黃利全　胡　野　毛宇飛　朱樓英　陳桂園　丁明星　張　焱　張　輝　梁淑霞　姜麗萍

(金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江　金華　321007)

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bFGF在長(zhǎng)春瑞濱致兔組織損傷后不同時(shí)間實(shí)施干預(yù)的效果

黃利全胡野毛宇飛朱樓英1陳桂園丁明星張焱張輝1梁淑霞2姜麗萍3

(金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江金華321007)

摘要〔〕目的探討堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)在長(zhǎng)春瑞濱外滲家兔組織不同時(shí)間干預(yù)的效果。方法建立54只長(zhǎng)春瑞濱外滲的家兔模型，分別在建模后30 min、24 h、72 h開(kāi)始實(shí)施bFGF濕敷、硫酸鎂濕敷及不干預(yù)，通過(guò)肉眼及光鏡觀察上述各組干預(yù)后3、5、8、11、14、22 d的皮膚組織損傷程度。結(jié)果長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min、24 h干預(yù)后，bFGF組皮損評(píng)分及病理?yè)p傷評(píng)分均顯著低于硫酸鎂組及對(duì)照組(P<0.05)；外滲后72 h干預(yù)時(shí),bFGF組皮損評(píng)分及病理?yè)p傷評(píng)分均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；硫酸鎂組僅于外滲后72 h干預(yù)時(shí)病理?yè)p傷評(píng)分低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論長(zhǎng)春瑞濱外滲時(shí)采用bFGF濕敷能減輕組織損傷，尤以外滲后30 min開(kāi)始干預(yù)效果顯著。

關(guān)鍵詞〔〕堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；長(zhǎng)春瑞濱；藥物滲漏損傷；動(dòng)物模型

1金華市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心2浙江大學(xué)金華醫(yī)院手術(shù)室

3溫州醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院

第一作者：黃利全(1973-)，女，碩士，副教授，主要從事基礎(chǔ)護(hù)理及血管管理研究。

長(zhǎng)春瑞濱是一種細(xì)胞周期特異性抗腫瘤藥物，已被廣泛應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌等的治療，但其刺激性強(qiáng)，一旦外滲可致局部皮膚紅腫、疼痛、潰瘍、壞死，若未及時(shí)發(fā)現(xiàn)、處理不當(dāng)，可導(dǎo)致肢體功能障礙。當(dāng)前，對(duì)長(zhǎng)春瑞濱外滲后早期處理方法較多，包括局部封閉、濕敷、注射解毒劑、外涂消炎藥等方法，而對(duì)延遲發(fā)現(xiàn)的嚴(yán)重病例處理較局限，雖有報(bào)道使用堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的方法，但文獻(xiàn)中均以聯(lián)合用藥為主，或未深入研究該藥對(duì)長(zhǎng)春瑞濱外滲后不同時(shí)間實(shí)施干預(yù)的效果〔1〕。本文通過(guò)比較bFGF在長(zhǎng)春瑞濱外滲后不同時(shí)間實(shí)施干預(yù)的療效，探討其產(chǎn)生機(jī)制。

1材料和方法

1.1材料54只健康新西蘭同種家兔，體重2.5～3.0 kg，雌雄各半，由金華市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK(浙)2010-0151〕，單籠飼養(yǎng)，隨機(jī)編號(hào)、排序。bFGF(貝復(fù)濟(jì)，重組牛bFGF外用溶液，批號(hào)：20130803)產(chǎn)自珠海億勝生物制藥有限公司。硫酸鎂粉產(chǎn)自南昌白云藥業(yè)有限公司，500 g/袋，批號(hào)：20130701。注射用長(zhǎng)春瑞濱為江蘇豪森醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品(商品名：NVB,批號(hào)：130702)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1建立損傷模型 選健康新西蘭兔54只，取兔雙背雙臀作為實(shí)驗(yàn)區(qū)。實(shí)驗(yàn)前24 h用脫毛劑將家兔背部及臀部脫毛，制成每個(gè)注射區(qū)域直徑約5 cm×5 cm大小的無(wú)毛區(qū)，背部以兔的脊柱為中心，劃分為左背部與右背部，臀部平分為左右兩區(qū)，分別在各區(qū)域皮下注射長(zhǎng)春瑞濱1 ml(0.5 mg/ml)制成皮丘直徑約2～2.5 cm的化療藥物滲漏損傷模型〔2〕,一旦發(fā)現(xiàn)藥量不足或皮丘直徑不合要求即剔除在外，重新補(bǔ)入。

