許豪然　廖華軍　王河山　吳水生

福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建　福州　350122

?

文獻(xiàn)綜述

鉤吻的研究進(jìn)展

許豪然廖華軍王河山吳水生

福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122

【摘要】鉤吻為我國(guó)傳統(tǒng)的藥用植物，具有很強(qiáng)的毒性，同時(shí)具有鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、提高免疫力等生物活性，受到國(guó)內(nèi)學(xué)者廣泛的關(guān)注。筆者從鉤吻的化學(xué)成分、生物活性、代謝特征等方面進(jìn)行綜述， 以期為鉤吻的進(jìn)一步研究提供參考。

【關(guān)鍵詞】鉤吻；化學(xué)成分；生物活性；代謝特征；研究進(jìn)展

鉤吻Gelsemiumelegans(Gardn.etChamp.)Benth.為馬錢科葫蔓藤屬植物，又名斷腸草、豬人參等。鉤吻始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，性溫味辛、苦，有大毒[1]，全草可入藥，主要分布于福建、浙江等地，是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用植物，也是世界著名的劇毒藥物[2]。其不僅具有祛風(fēng)散瘀、消腫止痛、攻毒殺蟲的功效，還具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、抗腫瘤、提高免疫力等多方面作用[3]。我國(guó)民間以其毒性大，一直以外用為主，但鉤吻具有很高的藥用價(jià)值。近幾年，一些國(guó)內(nèi)外的專家及學(xué)者對(duì)鉤吻進(jìn)行了大量的研究，并取得了一定的研究成果。本文通過查閱近五年國(guó)內(nèi)的鉤吻研究文獻(xiàn)，綜述鉤吻的國(guó)內(nèi)最新研究進(jìn)展，以利于進(jìn)一步研究和開發(fā)鉤吻的藥用資源。

1化學(xué)成分研究

1.1化合物結(jié)構(gòu)類型近年來，許多國(guó)內(nèi)外的專家對(duì)鉤吻的化學(xué)成分做了大量的研究，發(fā)現(xiàn)鉤吻的化學(xué)成分主要是生物堿類的化合物，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)50多種生物堿類化合物，主要分為鉤吻素甲類(Gelsemine)、鉤吻子素類(Koumine)、蛇根精類(Sarpagine)、胡蔓藤乙素類(Humantenine)、甲基鉤吻素乙類(Gelsedine)、Yohimbane等六大類型。除生物堿外，還包含大量的非生物堿,主要有苯丙素類化合物，酚酸類化合物，三萜類化合物，甾體及其苷類化合物，脂肪烷醇類揮發(fā)油等[4]。

1.2提取純化工藝研究王河山等[5]從3種不同型號(hào)的樹脂中篩選AB-8型大孔吸附樹脂可有效地富集閩產(chǎn)鉤吻根總生物堿，再對(duì)最佳樹脂吸附工藝參數(shù)進(jìn)行全面優(yōu)化，確定最佳洗脫條件為90%乙醇洗脫，溶劑用量4BV。陳衛(wèi)琳等[6]對(duì)閩產(chǎn)鉤吻根、莖、葉3個(gè)部位中的鉤吻堿甲、鉤吻素子及葫蔓藤堿甲的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示同一鉤吻植株不同部位生物堿的種類及含量存在較明顯的差異，鉤吻總生物堿以根部的含量最高，而葉部的含量最低。劉浩等[7]從中國(guó)鉤吻中提取得到的鉤吻總堿以氯仿-甲醇-0.1mol/LHCl為溶劑體系，通過高速逆流色譜進(jìn)行分離鉤吻素子，高效液相色譜分析得到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.2%。以正己烷-乙酸乙酯-無水乙醇-水和氯仿-甲醇-0.2mol/L鹽酸為溶劑體系，鉤吻總堿中分離純化出鉤吻素甲單體，純度為97.76%[8]。

