霍麗靜　張明明　謝　霞　趙　培　宋光耀

(河北省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北　石家莊　050051)

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高膽固醇血癥低密度脂蛋白受體基因XspI位點(diǎn)多態(tài)性與內(nèi)脂素的相關(guān)性

霍麗靜張明明謝霞趙培宋光耀

(河北省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050051)

摘要〔〕目的探索高膽固醇血癥低密度脂蛋白受體(LDL-R)基因XspI位點(diǎn)多態(tài)性與內(nèi)脂素的相關(guān)性。方法應(yīng)用聚合酶鏈技術(shù)-限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)檢測LDL-R基因第2外顯子XspI位點(diǎn)基因多態(tài)性，將224例高膽固醇血癥患者按照基因型分為三組：X+X+組；X+X-組；X-X-組。同時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清內(nèi)脂素的水平。結(jié)果①高膽固醇血癥組與正常對照組相比，腰圍、體重指數(shù)(BMI)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C),氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、內(nèi)脂素明顯升高(P<0.05)。②X+X+組體重、腰圍、BMI、LDL、oxLDL較X-X-組和 X+X-組明顯升高(P<0.05)。③血清內(nèi)脂素水平在X-X-組 、X+X-組、X+X+組中依次升高(P<0.05)。④血清內(nèi)脂素與體重、腰圍、BMI、總膽固醇(TC)、LDL-C、oxLDL呈正相關(guān)(r分別為0.226、0.277、0.272、0.332、0.348、0.372，P<0.05)。結(jié)論①高膽固醇血癥組較正常對照組體重、腰圍、BMI 、oxLDL、內(nèi)脂素升高。②LDL-R基因 XspI X+X+基因型組體重、腰圍、BMI均高于X-X-組和X-X+組。③血清內(nèi)脂素水平與LDL-R基因多態(tài)性有關(guān)，X+X+組內(nèi)脂素水平最高。④內(nèi)脂素與血清TC、LDL-C、oxLDL水平呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕高膽固醇血癥；基因多態(tài)性；脂肪細(xì)胞因子；氧化低密度脂蛋白；內(nèi)脂素

高膽固醇血癥與心腦血管和代謝性疾病關(guān)系密切，已成為研究的熱點(diǎn)〔1〕。血清總膽固醇(TC)水平受多種因素影響，研究發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白受體(LDL-R)在血漿膽固醇的動態(tài)平衡中起著關(guān)鍵性的作用，其功能缺陷可以導(dǎo)致高膽固醇血癥〔2〕。LDL-R基因的XspI酶切位點(diǎn)位于LDL-R 基因的第2外顯子，第97位堿基發(fā)生C→T 突變，產(chǎn)生1個(gè)XspI酶識別位點(diǎn)。該突變位點(diǎn)位于配體結(jié)合域內(nèi)，該區(qū)域發(fā)生突變可導(dǎo)致結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的功能下降，使LDL-C清除障礙，在體內(nèi)蓄積，導(dǎo)致血清中TC水平升高〔3〕。內(nèi)脂素是內(nèi)臟組織而非皮下脂肪組織分泌的一種新的脂肪細(xì)胞因子，其血漿濃度與內(nèi)臟脂肪含量密切相關(guān)。而目前關(guān)于LDL-R基因多態(tài)性與內(nèi)脂素水平關(guān)系的研究未見報(bào)道。

1對象與方法

1.1研究對象選取我院體檢中心2010年12月至2011年12月健康查體人群中224例高膽固醇血癥患者，診斷參考2007年“中國成人血脂異常防治指南”中臨床分型標(biāo)準(zhǔn)〔4〕。 同時(shí)收集健康對照組120例作正常對照，兩組人群年齡〔(51.2±10.2)歲，(50.8±9.92)歲〕匹配。根據(jù)LDL-R基因第2外顯子XspI位點(diǎn)基因多態(tài)性將受試者按照基因型分為三組：X+X+組18例；X+X-組45例；X-X-組161例。

1.2研究方法一般指標(biāo)：測量身高、體重、腰圍和血壓，計(jì)算體重指數(shù)(BMI)。血脂測定：健康體檢人群過夜空腹12 h，次日清晨抽取肘靜脈血，留取4 ml,置于促凝管中，分離血清，待測血脂；另取4 ml置于(EDTA)抗凝管中，置于-80℃低溫冰箱中保存，用于提取DNA。TC、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)采用氧化酶法測定，LDL-C計(jì)算得出。數(shù)據(jù)均由全自動生化分析儀測得，試劑盒由Beckman生物技術(shù)公司提供。氧化低密度脂蛋白(oxLDL)與內(nèi)脂素的測定：酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測oxLDL與內(nèi)脂素。oxLDL 試劑盒由美國RB公司提供，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<10%；最小可測人oxLDL達(dá)0.5 μg/dl。內(nèi)脂素試劑盒由美國RB公司提供，最小可測人內(nèi)脂素達(dá)3 ng/ml；板內(nèi)、板間變異系數(shù)均<10%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0軟件行方差分析及χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1高膽固醇血癥受試者PCR-RFLP分析結(jié)果X+X+組體重、腰圍、BMI較X-X-組和 X+X-組明顯升高(P<0.05)。血清TC、LDL-C、oxLDL、內(nèi)脂素水平在X-X-組 、X+X-組、X+X+組中依次升高(P<0.05)。見表1。

