張俊峰 林 菊 朱永堅(jiān) 浦 堅(jiān) 沈 炎 邱 嶺

(東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院無錫分院腎內(nèi)科，江蘇 無錫 214000)

黃葵膠囊對糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用

張俊峰 林 菊 朱永堅(jiān) 浦 堅(jiān) 沈 炎 邱 嶺

(東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院無錫分院腎內(nèi)科，江蘇 無錫 214000)

目的探討黃葵膠囊對糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用。方法 健康SPF級Wistar大鼠72只隨機(jī)分為正常對照組、模型組、陽性對照組、黃葵膠囊低、中、高劑量組，每組12只。觀察各組大鼠病理學(xué)組織變化，各組大鼠炎癥因子和腎功能指標(biāo)水平變化。結(jié)果 正常對照組大鼠腎小球、系膜基質(zhì)未出現(xiàn)明顯病理變化；模型組大鼠腎小球硬化、系膜基質(zhì)增生；陽性對照組與黃葵膠囊各劑量組腎臟病理變化均較模型組明顯減輕；模型組、陽性對照組、黃葵膠囊低、中劑量組腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應(yīng)蛋白(CRP)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)含量均較正常對照組明顯增加(P<0.05)，而黃葵膠囊高劑量組TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量接近與正常對照組(P>0.05)；陽性對照組、黃葵膠囊低、中、高劑量組TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量較模型組明顯降低，黃葵膠囊低、中、高劑量組TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量明顯低于陽性對照組，黃葵膠囊中的劑量組TNF-α、CRP、Scr、BUN、UA含量明顯低于黃葵膠囊低劑量組(P<0.05)。結(jié)論 黃葵膠囊可通過降低TNF-α、CRP水平，減輕糖尿病腎病大鼠炎癥反應(yīng)，可通過降低Scr、BUN、UA水平，保護(hù)糖尿病腎病大鼠腎臟。

黃葵膠囊；糖尿病腎病

糖尿病腎病最終可致終末期腎衰竭，同時也是糖尿病患者致殘致死的重要原因之一。目前，糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，認(rèn)為主要與遺傳因素和環(huán)境因素等相關(guān)，是由于持續(xù)高血糖導(dǎo)致的一系列代謝紊亂及腎血流動力學(xué)改變〔1，2〕。黃葵膠囊是由黃蜀葵花提煉而成，具有改善血脂代謝紊亂、改善血液黏度、抗感染等作用〔3〕。本研究旨在分析黃葵膠囊對糖尿病腎病大鼠的腎臟保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇健康SPF級Wistar大鼠72只，雌雄各半，體質(zhì)量(180±20)g，購于遼寧長生生物技術(shù)有限公司，動物合格證號：SCD2010-0001。常規(guī)飼養(yǎng)1 w，自由飲食、飲水，維持室溫為23℃～25℃，相對濕度70%。黃葵膠囊(江蘇蘇中藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字Z19990040)，鹽酸貝那普利片(深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20054771)。

1.2 糖尿病腎病大鼠模型〔4〕采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)，且腹腔注射鏈脲佐菌素(60 mg/kg)造模，72 h尾靜脈取血檢測空腹血糖，復(fù)制糖尿病模型，再根據(jù)自然病程發(fā)展，2 w后制造早期糖尿病腎病模型。本組大鼠均造模成功。

1.3 方法

1.3.1 分組 72只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、陽性對照組、黃葵膠囊低、中、高劑量組，每組12只，均雌雄各半。

1.3.2 給藥方法 大鼠給藥劑量根據(jù)人體(g/kg)與大鼠體表面積比值等效劑量換算。正常對照組給予等量生理鹽水灌胃，1次/d；模型組于造模成功后給予等量生理鹽水灌胃，1次/d；陽性對照組于造模成功后給予鹽酸貝那普利片0.9 mg/kg灌胃，1次/d；黃葵膠囊低、中、高劑量組于造模成功后分別給予黃葵膠囊0.5、1.0、2.0 g/kg灌胃，1次/d。

1.3.3 病理組織學(xué)觀察 取大鼠左側(cè)固定部分腎組織100 g，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋行蘇木素-伊紅(HE)染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

1.3.4 各組大鼠炎癥因子水平檢測 包括腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-12、C-反應(yīng)蛋白(CRP)。末次給藥后各組大鼠不禁水禁食12 h，給予大鼠腹腔注射麻醉，腹主動脈取血3 ml，裝于含有適量抗凝劑的試管內(nèi)，緩慢搖動試管12次以混勻血液，確定試管已封閉，并且避免樣本在離心過程中蒸發(fā)，3 000 r/min離心10 min，分離血漿，置于-20℃保存待測，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定。

1.3.5 各組大鼠腎功能指標(biāo)水平檢測 腎功能指標(biāo)包括血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)。末次給藥后各組大鼠不禁水禁食12 h，腹腔注射麻醉，腹主動脈取血3 ml，裝于不含抗凝劑的試管內(nèi)，室溫下自然凝集20～30 min，離心分離血清，-20℃保存待測，采用全自動生化分析儀測定Scr、BUN、UA。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，雙因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般活動情況 正常對照組大鼠活動、體毛、反應(yīng)正常，大鼠均未死亡；模型組大鼠毛色暗淡，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，出現(xiàn)多食、多飲、多尿、消瘦等癥狀，不明原因死亡4只；陽性對照組和黃葵膠囊各劑量組較模型組癥狀明顯改善。其中陽性對照組死亡3只、黃葵膠囊低劑量組死亡1只。