1.3含量檢測(cè)葉麗香等[9]采用高效液相色譜法測(cè)定3個(gè)批次鉤吻素子的含量，并考察鉤吻素子水溶液在室溫條件下穩(wěn)定性，方法簡(jiǎn)單易行、專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，適用于鉤吻素子含量測(cè)定，鉤吻素子水溶液室溫條件下連續(xù)7d穩(wěn)定性良好。蘇燕評(píng)等[10]通過對(duì)鉤吻素子的基本理化性質(zhì)及其水溶液穩(wěn)定性研究，發(fā)現(xiàn)鉤吻素子的水溶性較強(qiáng)，堿性條件下其親脂性比酸性條件下高，高溫條件下其強(qiáng)酸性水溶液穩(wěn)定性較差。馬克芹等[11]建立GC-MS法測(cè)定人血中鉤吻堿甲含量的方法。樣品經(jīng)乙醚提取、混懸、離心，取有機(jī)層氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)状级ㄈ?，離心，上清液GC/MS分析，方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為測(cè)定人血中鉤吻堿甲含量的方法。

2生物活性研究

國(guó)內(nèi)對(duì)鉤吻的活性研究歷史悠久，發(fā)現(xiàn)鉤吻具有抗腫瘤[12-13]、免疫調(diào)節(jié)[14]、鎮(zhèn)痛抗炎[15]、抗應(yīng)激[16]等活性。但是，由于鉤吻總堿的中毒劑量與有效治療劑量相接近，導(dǎo)致其應(yīng)用受到限制，故近年來，鉤吻堿單體的藥理作用越來越受到人們的重視[17]。

2.1抗腫瘤高明雅等[17]用鉤吻素子、鉤吻素甲、鉤吻素己生物堿單體對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制作用，并探討其相關(guān)機(jī)制,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3種鉤吻生物堿單體中鉤吻素己能顯著抑制HepG2細(xì)胞體外增殖且細(xì)胞毒性較小，并通過影響細(xì)胞周期分布和激活Capspase-8、Capspase-9進(jìn)而活化Capspase-3發(fā)揮抗腫瘤作用。

2.2抗炎鎮(zhèn)痛鉤吻素子對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎可能具有顯著的治療作用，該作用與其上調(diào)脾臟Treg細(xì)胞量可能有關(guān)[18]。李蘇平等[19]研究發(fā)現(xiàn)鉤吻素子抗神經(jīng)病理性疼痛(NPP)作用可能與上調(diào)脊髓3α-HSD酶表達(dá)有關(guān)。

2.3抗焦慮黃慧慧等[20]以大鼠高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)為動(dòng)物模型，評(píng)價(jià)鉤吻素子單次皮下注射給藥和連續(xù)皮下注射給藥的抗焦慮活性及特點(diǎn)，鉤吻素子能顯著增加大鼠進(jìn)入高架十字迷宮開臂次數(shù)和在開臂的停留時(shí)間百分率，鉤吻素子在實(shí)驗(yàn)劑量下對(duì)大鼠自主運(yùn)動(dòng)活性無影響，鉤吻素子可能具有抗焦慮作用。

2.4其他陳超杰等[21]研究發(fā)現(xiàn)鉤吻素子在治療范圍的較高劑量下能引起小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用，超過治療劑量范圍的一定時(shí)間內(nèi)則產(chǎn)生興奮作用。許盈等[22]采用離體豚鼠回腸藥物依賴模型、小鼠藥物依賴催促戒斷模型和自然戒斷模型，分析鉤吻素子誘導(dǎo)嗎啡樣身體依賴性的潛力,實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，鉤吻素子可能無產(chǎn)生嗎啡樣身體依賴性的潛力。

3體內(nèi)外代謝研究

許盈等[23]建立HPLC測(cè)定大鼠血液和組織鉤吻素子含量的方法，進(jìn)而研究單次灌胃給予鉤吻素子的大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)以及組織分布。采用萃取法預(yù)處理大鼠的血液和組織樣品；建立HPLC-紫外檢測(cè)法測(cè)定生物樣品的鉤吻素子含量的方法，方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確靈敏，可用于鉤吻素子體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究；鉤吻素子在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)符合二室模型；鉤吻素子在大鼠體內(nèi)分布迅速廣泛，以消化道濃度為高，可透過血腦屏障，消除速度快。

