鐘　丹　鄒亦平　延衛(wèi)東　黃宇清　陳小麗　王　娟

(井岡山大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江西　吉安　343009)

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丹參對單側(cè)輸尿管結(jié)扎模型大鼠腎臟的保護作用

鐘丹鄒亦平1延衛(wèi)東黃宇清陳小麗1王娟

(井岡山大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江西吉安343009)

摘要〔〕目的探討丹參對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型大鼠腎臟保護作用，初步探討其抗腎間質(zhì)纖維的機制。方法應(yīng)用UUO致腎間質(zhì)纖維化大鼠模型，SD雄性大鼠120只隨機分為空白組，模型組，丹參組(高、中、低劑量)，吡格列酮組，每組20只，從模型建立前48 h開始灌胃，分別于造模后第7、14、21天，觀察大鼠一般狀態(tài)，檢測各組大鼠體質(zhì)量，24 h尿蛋白定量，血清肌酐水平，留取梗阻側(cè)腎臟行HE、Masson染色，觀察腎組織病理結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果模型組大鼠在各個時間點均出現(xiàn)一般狀態(tài)減退，體質(zhì)量下降，丹參干預(yù)后一般狀態(tài)及體質(zhì)量均有顯著改善；在各個時間點24 h尿蛋白定量結(jié)果無明顯差異，但UUO模型組大鼠血肌酐值增高，在造模第7天時，其腎組織可見腎小管上皮細胞變性、間質(zhì)炎性細胞浸潤、纖維組織增生等病理變化，丹參各劑量組與UUO模型組大鼠相比較血肌酐值下降明顯，腎臟病理改變均有不同程度的改善，其中以丹參高劑量組改善最為明顯。結(jié)論丹參對腎間質(zhì)纖維化模型大鼠具有一定的保護作用，其抗腎間質(zhì)纖維化的作用機制與降低血肌酐，改善大鼠一般狀態(tài)，減輕腎臟病理損傷有關(guān)。

關(guān)鍵詞〔〕丹參；腎間質(zhì)纖維化；肌酐

1井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院

第一作者：鐘丹(1974-)，男，副主任醫(yī)師，博士，主要從事腎臟疾病的臨床教學(xué)研究。

血瘀證是腎小球疾病發(fā)病過程中的共性，它貫穿于慢性腎臟疾病-腎纖維化的所有階段?；钛鲱愔兴幵谥委熉阅I病、防止及延緩腎纖維化中占有重要地位。丹參是活血化瘀的代表中藥之一，藥理學(xué)研究〔1〕表明，丹參對心腦血管系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)等疾病均有顯著作用。本研究擬觀察丹參對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)大鼠模型腎組織病變的影響，探討其抗腎間質(zhì)纖維化的機制。

1材料與方法

1.1實驗藥物及試劑丹參水煎液：采用江西本地產(chǎn)丹參，購自井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房，自行制備成水煎液。吡格列酮購自杭州中美華東制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20050500。

1.2實驗動物及分組健康SD雄性大鼠，體質(zhì)量(200±10)g，清潔級，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：0003467。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機分為：空白組、模型組，吡格列酮組，丹參低、中，高劑量組，每組20只，自由飲水、進食。

1.3造模及給藥方法采用UUO造模方法〔2〕，戊巴比妥鈉皮下注射麻醉(5 mg/kg)大鼠，打開腹腔后結(jié)扎左側(cè)輸尿管，縫合腹腔。各組均于模型建立前48 h灌胃，丹參灌胃量分別按3、2、1 g·kg·d-1生藥量灌胃給藥，1次/d。模型組以等量生理鹽水灌胃。吡格列酮組灌胃量為30 mg·kg-1·d-1。

1.4觀察指標(biāo)及檢測方法

1.4.1大鼠一般狀態(tài)死亡率、精神狀況、大鼠皮毛、飲食、體重、活動、對外界刺激的反應(yīng)等。

1.4.224 h尿蛋白定量測定代謝籠收集大鼠24 h尿液，考馬斯亮藍法測定尿蛋白量。

1.4.3血肌酐測定采用日立7170A型全自動生化測定儀測定。

1.4.4病理檢測游離梗阻側(cè)腎，扇形切取部分腎臟織，以10%中性甲醛固定后，脫水、浸蠟、石蠟包埋，切成4um厚度石蠟切片，分別行HE 染色及Masson 染色，光鏡下觀察腎小管間質(zhì)的結(jié)構(gòu)變化。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析及秩和檢驗。

