顧進(jìn)華
(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 , 北京海淀100081)
獸醫(yī)中藥的標(biāo)準(zhǔn)化之路
顧進(jìn)華
(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 , 北京海淀100081)
中藥理論獨(dú)特,作用機(jī)理難于用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論闡明;中藥成分復(fù)雜、炮制規(guī)范不統(tǒng)一;處方種類繁多、制劑工藝多樣,導(dǎo)致中藥質(zhì)量難于量化控制。
中藥標(biāo)準(zhǔn)化是歷史命題,從最早的中藥標(biāo)準(zhǔn)《神農(nóng)本草經(jīng)》,最早的中藥材炮制標(biāo)準(zhǔn)《雷公炮制論》,到李時(shí)珍的《本草綱目》[1],《元亨療馬集》,再到現(xiàn)代的《中國藥典》、《中國獸藥典》,為保證中藥的安全性和有效性做出了貢獻(xiàn)。中藥標(biāo)準(zhǔn)化是時(shí)代發(fā)展要求,《中醫(yī)藥創(chuàng)新發(fā)展規(guī)劃綱要(2006-2020)》把中藥技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)研究作為優(yōu)先發(fā)展領(lǐng)域。
實(shí)現(xiàn)獸醫(yī)中藥研究開發(fā)、生產(chǎn)、銷售的標(biāo)準(zhǔn)化,是中藥產(chǎn)品安全有效、質(zhì)量可控的重要保證。標(biāo)準(zhǔn)化是獸藥評(píng)審中客觀評(píng)價(jià)、科學(xué)衡量一個(gè)新藥的重要依據(jù),是關(guān)系到中藥生存的關(guān)鍵問題。標(biāo)準(zhǔn)化可以為中藥獲得知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)提供良好的技術(shù)參照規(guī)范[2],可有效增強(qiáng)我國中藥產(chǎn)業(yè)的國際競(jìng)爭(zhēng)力。
我國復(fù)雜的氣候和地理環(huán)境孕育了眾多療效獨(dú)特的道地藥材,從《神農(nóng)本草經(jīng)》到20世紀(jì)初,藥材的“道地”一直是行之有效的質(zhì)量控制思路和方法[3]。道地藥材理論是中藥材質(zhì)量控制的重要理論。中藥材的標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)該重視傳統(tǒng)方法,結(jié)合產(chǎn)地、加工、炮制,甚至適應(yīng)癥等進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制。目前,按照GAP要求種植藥材是保證藥材質(zhì)量的重要手段。在現(xiàn)有基本標(biāo)準(zhǔn)之上,研究制定優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn),選用優(yōu)質(zhì)藥材。按照中藥道地藥材理論建立綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)體系,嚴(yán)格遵守采收季節(jié)、采收加工要求,這已經(jīng)不是一般的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),而是優(yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。貨真而質(zhì)優(yōu),是中藥材質(zhì)量控制的一項(xiàng)獨(dú)特而又值得肯定的標(biāo)準(zhǔn)。
飲片的標(biāo)準(zhǔn)化要通過炮制的規(guī)范化來實(shí)現(xiàn)。炮制是發(fā)揮中藥藥性的重要手段,在制劑中使用國家標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)藥材應(yīng)遵守有關(guān)炮制規(guī)范;研究新藥材,應(yīng)結(jié)合療效,加強(qiáng)炮制研究,嚴(yán)格規(guī)定藥材飲片的炮制工藝標(biāo)準(zhǔn)。
現(xiàn)代化大生產(chǎn)對(duì)獸醫(yī)中藥生產(chǎn)工藝的規(guī)?;?、標(biāo)準(zhǔn)化提出了迫切需求。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)來看,中藥具有多組分、多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn),不僅是成分不清晰,甚至是主要作用也不明晰。對(duì)于成分復(fù)雜及藥理作用多樣的中藥及制劑,僅對(duì)單一或少數(shù)指標(biāo)成分進(jìn)行定性、定量分析,并不能控制質(zhì)量。
工藝及劑型研究過程中,應(yīng)該堅(jiān)持以療效為導(dǎo)向,深入研究中藥化學(xué)成分的提取、分離和精制技術(shù),絕不能以犧牲療效為代價(jià)來換取劑型的進(jìn)步。對(duì)超微粉、透皮劑等新出現(xiàn)的劑型要盡早研究制定制劑通則,確立新標(biāo)準(zhǔn)。必須加強(qiáng)中藥質(zhì)量全程控制技術(shù)研究,嚴(yán)格按照GMP要求進(jìn)行生產(chǎn),從原材料、生產(chǎn)工藝和條件、半成品、包裝等全程標(biāo)準(zhǔn)化的角度來控制中藥質(zhì)量。