1.2.2分組與干預(yù)將54只家兔按隨機(jī)數(shù)字表法分成bFGF組、硫酸鎂組、對(duì)照組，每組18只。各組分別在建模成功后30 min、24 h、72 h實(shí)施首次干預(yù)。bFGF濕敷法:用含bFGF藥液(200 IU/cm2)的2 cm×2 cm 無(wú)菌濕紗布兩層覆蓋于外滲局部，敷布范圍超出滲漏區(qū)域0.5 cm，再濕敷一層塑料薄膜，后用繃帶包扎，3次/d，每次15 min，共7 d。硫酸鎂濕敷法：除所覆藥物換成50%硫酸鎂溶液外，其他同bFGF濕敷法。對(duì)照組不采取任何干預(yù)措施。

1.2.3觀察指標(biāo)肉眼觀察損傷面積：三組家兔于各自首次干預(yù)后的第3、5、8、11、14、22天用圓規(guī)、直尺測(cè)量，計(jì)算創(chuàng)面中兩條最長(zhǎng)的垂直長(zhǎng)度的乘積為損傷面積。皮膚損傷評(píng)分參照楊翠芹等〔2〕的方法，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)特點(diǎn)賦分:皮膚正常為0分；紅腫直徑≤3 cm為1分；>3 cm為2分；潰瘍直徑≤1 cm為3分；>1 cm為4分。

病理觀察：各組家兔在上述6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，用1%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)腹腔麻醉后用外科手術(shù)法切取外滲性損傷部位，切除組織置于10%甲醛中固定、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋，制備4 μm切片。經(jīng)HE染色，中性樹(shù)膠封片后由未參與實(shí)驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)病理醫(yī)生在光鏡下觀察各組外滲性損傷程度。病理?yè)p傷評(píng)價(jià)參照郭鵬等〔3〕的方法，輕度損傷：彌散性炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、表皮完好；中度損傷：組織水腫、散在出血、明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；重度損傷：潰瘍、組織壞死、出血。結(jié)合實(shí)際，加入超重度損傷：組織結(jié)構(gòu)完全消失，廣泛壞死。計(jì)分方法：輕度為1分，中度為2分，重度為3分，超重度為4分。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件,計(jì)量資料組間差異比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或單因素方差分析,方差齊性比較采用LSD 法,方差不齊者進(jìn)行TamhaneT3檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1長(zhǎng)春瑞濱外滲不同處理組局部組織損傷程度肉眼觀察比較bFGF濕敷組在長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min、24 h開(kāi)始干預(yù)后皮膚組織損傷以紅腫為主；硫酸鎂濕敷組皮膚組織紅腫、潰破；對(duì)照組皮膚破潰明顯。肉眼損傷評(píng)分比較，bFGF濕敷組在外滲后30 min、24 h干預(yù)顯著低于硫酸鎂濕敷組及對(duì)照組(P<0.05)，而在72 h開(kāi)始干預(yù)時(shí)僅與對(duì)照組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖1，表1。

A:bFGF組(30 min干預(yù)5 d);B:硫酸鎂組(30 min干預(yù)5 d);C:對(duì)照組(30 min干預(yù)5 d);D:bFGF組(24 h干預(yù)8 d);E:硫酸鎂組(24 h干預(yù)8 d);F:對(duì)照組(24 h干預(yù)8 d);G:bFGF組(72 h干預(yù)11 d);H:硫酸鎂組(72 h干預(yù)11 d);I:對(duì)照組(72 h干預(yù)11 d)；下圖同圖1　兔滲漏組織肉眼觀察

組別30min24h72hbFGF組1.20±0.291)2)1.27±0.531)2)1.00±0.542)硫酸鎂組1.73±0.361.94±0.741.91±0.73對(duì)照組1.73±0.432.33±0.962.58±0.55F/P值3.63/0.044.09/0.042.77/0.01