組別n年齡(歲)體重(kg)腰圍(cm)BMI(kg/m2)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)oxLDL(μg/dl)內(nèi)脂素(ng/ml)X+X+組1848.0±10.1579.17±14.181)2)94.33±11.401)2)28.84±3.331)2)8.49±0.391)2)0.67±0.161.58±0.266.61±0.561)2)72.68±9.181)2)37.71±15.681)2)X+X-組4550.92±7.4767.42±6.6088.67±6.8725.16±1.897.38±0.471)0.77±0.211.56±0.205.60±0.451)34.29±16.981)30.50±9.841)X-X-組16152.18±10.4666.38±10.1285.44±8.1824.94±2.576.96±0.610.75±0.221.73±0.354.89±0.6415.34±16.8420.91±7.27F值1.7274.4953.8816.49520.5850.481.75926.18437.37716.293P值<0.05<0.05<0.05<0.05<0.05>0.05>0.05<0.05<0.05<0.05

與X-X-組比較：1)P<0.05；與X+X-組比較：2)P<0.05

第一作者：霍麗靜(1979-)，女，主管檢驗(yàn)師，碩士，主要從事脂代謝疾病研究。

2.2兩組一般指標(biāo)及血脂測定高膽固醇血癥組與正常對照組相比，腰圍〔(87.1±8.4)cm，(83.7±7.8)cm〕、BMI〔(25.1±2.7)kg/m2，(23.9±2.7)kg/m2〕明顯升高；LDL-C〔(5.4±0.5)mmol/L,(2.6±0.6)mmol/L〕、oxLDL〔(32.5±14.1)μg/dl，(12.3±8.6)μg/dl〕、內(nèi)脂素〔(27.93±8.46)ng/ml，(17.18±7.63)ng/ml〕、TC〔(7.2±0.5)mmol/L，(4.3±0.8)mmol/L〕明顯升高(P<0.05)。TG〔(0.7±0.2)mmol/L，(1.1±0.3)mmol/L〕、HDL-C水平〔(1.6±0.2)mmol/L，(1.3±0.3)mmol/L〕無明顯差異(P>0.05)。

2.3相關(guān)性分析血清內(nèi)脂素與體重、腰圍、BMI、TC、LDL-C、oxLDL呈正相關(guān)(r=0.226、0.277、0.272、0.332、0.348、0.372，P<0.05)。

2.4多元線性回歸分析以內(nèi)脂素水平因應(yīng)變量，年齡、體重、腰圍、BMI、TC、LDL-C、oxLDL為自變量，進(jìn)行多元逐步回歸分析，最后oxLDL、LDL-C進(jìn)入方程。回歸方程為：y=0.118(oxLDL)+2.877(LDL-C)-2.550(P<0.05)。見表2。

表2內(nèi)脂素為因變量的多元線性回歸分析

變量回歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù)t值P值常務(wù)量-2.5510.725--0.2380.813oxLDL0.1180.0470.2722.5000.014LDL-C2.8771.3690.2282.1010.039

3討論

高膽固醇血癥是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的重要原因，是心腦血管疾病的重要危險(xiǎn)因子。血清膽固醇的水平與遺傳及環(huán)境因素均有關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)LDL-R基因第2外顯子XspI位點(diǎn)存在基因多態(tài)性，其多態(tài)性變化是中國人高膽固醇血癥產(chǎn)生的原因之一，可以作為高膽固醇血癥理想的篩查指標(biāo)〔5〕。有研究證實(shí)〔6〕oxLDL、內(nèi)脂素水平與血脂異常密切相關(guān)，而高膽固醇血癥患者不同基因型血清oxLDL、內(nèi)脂素水平的變化目前尚無人報(bào)道。本結(jié)果顯示，隨著膽固醇水平的升高，oxLDL濃度也隨之升高，這與Hachani等〔7〕的研究結(jié)果一致，提示高膽固醇血癥常伴血漿ox-LDL水平增高。目前越來越多的證據(jù)表明血漿oxLDL水平與急性冠脈綜合征的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)〔8〕。研究認(rèn)為高膽固醇血癥導(dǎo)致體內(nèi)自由基代謝平衡失調(diào)，LDL-C極易被自由基、脂質(zhì)過氧化物修飾，引起內(nèi)皮損傷和泡沫細(xì)胞的形成，從而加快了AS的發(fā)生〔9,10〕。本研究結(jié)果說明LDL-R基因第2外顯子XspI位點(diǎn)的多態(tài)性與oxLDL及膽固醇水平有密切關(guān)系。

內(nèi)脂素是Fukuhara等〔11〕發(fā)現(xiàn)的一種新的脂肪因子，由473個(gè)氨基酸組成，其分子量為52 kD。它在血漿中表達(dá)但主要存在于肝臟、骨骼肌及血漿骨髓中，在脂肪組織中也發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。由PBEF1編碼的內(nèi)脂素的mRNA表達(dá)在肥胖的發(fā)展過程中會增加，且其血漿水平與內(nèi)臟脂肪量顯著相關(guān)。研究表明內(nèi)臟脂肪堆積較皮下脂肪堆積具有更大的危險(xiǎn)性，因此體脂的分布比體脂的總量顯得更為重要〔12〕。Fukuhara等〔11〕的研究表明，內(nèi)脂素的血漿水平和組織表達(dá)與內(nèi)臟脂肪數(shù)量呈正相關(guān)而與皮下脂肪無關(guān)，提示內(nèi)脂素對于了解內(nèi)臟脂肪和皮下脂肪不同生物學(xué)特性及其對于肥胖的不同影響具有重要意義。Taskesen等〔13〕也得到類似結(jié)果，這與本研究推斷內(nèi)脂素與X+等位基因及X+X+基因型存在相關(guān)性。但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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〔2014-06-17修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)

通訊作者：宋光耀(1958-)，男，博士，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，主要從事內(nèi)分泌代謝疾病研究。

中圖分類號〔〕R394.3〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-7137-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.078