中藥提取物可以是制劑生產(chǎn)過程中的中間產(chǎn)品,也可以是獨(dú)立的成品或制劑,與炮制品一樣可以配伍入藥使用。提高中藥提取物標(biāo)準(zhǔn)化程度,是促進(jìn)中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)化的重要手段。經(jīng)過努力,2010年版《中國獸藥典》新增人參莖葉總皂苷、丹參酮提取物、茵陳提取物等植物油脂和提取物16個(gè)[4-5],并首次將“植物油脂和提取物”單列,集中收載22個(gè)中藥提取物品種,中藥提取物的特殊性及其在制劑應(yīng)用中的重要地位凸顯。
獸藥研發(fā)已經(jīng)開始使用中藥提取物配伍制劑,如黃芪多糖粉、博落回散,以及由“黃芩提取物”、“黃藤素”兩種提取物配伍處方的新獸藥制劑“芩藤注射液”。
目前生產(chǎn)實(shí)踐中,提取物種類繁多,應(yīng)該綜合考慮各類提取物的定位,盡量統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。2015年版《中國藥典》正文收載中藥提取物47種,一些制劑后附專用提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),大多有明確的制劑指向,有較完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),可以大量借鑒并移植為獸藥。
中藥的質(zhì)量集中體現(xiàn)在療效,控制質(zhì)量是為了確保療效,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立是中藥標(biāo)準(zhǔn)化的核心問題。
獸醫(yī)中藥國家標(biāo)準(zhǔn)主要采用“基源”、“處方”、“性狀”、“鑒別”、“檢查”、“特征(指紋)圖譜”、“含量測(cè)定”等對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行控制。
“獸藥規(guī)范”1978年版開始采用顯微鑒別、薄層層析法;《中國獸藥典》1990年版開始采用薄層色譜(TLC)鑒別,用分光光度法做含量測(cè)定;2000年版收載對(duì)照藥材的TLC鑒別,用TLC和高效液相色譜法(HPLC)做含量測(cè)定;2005版大幅度增加TLC鑒別方法;2010年版大幅度增加TLC、HPLC方法,增加了特征(指紋)圖譜的測(cè)定;2015年版進(jìn)一步完善了顯微鑒別,增加了質(zhì)譜法、二氧化硫殘留量測(cè)定法。
獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)中的控制方法除化學(xué)定量、儀器分析方法之外,廣泛應(yīng)用顯微、薄層等定性方法,以及生物學(xué)方法。概括起來,可以分為“性狀評(píng)價(jià)”、“化學(xué)評(píng)價(jià)”、“生物評(píng)價(jià)”幾個(gè)大類。
3.1 性狀評(píng)價(jià)
3.1.1 外觀性狀不可或缺 規(guī)定和評(píng)價(jià)藥品的外觀、氣、味、一般穩(wěn)定性、溶解度以及物理常數(shù)等。包括藥材的經(jīng)驗(yàn)鑒別。
3.1.2 顯微性狀鑒別簡(jiǎn)便可行 利用顯微鏡觀察藥材(飲片)切片、粉末、解離組織或表面制片的組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀、內(nèi)含物的特征,以及顯微化學(xué)反應(yīng),用以鑒別藥材、制劑的真?zhèn)闻c純度的顯微鑒別技術(shù)。
顯微鑒別有著快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。不少中成藥所具有的顯微綜合特征專屬性強(qiáng),不易發(fā)生混淆。應(yīng)用顯微鑒別技術(shù),既可檢測(cè)出中成藥所列出的組分,還能夠通過指標(biāo)性鑒別特征檢測(cè)出處方中某些未列出的組分,用于處方外非法添加物的檢測(cè)。隨著顯微鑒定與顯微化學(xué)、高性能顯微鏡與數(shù)碼技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用,顯微鑒別技術(shù)還會(huì)得到更廣泛的應(yīng)用。
3.2 理化評(píng)價(jià) 中藥的鑒別,除依據(jù)藥材來源,以及利用經(jīng)驗(yàn)鑒別法、顯微鑒別法外,大量采用理化方法、色譜法、特征(指紋)圖譜等方法以及某些理化常數(shù)的測(cè)定,來判斷藥材、植物油脂和提取物、制劑的真?zhèn)巍?/p>
3.2.1 薄層色譜應(yīng)用廣泛 薄層色譜為目前中藥制劑質(zhì)量控制采用最多也是非常有效的定性檢測(cè)方法。一般中藥制劑中2/3以上的藥材都可以借鑒單個(gè)藥材薄層特點(diǎn)建立薄層鑒別方法,新藥開發(fā)中應(yīng)廣泛開展試驗(yàn),驗(yàn)證或探索薄層展開系統(tǒng)條件。確實(shí)分離度不好或薄層陰性干擾太大的,應(yīng)在申報(bào)資料中說明不作為鑒別內(nèi)容的理由。
3.2.2 指紋圖譜/特征圖譜主要運(yùn)用于提取物 中藥指紋圖譜/特征圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后,采用一定的分析手段,得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。目前主要應(yīng)用于中藥提取物,三七總皂苷、丹參總酚酸提取物、丹參酮提取物的指紋圖譜;人參莖葉總皂苷、連翹提取物、茵陳提取物的特征圖譜。