與硫酸鎂組比較：1)P<0.05 ；與對(duì)照組比較：2)P<0.05

2.2在病理觀察比較在長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min、24 h、72 h開(kāi)始干預(yù)后，bFGF組可見(jiàn)組織水腫、散在出血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；硫酸鎂組光鏡下可見(jiàn)潰瘍、組織壞死、出血；對(duì)照組病理觀察可見(jiàn)大片炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，甚至微膿腫形成。三組病理評(píng)分比較，bFGF濕敷組在長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min、24 h開(kāi)始干預(yù)后與硫酸鎂濕敷組、對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，而72 h開(kāi)始干預(yù)時(shí)與對(duì)照組比較結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；硫酸鎂組于外滲后僅72 h干預(yù)時(shí)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。見(jiàn)表2,圖2。

圖2　兔滲漏組織病理變化(HE染色，×100)

組別30min24h72hbFGF組1.16±0.381)2)2.00±0.841)2)1.83±0.702)硫酸鎂組2.00±0.842.16±0.922.66±0.483)對(duì)照組2.50±0.782.83±0.922.83±0.38F/P值16.66/0.044.35/0.0417.56/0.01

與硫酸鎂組比較：1)P<0.01；與對(duì)照組比較：2)P<0.01，3)P<0.05

3討論

目前，化療藥物主要通過(guò)靜脈途徑給藥，一旦發(fā)生外滲，常造成血管及局部皮膚組織的化學(xué)性炎癥反應(yīng)。據(jù)報(bào)道，發(fā)皰劑外滲發(fā)生率在兒童中為11%，成人中為22%〔4〕。長(zhǎng)春瑞濱屬于發(fā)皰型化療藥,滲漏至血管外12～24 h即發(fā)生反應(yīng)〔5〕,當(dāng)滲透入皮下間隙,可導(dǎo)致局部濃度增高,破壞細(xì)胞膜內(nèi)外滲透壓平衡,局部 pH值改變,致靜脈或毛細(xì)血管痙攣,局部供血減少,使組織缺血、缺氧,局部出現(xiàn)水皰,形成硬結(jié)和潰瘍〔6〕?？梢?jiàn)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)春瑞濱外滲并積極處理是治療的關(guān)鍵。

本研究發(fā)現(xiàn)，bFGF對(duì)長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min、24 h及72 h開(kāi)始干預(yù)時(shí)對(duì)損傷組織均具有保護(hù)作用，能有效控制外滲損傷的大小、深度及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)程度，說(shuō)明bFGF具有一定的抗炎作用，其作用機(jī)制可能是bFGF抑制了腫瘤壞死因子(TNF)-α的分泌，從而阻斷了由此引發(fā)的炎癥反應(yīng)〔7〕。bFGF組創(chuàng)面愈合較快，進(jìn)一步說(shuō)明bFGF在局部炎癥反應(yīng)階段、細(xì)胞增殖分化及肉芽組織形成階段、組織重建階段均有不同程度的促進(jìn)作用〔8〕。國(guó)內(nèi)外已在皮膚等組織工程中應(yīng)用bFGF并顯示出其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)與前景〔9～11〕。本文的結(jié)果尤其對(duì)那些因未早期發(fā)現(xiàn)藥物滲漏而致局部組織明顯紅腫、潰破患者的治療提供了有效的方法。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)bFGF對(duì)長(zhǎng)春瑞濱外滲后30 min開(kāi)始干預(yù)時(shí)療效最為明顯，分析原因可能是創(chuàng)傷早期局部受創(chuàng)組織中內(nèi)源性bFGF的含量處于缺乏狀態(tài)，到創(chuàng)傷后第2～4周其血清水平再達(dá)到分泌高峰〔12〕，需用外源性的bFGF促進(jìn)并刺激組織分泌bFGF，從而達(dá)到治療作用。說(shuō)明越早干預(yù)效果越顯著，如能在30 min內(nèi)干預(yù)，效果最理想。

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〔2015-03-26修回〕

(編輯袁左鳴)

通訊作者：毛宇飛(1964-)，男，副教授，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤及基礎(chǔ)病理研究。

基金項(xiàng)目：浙江省科技廳實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013C37023)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R471；R363〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)23-6703-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.025