楊櫻等[24]研究鉤吻素子在豬和SD大鼠2種不同種屬肝微粒體體外代謝差異，評(píng)價(jià)其對(duì)鉤吻素子的代謝作用，初步揭示豬肝臟細(xì)胞色素P450酶系的解毒作用。在孵育條件相同的情況下，鉤吻素子與豬肝微粒體的孵育液在21min出現(xiàn)了一個(gè)色譜峰，且鉤吻素子峰面積有所減小，而鉤吻素子與大鼠肝微粒體孵育液中未出現(xiàn)任何物質(zhì)，且峰面積未有變化。結(jié)論為在相同孵育條件下，豬肝微粒體可以代謝鉤吻素子，而SD大鼠卻無此現(xiàn)象。李彧等[25]建立UPLC-MS/MS法測(cè)定大鼠肝微粒體中鉤吻素子的濃度及其酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究，方法簡(jiǎn)單、快速、可靠，適應(yīng)于鉤吻素子的體外代謝研究。

4鑒別技術(shù)

余淑琳等[26]采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)鑒別有毒植物鉤吻，發(fā)現(xiàn)采用LAMP方法能夠成功鑒別出鉤吻和金銀花類藥材及其水提液。LAMP方法用于鑒別有毒植物具有一定的可行性。鄧禮明等[27]探討基層實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)斷腸草鉤吻堿的方法,為應(yīng)對(duì)斷腸草中毒事件提供了快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、實(shí)用的技術(shù)。方法:根據(jù)鉤吻堿具有堿性的特點(diǎn),用5%氫氧化鈉浸泡,再用超聲波提取,然后用三氯甲烷萃取。提取物用傳統(tǒng)化學(xué)顯色法進(jìn)行初步鑒定,再將樣品濃縮液點(diǎn)樣于熒光254nm硅膠薄層板上,展開后置于熒光燈下觀察鉤吻堿的展開情況。該法在食物中毒快速鑒定過程中實(shí)用、可靠,可供基層實(shí)驗(yàn)室參考。

5小結(jié)

總之，鉤吻是著名的劇毒植物，鉤吻的毒性主要來源于生物堿成分，總堿的中毒劑量與有效治療劑量相接近，被認(rèn)為是已發(fā)現(xiàn)的生物堿中毒性最大的植物，因而其應(yīng)用受到極大的限制。但由于其臨床療效顯著，越來越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，目前的研究主要集中在化學(xué)成分、生物活性等研究。但是對(duì)于如何降低藥物的毒性，增強(qiáng)臨床應(yīng)用的安全性還未見相關(guān)報(bào)道。因此，利用中藥炮制、配伍減毒的原理降低鉤吻的毒性保留或增強(qiáng)原有的療效，對(duì)發(fā)揮鉤吻藥材獨(dú)特的療效及開發(fā)鉤吻的藥材資源具有重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1]全國(guó)中草藥匯編編寫組.全國(guó)中草藥匯編:下冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1983：118-121．

[2]陳冀勝.中國(guó)有毒植物[M].北京：科學(xué)出版社，1987：371．

[3]穆鳳揚(yáng),穆鳳文,穆鳳鳴,等. 鉤吻的化學(xué)成分與生物活性研究進(jìn)展[J].黑龍江科技信息,2015,03:75-77.

[4]劉發(fā)巧.西雙版納地區(qū)鉤吻的化學(xué)成分研究[D].昆明：云南大學(xué),2015.

[5]王河山,吳水生,王英豪,等. 閩產(chǎn)鉤吻根總生物堿的分離純化研究[J]. 海峽藥學(xué),2015,07:46-49.

[6]陳衛(wèi)琳,楊櫻,吳水生. 閩產(chǎn)鉤吻根莖葉中鉤吻堿甲和鉤吻素子及葫蔓藤堿甲的含量測(cè)定[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,05:48-50，72.