3.2.3 含量測(cè)定存在一定的局限性 采用化學(xué)、儀器測(cè)定的方法測(cè)定獸醫(yī)中藥有效成分或指標(biāo)成分的含量,是獸醫(yī)中藥質(zhì)量控制的重要手段。在新藥研究過程中要確定部分含量指標(biāo),通過測(cè)定原料和最終產(chǎn)品的含量,計(jì)算目標(biāo)成分的轉(zhuǎn)移率,以考察工藝的合理性。面對(duì)成分復(fù)雜的獸醫(yī)中藥,對(duì)單一甚或多個(gè)指標(biāo)成分進(jìn)行含量測(cè)定,都存在一定的局限性。采用簡(jiǎn)單含量標(biāo)準(zhǔn)難以適應(yīng)多治療目的質(zhì)量評(píng)價(jià)要求,中藥質(zhì)量控制模式不應(yīng)拘泥于單一的“找成分,測(cè)含量”的化學(xué)評(píng)價(jià)模式[7]。
3.2.4 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的精準(zhǔn)與模糊控制 目前,對(duì)單一或少數(shù)指標(biāo)成分進(jìn)行定性、定量分析是獸醫(yī)中藥質(zhì)量分析常用方法。對(duì)于成分復(fù)雜及藥理作用多樣的中藥及制劑,單一或少數(shù)指標(biāo)成分的定性、定量分析,并不能控制質(zhì)量,不能全面反映其臨床功效;制定一個(gè)或多個(gè)量化指標(biāo)也無法準(zhǔn)確指導(dǎo)臨床應(yīng)用。中藥成分復(fù)雜,各味藥甚至一味藥的不同成分之間都可能有相互的配伍效應(yīng),既要重視定性定量指標(biāo),又要注重與藥理臨床結(jié)合的綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)[8]。
對(duì)于藥材而言,所含成分95%以上是不清楚的,規(guī)定有效成分或指標(biāo)成分的含量,在絕大多數(shù)情況下,缺少可行性。由于生物多樣性影響,不少藥材所測(cè)含量變化幅度極大。黃連中的小檗堿、山茱萸中的熊果酸、牡丹皮中的丹皮酚等,由于產(chǎn)地、氣候、土壤等原因經(jīng)常達(dá)不到國家標(biāo)準(zhǔn),即所謂“不合格的真品藥材”[3]。美國第24版藥典對(duì)番瀉葉、番瀉葉浸膏和番瀉葉糖漿均未要求測(cè)定番瀉苷含量,對(duì)番瀉葉藥材質(zhì)量控制著重在形態(tài)特征、非藥用部位灰分等指標(biāo)上。
如何根據(jù)獸醫(yī)中藥標(biāo)準(zhǔn)化特色要求,運(yùn)用非線性科學(xué)、模糊數(shù)學(xué)、灰色系統(tǒng)理論等,實(shí)現(xiàn)獸醫(yī)中藥質(zhì)量的精確而又模糊的整體控制是今后研究的重要命題。
3.3 生物評(píng)價(jià) 生物評(píng)價(jià)具有藥效相關(guān)、整體可控等優(yōu)勢(shì),符合中醫(yī)藥特點(diǎn)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制模式及方法,是中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化的重要發(fā)展方向[9]。
中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)可分為兩大類:一是基于遺傳信息的中藥基源DNA分子鑒定,如RAPD、DNA條形碼等,主要用于中藥基源鑒定;二是基于生物效應(yīng)的中藥生物效價(jià)或活性檢測(cè),主要用于中藥質(zhì)量的優(yōu)劣評(píng)價(jià)。
2005年版藥典中水蛭的含量測(cè)定,國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中的消栓腸溶膠囊的效價(jià)測(cè)定,均為借鑒生物制品中酶效價(jià)測(cè)定方法。早在20世紀(jì)90年代,農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的新藥黃芪多糖注射液就開始采用小鼠脾增重方法測(cè)定生物活性。中國藥典已經(jīng)對(duì)清熱解毒類、活血化瘀類中藥制定了一些生物評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),以及動(dòng)物藥如蘄蛇的模板DNA提取、PCR反應(yīng)等等,都可以借鑒使用。對(duì)于另外的中醫(yī)藥的基礎(chǔ)理論,如寒熱溫涼,中醫(yī)證的辨證論治,現(xiàn)在沒有確切的現(xiàn)代概念的認(rèn)識(shí),但其本質(zhì)也是一種生物體的過程和反應(yīng),隨著現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展,如基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、混沌醫(yī)學(xué)等的發(fā)展,也許可以將中藥的藥性、功能與主治等關(guān)聯(lián)起來,出現(xiàn)新的、具有變革性的生物檢定方法。
我們要深入研究,在加強(qiáng)現(xiàn)代檢測(cè)手段應(yīng)用的同時(shí),重視傳統(tǒng)技術(shù)手段;在采用物理、化學(xué)評(píng)價(jià)技術(shù)的同時(shí),大力發(fā)展生物評(píng)價(jià)技術(shù)。在傳統(tǒng)理論和技術(shù)手段基礎(chǔ)上,綜合運(yùn)用現(xiàn)代物理、化學(xué)、生物學(xué)技術(shù)手段,創(chuàng)新理論與方法,完全可以按照中醫(yī)藥基本理論,建立符合中藥特點(diǎn)的科學(xué)、合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)體系,趟出一條中藥研究、生產(chǎn)與質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)化新路。
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2016-06-08