與針刺組、針刺組與模型組相比，錯(cuò)誤次數(shù)均有所減少，但無顯著差異。腦重系數(shù)模型組較對(duì)照組顯著降低(P<0.01)，針刺與電針組與模型組相比，腦重系數(shù)明顯增加(P<0.05)，電針組較針刺組腦重系數(shù)有增加趨勢(shì)，但兩者比較無顯著差異。結(jié)論 電針與針刺均能對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙發(fā)揮保護(hù)作用，電針的作用優(yōu)于針刺。

電針；針刺；“百會(huì)”(GV-20/w)；“大椎”(GV-14/w)；認(rèn)知障礙；學(xué)習(xí)記憶

研究發(fā)現(xiàn)，鋁可以在腦組織中蓄積，干擾腦組織活動(dòng)，破壞神經(jīng)元結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致中樞神經(jīng)功能障礙〔1～3〕。故很多藥物治療阿爾茨海默病(AD)的研究常以AlCl3模擬AD動(dòng)物模型〔4〕。鋁可增強(qiáng)腦組織中脂質(zhì)過氧化水平，引發(fā)炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腦細(xì)胞凋亡，使腦神經(jīng)細(xì)胞受到損傷，進(jìn)而使擬AD模型動(dòng)物出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶障礙。電針具有針刺和電刺激的雙重治療作用，不但具有針刺的效果，還具有抗炎、抗氧化、改善血液循環(huán)、抑制細(xì)胞凋亡，提高組織對(duì)自由基的抵抗能力等作用，從而可能對(duì)擬AD動(dòng)物模型學(xué)習(xí)記憶能力起到保護(hù)作用。本研究觀察電針對(duì)于AlCl3致AD小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與分組 選用健康成年小鼠40只，體重25～30 g，不計(jì)雌雄，由四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(川)-10-2006。并將40只小鼠按隨機(jī)數(shù)表法分為四組：對(duì)照組、模型組、針刺組、電針組，每組10只。

1.2 試劑和儀器 結(jié)晶氯化鋁：成都科龍化工試劑廠，批號(hào)：20040602；氯化鈉注射液：安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：1101202E。華佗牌SDZ-Ⅳ型電針治療儀：蘇州醫(yī)療用品廠有限公司；BA-200自動(dòng)避暗測(cè)試儀：成都泰盟科技有限公司；華佗牌無菌針灸針：蘇州醫(yī)療用品廠有限公司；上皿電子天平：上海精科電子天平儀器廠。

1.3 模型的制備及治療措施 將四組小鼠按隨機(jī)數(shù)表編號(hào)后分籠飼養(yǎng)，模型組、針刺組、電針組按60 mg/kg的量給予AlCl3皮下注射，對(duì)照組等體積給予生理鹽水皮下注射，1次/d，連續(xù)7 d。造模完成后，將四組小鼠同時(shí)固定于小鼠板上，對(duì)照組和模型組不給予治療措施，針刺組和電針組小鼠取“百會(huì)”(小鼠頭部正中兩耳間，平刺2 mm)、“大椎”(第7頸椎棘突下，向下直刺4 mm)二穴，針刺組刺入后留針15 min拔出；電針組刺入后給予疏密波治療，百會(huì)接正極，大椎接負(fù)極，持續(xù)時(shí)間15 min，頻率4/20 Hz，電流 0.5～1 mA，以背部肌肉出現(xiàn)輕微抽動(dòng)及尾巴擺動(dòng)為度，連續(xù)電針7 d，每天固定時(shí)間電針1次。電針完畢后將各組小鼠同時(shí)從小鼠板上取下，放入清潔籠具中飼養(yǎng)，治療期間各組小鼠自由進(jìn)食、飲水，每天更換墊料，并保證飼養(yǎng)環(huán)境適宜的溫度、濕度，適當(dāng)通風(fēng)，避免飼養(yǎng)不當(dāng)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 避暗測(cè)試〔5〕采用BA-200自動(dòng)避暗測(cè)試儀測(cè)試，反射箱分大小相等的6個(gè)箱，造模結(jié)束后，將四組小鼠在反射箱中先訓(xùn)練3 min，間隔24 h后對(duì)各組小鼠進(jìn)行治療前避暗測(cè)試；治療完畢后，采用同樣的方法對(duì)各組小鼠進(jìn)行治療后避暗測(cè)試。具體方法為在反射箱通電的情況下，將小鼠放入明室，記錄小鼠第一次從明室進(jìn)入暗室的時(shí)間，稱為潛伏期(LT)；小鼠受電擊后逃避性地跑出暗室，其次數(shù)稱為錯(cuò)誤次數(shù)(EN)，觀察并記錄潛伏期及5 min內(nèi)小鼠的錯(cuò)誤次數(shù)。