2.2 各組大鼠病理組織學(xué)變化 正常對照組大鼠腎小球、系膜基質(zhì)未出現(xiàn)明顯病理變化；模型組大鼠腎小球硬化、系膜基質(zhì)增生；陽性對照組與黃葵膠囊各劑量組腎臟病理變化均較模型組明顯減輕。見圖1。

圖1 各組大鼠病理組織學(xué)變化(HE,×400)

2.3 各組大鼠炎癥因子水平比較 模型組、陽性對照組、黃葵膠囊低、中劑量組TNF-α、CRP含量均較正常對照組明顯增加(P<0.05)，而黃葵膠囊高劑量組TNF-α、CRP含量接近正常對照組(P>0.05)；陽性對照組、黃葵膠囊低、中、高劑量組TNF-α、CRP含量較模型組明顯降低，黃葵膠囊低、中、高劑量組TNF-α、CRP含量明顯低于陽性對照組，黃葵膠囊中、高劑量組TNF-α、CRP含量明顯低于黃葵膠囊低劑量組(P<0.05)。見表1。

2.4 各組大鼠腎功能指標(biāo)水平變化比較 模型組、陽性對照組、黃葵膠囊低、中劑量組Scr、BUN、UA含量均較正常對照組明顯增加(P<0.05)，而黃葵膠囊高劑量組Scr、BUN、UA含量接近正常對照組(P>0.05)；陽性對照組、黃葵膠囊低、中、高劑量組Scr、BUN、UA含量較模型組明顯降低，黃葵膠囊低、中、高劑量組Scr、BUN、UA含量低于陽性對照組，黃葵膠囊中、高劑量組Scr、BUN、UA含量低于低劑量組(P<0.05)。見表1。

組別nTNF?α(μg/L)CRP(mg/L)Scr(μmol/L)BUN(mmol/L)UA(mmol/L)正常對照組122 56±0 373 61±0 576 28±1 3276 48±12 9369 81±6 38模型組86 37±0 651)9 82±0 871)16 79±2 141)173 24±17 911)105 49±7 891)陽性對照組95 51±0 471)2)8 97±0 791)2)13 29±1 871)2)149 82±16 521)2)95 27±6 811)2)黃葵膠囊低劑量組114 78±0 531)2)3)7 58±0 711)2)3)10 93±1 681)2)3)127 39±14 391)2)3)84 21±5 421)2)3)黃葵膠囊中劑量組123 59±0 671)2)3)4)5 67±0 681)2)3)4)8 43±1 431)2)3)4)101 27±15 421)2)3)4)76 72±6 491)2)3)4)黃葵膠囊高劑量組122 61±0 412)3)4)5)3 72±0 602)3)4)5)6 17±1 502)3)4)5)77 83±10 922)3)4)5)68 61±7 522)3)4)5)

與正常對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05；與陽性對照組比較:3)P<0.05；與黃葵膠囊低劑量組比較:4)P<0.05；與黃葵膠囊中劑量組比較:5)P<0.05

3 討 論

目前認(rèn)為糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展是糖代謝異常、脂代謝異常、生長因子、細(xì)胞因子、炎性細(xì)胞浸潤、血流動力學(xué)改變、血管活血物質(zhì)以及炎癥遞質(zhì)水平增加等綜合作用的結(jié)果〔5〕。糖尿病腎病病理特征主要為腎小球體積肥大、基底膜增厚以及系膜基質(zhì)增加，從而致使腎小球硬化〔6〕。

目前，臨床上對于糖尿病腎病尚無特效的治療藥物。黃葵膠囊由黃蜀葵花提煉而成，黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵的花，具有清熱利濕、拔毒排膿作用〔7〕?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃蜀葵花有效成分為黃酮類化合物，具有抗感染消除、消除尿蛋白作用，且能夠抵抗血小板聚集，改善腎小球系膜增厚和機(jī)體高凝狀態(tài)作用，可減輕尿蛋白量，降低BUN、Scr，還能夠有效改善機(jī)體微炎癥狀態(tài)以及腎臟功能〔8，9〕。此外，黃葵膠囊還可增加毛細(xì)血管通透性，消除機(jī)體過度自由基，減輕機(jī)體水腫，減輕腎小管間質(zhì)病變〔10〕。本研究結(jié)果表明，黃葵膠囊可通過降低TNF-α、CRP含量改善機(jī)體微炎癥狀態(tài)，且黃葵膠囊的作用呈劑量依賴性，提示黃葵膠囊可通過降低Scr、BUN、UA含量減輕尿蛋白量，進(jìn)而改善大鼠腎臟功能。

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〔2016-01-19修回〕

(編輯 袁左鳴)

江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(SBK201122365)

林 菊(1970-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事腎小球疾病、糖尿病腎病、慢性腎功能不全研究。

張俊峰(1978-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事慢性腎臟病、糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制與防治研究。

R69

A

1005-9202(2016)24-6071-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.24.011