鄭得利 陳明生 楊建富

（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東諸城 262200）

瘦肉精快速檢測技術(shù)探究

鄭得利 陳明生 楊建富

（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東諸城 262200）

鹽酸克倫特羅俗稱“瘦肉精”，鹽酸克倫特羅是最早用于人平喘的一種β-興奮劑，20世紀80年代美國Cyanamid公司意外發(fā)現(xiàn)其具有明顯促進生長、提高瘦肉率及減少脂肪的效果，于是鹽酸克侖特羅等β—興奮劑被當作“營養(yǎng)重分配劑”或“促進生長劑”，被國際畜禽科學家廣泛研究。這些藥物具有良好的抗藥和促生長作用，由于它們具有嚴重的殘留毒性，各國都逐漸禁止在畜牧生產(chǎn)中使用這些藥物，但某些不法商人為得到較好的利益，仍然在養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用被命令禁止添加的藥物，面對層出不窮的食品安全問題和溯源管理難等問題，因此快速檢測技術(shù)和儀器及試劑的研究具有特殊的意義。

“瘦肉精”的快速檢測技術(shù)。β-興奮劑的檢測方法根據(jù)原理不同可分為色譜技術(shù)、免疫分析技術(shù)等。色譜技術(shù)：高效液相色譜法、高效液相色譜質(zhì)譜法、氣相色譜——質(zhì)譜聯(lián)用，特點是色譜技術(shù)需要時間較長，設(shè)備要求高、需專業(yè)人員操作；靈敏度和分辨率都很高，可作為確證時使用。免疫分析技術(shù)：酶聯(lián)免疫吸附法——定量、篩選；金標免疫檢測技術(shù)——定性、篩選。特點是成本低、速度快、靈敏度較高、儀器設(shè)備較簡單，可以定性或半定量，通過大量實驗證明適合大批量樣品的快速檢測和分析，是采用的最合適篩選檢測方法，酶聯(lián)免疫吸附法是最適合實驗室篩選檢測方法。

目前，諸城市全市生豬屠宰企業(yè)26家，年屠宰量超近400多萬頭，為保證生豬及其產(chǎn)品質(zhì)量安全，.市畜牧獸醫(yī)管理局和企業(yè)認真搞好生豬、鮮乳等畜禽產(chǎn)品的藥物殘留及有害物質(zhì)的檢測，積極探討在實際工作中既有效又快速的檢測（監(jiān)測）方法，嚴格執(zhí)行國家標準、行業(yè)標準，按照畜產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控《官方抽樣程序》《動物及動物產(chǎn)品獸藥殘留監(jiān)控抽樣規(guī)范》《獸藥殘留實驗室質(zhì)量控制規(guī)范》，執(zhí)行 《無公害食品豬肉、豬肝、豬尿抽樣方法》，嚴格遵守農(nóng)業(yè)部2002年12月第235號公告《動物性食品中獸藥殘留量最高殘留限量》，2002年3月農(nóng)牧發(fā)[2002］1號文件《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》。

面對大量的畜牧業(yè)生產(chǎn)，搞好動物、動物性產(chǎn)品藥物（瘦肉精）殘留監(jiān)控，酶聯(lián)免疫法、膠體金檢測法是最佳的篩查方法，有利于快速檢測出動物、動物性產(chǎn)品藥物殘留。

畜牧局為了確保屠宰企業(yè)生豬產(chǎn)品質(zhì)量不出問題，要求基層官方獸醫(yī)在搞好屠宰檢疫的同時同企業(yè)肉品品質(zhì)檢驗員一起按5%～10%的比例（批次數(shù)量少的至少抽1～2份樣品）對生豬及其產(chǎn)品進行采樣，送市動物疫病預防控制中心（諸城市畜牧獸醫(yī)檢測中心）進行獸藥殘留監(jiān)（檢）測，執(zhí)行國標GB/T5009、192—2003檢測鹽酸克倫特羅，到目前為止未檢測出“瘦肉精”生豬及其產(chǎn)品。

實驗室檢測方法：最終確定鹽酸克倫特羅采用酶聯(lián)免疫法.檢驗記錄為樣品名稱：豬肉。樣品編號：zcxm201502001—020。檢品數(shù)量：100克*20份。樣品狀態(tài)：新鮮、無異味。環(huán)境溫度：溫度25度、濕度60%RH。檢驗依據(jù)：GB/T5009.192—2003。試劑盒生產(chǎn)廠家及批號：無錫中德伯爾生物技術(shù)有限公司、ZD—CLEN—20150120。檢驗時間：2014年9月22日。

1　實驗儀器、試劑準備

1.1主要使用儀器

酶標儀ZCXMJC/YB—030，電子天平ZCXMJC/YB—006，離心機ZCXMJC/YC—013，移液器。

1.2試劑準備

0.1M的HCl：用移液管取0.83 ml鹽酸（36%～38%）加超純水定容到100ml；1M的NaOH：用電子天平（ZCXMJC/YB—006）稱取4gNgOH，加超純水定容到100ml；4%氯化鈉：用電子天平（ZCXMJC/YB—006）稱取8g氯化鈉加去離子水混勻定容至200ml；4%氯化鈉—0.1M鹽酸混合液：用量筒量取140ML4%氯化鈉溶液、40 ML0.1M鹽酸溶液和20ML超純水（或雙蒸水）混勻；洗滌工作液：用移液器取4ML濃縮洗滌液加入36 ML去離子水稀釋，混勻后使用。

2　樣品前處理

（1）將待檢樣品剔除可見脂肪后勻漿。

（2）用電子天平zcxm/yB—006稱取勻質(zhì)過的樣品2g至50ml塑料離心管中，加入6ml4%氯化鈉—0.1M鹽酸混合液，振蕩3min，室溫靜置20min；于離心機zcxmJc/yC—013中500轉(zhuǎn)離心10min。

（3）取1ml上清液，加入20μl1M的NaOH溶液，使樣本液的pH值在5.5～6.0之間，此夜作為待檢液用于分析。

3　實驗步驟

（1）提前取出試劑盒使所有試劑恢復到室溫，每份樣做兩孔，按實際所需，取出4條孔條插入微孔架。

（2）加入100μl標準液或處理好的樣品到各自對應(yīng)的微孔中，并做好對應(yīng)記錄，隨即每孔加入50μl鹽酸克倫特羅標記的HRP溶液，輕輕震蕩混勻，封膜，置25℃孵育30min。

（3）倒出孔中液體，在吸水紙上拍打數(shù)次，確保孔中液體完全被去除。然后每孔中加入250μl的洗滌液，靜置2min，倒掉液體，拍打至凈，此后重復操作3次。

（4）每微孔中加入100μl的混合底物液50μl底物A和50μL底物B混合，充分混合并在37℃恒溫箱zcxmJc/yB—038暗處孵育15min。

（5）每孔加入50μl的反應(yīng)終止液，混合好后五分鐘內(nèi)于酶標儀zcxmJc/yB—030上450nm處測出吸光值。