1.4.2 腦重系數(shù)測(cè)定〔6〕治療后避暗試驗(yàn)測(cè)試完畢，稱量并記錄小鼠體重，然后將小鼠斷頭處死，迅速取下腦橋基底部上緣水平以上的全部腦組織，除去多余組織后，立即用生理鹽水沖洗血液及黏附組織，再用濾紙拭去多余的水分，立即稱量并記錄腦濕重，按以下公式計(jì)算腦重系數(shù)：腦重系數(shù)=腦濕重(g)/體重(g)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行SNK法(q檢驗(yàn))。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠基本狀況 造模后各組小鼠自由進(jìn)食、飲水，模型組小鼠多表現(xiàn)為動(dòng)作不靈活，身體蜷縮，被毛光澤度降低，并可見豎毛，且進(jìn)食較正常小鼠減少。對(duì)照組精神狀態(tài)良好，進(jìn)食、飲水正常，動(dòng)作靈活，反應(yīng)靈敏，少有蜷縮。電針組和針刺治療后，電針組和針刺組小鼠精神狀況較模型組有較明顯的改善，被毛光澤度提高，蜷縮者較模型組明顯減少。在電針和針刺過程中，可能由于人為操作不當(dāng)和個(gè)別小鼠對(duì)針刺和電針不可耐受等原因，導(dǎo)致電針組小鼠死亡1只，針刺組小鼠死亡2只，其余組無小鼠死亡，總死亡率為7.5%。之后及時(shí)補(bǔ)充同批次實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在數(shù)量上保持一致。

2.2 小鼠避暗試驗(yàn)結(jié)果 治療前模型組、針刺組及電針組LT較對(duì)照組顯著縮短(P<0.01)；模型組、針刺組及電針組組EN較對(duì)照組明顯增加(P<0.05)，針刺與電針組間無顯著差異(P>0.05)。表明AlCl3致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙模型復(fù)制成功，見表1。治療后針刺組與電針組LT相比于模型組明顯延長(zhǎng)(P<0.05)，電針組與針刺組相比，治療后LT有所延長(zhǎng)，但兩者比較無顯著差異(P>0.05)；治療后電針組EN較針刺組顯著減少(P<0.05)，電針組與模型組、電針組與針刺組相比，EN均有所減少，但兩兩間比較無顯著差異，說明電針組對(duì)于AlCl3致學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用明顯優(yōu)于針刺組。見表1。

2.3 小鼠腦重系數(shù)測(cè)試結(jié)果 與模型組(0.014 3±0.000 9)比較，對(duì)照組、針刺組及電針組腦重系數(shù)顯著增高(0.017 6±0.001 3，0.016 3±0.002 4，0.016 8±0.000 9，P<0.05)，其余各組間比較無顯著差異(P>0.05)。電針組相對(duì)于針刺組腦重系數(shù)有所增加，但兩者比較無顯著差異(P>0.05)。

組別治療前LT(s)EN(次)治療后LT(s)EN(次)對(duì)照組133 38±73 753 25±1 98121 36±69 623 33±1 50模型組46 19±29 332)6 67±3 461)35 35±8 487 14±2 97針刺組37 36±17 302)7 00±1 581)97 12±26 393)5 80±3 83電針組33 37±16 842)6 56±2 921)118 60±56 603)4 67±1 324)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；2)P<0.01，與模型組比較：3)P<0.05;與針刺組比較：4)P<0.05