[7]劉浩,沈潔,劉銘,等.高速逆流色譜分離制備鉤吻素子[J].中藥新藥與臨床藥理,2013,02:197-200.

[8]劉浩,沈潔,劉銘,等.高速逆流色譜分離純化鉤吻中鉤吻素甲[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2013,04:479-483，488.

[9]葉麗香,蘇燕評(píng),曹大炫,等.UPLC測(cè)定鉤吻素子的含量及其水溶液穩(wěn)定性[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2015,04:471-474.

[10]蘇燕評(píng),石冬梅,范振東,等.鉤吻素子的基本理化性質(zhì)及其水溶液穩(wěn)定性[J]. 福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,04:195-198.

[11]馬克芹,王毅.GC/MS法測(cè)定人血中鉤吻堿甲[J]. 微量元素與健康研究,2014,06:48-50.

[12]王寅，云峰，林文，等.鉤吻總堿對(duì)肝癌細(xì)胞HepG-2 的體外抑制作用[J]. 中藥材， 2001， 24( 8) : 579-580.

[13]梁維君，飛云，曾明，等.鉤吻提取液對(duì)HL60 細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和細(xì)胞周期的影響[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)( 醫(yī)學(xué)版)，2004，1( 1) : 39-43.

[14]周利元，王坤，黃蘭青，等. 鉤吻對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)臨床免疫學(xué)雜志，1992，4( 4) : 14-16.

[15]周名璐，黃聰，楊小平. 鉤吻總堿的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及安全性[J].中成藥， 1998,20( 1) : 35-36.

[16]王友順.鹽酸鉤吻及其化合物對(duì)小鼠免疫功能的影響[J].海軍醫(yī)專學(xué)報(bào),1989,11(1):22

[17]高明雅,沈偉哉,吳顏暉,等. 鉤吻生物堿單體對(duì)肝癌細(xì)胞體外抑制作用機(jī)制的初步研究[J]. 中藥材,2012,03:438-442.

[18]廖婉婷. 鉤吻素子對(duì)C57BL/6小鼠類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療作用[D].福州：福建醫(yī)科大學(xué),2014.

[19]邱宏強(qiáng),許盈,楊漸,等. 鉤吻素子對(duì)坐骨神經(jīng)慢性束縛損傷模型大鼠脊髓3α-羥化類固醇脫氫酶表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2012,03:443.

[20]黃慧慧,劉銘,陳超杰,等. 鉤吻素子對(duì)大鼠焦慮行為的影響[J]. 西北藥學(xué)雜志,2014,06:593-595.

[21]陳超杰,辛志明,林菁,等. 鉤吻素子對(duì)小鼠自主行為、協(xié)調(diào)平衡和巴比妥閾下催眠作用的影響[J]. 福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,02:83-85.

[22]許盈,丘宏強(qiáng),沈潔,等. 鉤吻素子無嗎啡樣藥物依賴性[J]. 福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,04:210-213.

[23]許盈,鄭宓,李蘇平,等. 鉤吻素子在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及組織分布[J]. 福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,04:199-203.

[24]楊櫻,陳建忠,吳水生,等. 鉤吻素子在豬及大鼠肝微粒體中代謝表征的研究[J].福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,02:47-49.

[25]李彧,曾榮潔,鄭雪卿,等. 大鼠肝微粒體中鉤吻素子UPLC-MS/MS法測(cè)定與酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究[J]. 福建中醫(yī)藥,2013,03:50-52.

[26]余淑琳,蔣超,黃璐琦,等. 基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速鑒別鉤吻[J]. 中藥材,2014,04:594-596.

[27]鄧禮明,黃俊鋒,盧志堅(jiān),等. 基層實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)斷腸草中鉤吻堿的技術(shù)研究[J]. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,04:777-779.

基金項(xiàng)目：福建中醫(yī)藥大學(xué)重點(diǎn)學(xué)科專項(xiàng)(X2014102，X2014146)。

【中圖分類號(hào)】R284

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)10-0037-02

(收稿日期：2016.03.18)