3 討 論

研究證實(shí)，鋁加強(qiáng)腦組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是鋁產(chǎn)生慢性神經(jīng)毒性作用的主要機(jī)制之一〔7〕，鋁可以引起腦組織中自由基的大量產(chǎn)生，從而引發(fā)炎癥反應(yīng)而致神經(jīng)元喪失和認(rèn)知功能障礙。而且，研究發(fā)現(xiàn)，在AD患者腦組織中，氧化性損傷廣泛存在，慢性鋁接觸可誘導(dǎo)、甚至加重AD的氧化性損害〔8〕。有研究顯示，鋁可直接損傷記憶的生理基礎(chǔ)——突觸可塑性〔9〕，從而導(dǎo)致動(dòng)物出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶功能障礙。劉永琦等〔6〕研究發(fā)現(xiàn)，老年癡呆病人腦重系數(shù)較正常人減少，大腦萎縮，腦體積縮小。而鋁在血液中主要與轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白和IgG結(jié)合形成復(fù)合，沉淀于血液和血管壁，造成免疫異常、血管和血腦屏障損害，使AD患者腦血流供應(yīng)量減少。雖然有較多關(guān)于AD機(jī)制的研究，但是，至今AD的具體發(fā)病機(jī)制仍不太清楚。

電針具有抗氧化、抵抗自由基、改善血液循環(huán)〔10〕、降低Ca2+含量、保護(hù)損傷神經(jīng)〔11〕、保護(hù)損傷腦組織和抑制細(xì)胞凋亡等作用〔12〕；而且電針同時(shí)具有針刺的功效，中醫(yī)認(rèn)為，AD病位在腦，辨證以腎精不足，髓?？仗摓楸?，痰瘀蒙蔽清竅為標(biāo)〔13〕，強(qiáng)調(diào)補(bǔ)腎活血以治其本，醒神開竅以治其標(biāo)。研究證實(shí)，針刺治療AD確有補(bǔ)腎活血、醒神開竅的作用〔14〕，標(biāo)本同治，盡早緩解AD癥狀，有助于提高AD患者生存質(zhì)量。據(jù)《靈柩·海論》記載，百會(huì)穴為督脈和足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的交會(huì)穴，具有醒神開竅之功效，為治療老年性癡呆的主要穴位，經(jīng)臨床研究證實(shí)，針刺此穴對(duì)于本病可能出現(xiàn)的精神、神志異常均有一定的療效；根據(jù)《素問·氣府》描述，大椎位于第7頸椎棘突下，屬督脈經(jīng)穴位，是手足六陽(yáng)經(jīng)的交會(huì)穴，故稱之為“諸陽(yáng)之會(huì)”，針刺此穴可通調(diào)諸經(jīng)，具有增強(qiáng)各臟腑經(jīng)絡(luò)之功效，亦可促使陰陽(yáng)平衡。

本研究結(jié)果顯示電針對(duì)AD小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的保護(hù)作用明顯優(yōu)于針刺，其原因可能與電針能更有效地抵抗自由基，防止脂質(zhì)過氧化作用，抑制腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡，保護(hù)神經(jīng)元功能，減輕腦萎縮有關(guān)，從而對(duì)擬AD模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力起到保護(hù)作用。

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〔2015-03-22修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

成都醫(yī)學(xué)院綜合、設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目資助(No.ZH201201)

楊 拯(1980-)，男，碩士，副研究員，主要從事老病及學(xué)習(xí)記憶障礙相關(guān)疾病研究。

王 政(1992-)，男，主要從事老年病及學(xué)習(xí)記憶障礙研究。

R245.31

A

1005-9202(2016)24-6075-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.013

1 成都市血液中心 2 成都醫(yī)學(xué)院2014級(jí)臨床本科班

3 成都醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心

4 成都醫(yī)學(xué)院2015級(jí)卓越醫(yī)生試點(diǎn)班