2結(jié)果

2.1一般狀態(tài)實驗過程中模型組及丹參低劑量組各有1只大鼠死亡，考慮麻醉過量所致。與空白組相比，其余各組大鼠在3個時間點均出現(xiàn)消瘦，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛發(fā)無光澤，動作遲緩等癥狀。與空白組比較，模型組大鼠體重明顯下降，各藥物治療組大鼠體重也有一定程度上下降；與模型組比較，丹參高、中劑量組在造模后7、14、21 d均可顯著改善UUO大鼠體重，以丹參高劑量組在造模后第7天時改善最為明顯。見表1。

2.2丹參對模型大鼠24 h尿蛋白定量的影響各組大鼠在3個觀察時點24 h尿蛋白定量無明顯差異(P>0.05)。見表2。

2.3丹參對模型大鼠血肌酐的影響與空白組相比較，模型組血肌酐水平明顯升高。與模型組相比較，丹參各劑量組及吡格列酮組血肌酐水平均有不同程度的降低，其中以丹參高劑量組在造模后第7天降低尤為明顯。見表3。

2.4丹參對模型大鼠腎臟組織病理形態(tài)的影響HE、Masson 染色觀察：造模第7天，UUO 模型組出現(xiàn)腎間質(zhì)炎細胞浸潤，纖維組織增生，伴有大部分腎小管上皮細胞顆粒、空泡變性，部分腎小管上皮細胞壞死脫落，可見腎小管灶狀萎縮，部分腎小管腔可見脫落壞死組織及細胞形成顆粒管型及細胞管型；吡格列酮組、丹參組病理變化較UUO模型組減輕，其中尤以丹參高劑量組減輕最為明顯。與模型組比較，在造模第14天以及第21天時，丹參各劑量組大鼠腎臟病理改變改善不明顯。見圖1。

時間點空白組(n=20)模型組(n=19)吡格列酮組(n=20)丹參高劑量組(n=20)丹參中劑量組(n=20)丹參低劑量組(n=19)造模后7d398.22±21.60219.50±20.174)222.35±30.324)341.15±22.512)3)263.27±18.771)3)211.33±33.114)造模后14d400.17±33.22246.11±23.674)250.33±21.184)356.37±30.121)3)288.36±25.311)3)244.15±26.174)造模后21d410.33±21.66251.26±18.934)260.16±27.584)368.23±22.111)3)300.26±19.671)3)255.66±33.374)

與模型組比較：1)P<0.05,2)P<0.01；與空白組比較：3)P<0.05,4)P<0.01,下表同

時間點空白組(n=20)模型組(n=19)吡格列酮組(n=20)丹參高劑量組(n=20)丹參中劑量組(n=20)丹參低劑量組(n=19)造模后7d3.26±0.394.18±0.334.48±0.514.55±0.784.80±0.574.33±0.15造模后14d3.56±0.564.58±1.074.90±1.224.78±1.364.79±1.074.31±1.78造模后21d3.66±0.134.66±0.364.91±0.604.80±0.614.83±1.024.30±0.16

時間點空白組(n=20)模型組(n=19)吡格列酮組(n=20)丹參高劑量組(n=20)丹參中劑量組(n=20)丹參低劑量組(n=19)造模后7d46.87±6.8166.88±18.314)47.43±15.011)39.71±16.122)48.38±17.231)48.43±11.071)造模后14d50.21±11.2168.21±10.234)47.43±15.011)42.86±19.021)47.36±11.361)46.23±15.171)造模后21d50.86±22.5371.62±12.664)47.43±15.011)46.23±13.561)47.18±13.331)46.7±10.031)

圖1　各組大鼠腎臟組織病理形態(tài)(×200)

3討論

各種腎臟疾病腎功能惡化的主要程度取決于腎間質(zhì)受損的程度，腎間質(zhì)纖維化輕重程度是決定腎臟疾病預(yù)后的重要因素〔3,4〕。腎間質(zhì)纖維化是有多種細胞參與的進展性過程，在病變的不同時期，相繼發(fā)生炎癥反應(yīng)、肌成纖維細胞激活、腎臟固有細胞凋亡以及細胞外基質(zhì)成分的重塑和堆積〔5〕，在這一復(fù)雜的動態(tài)過程中，尤其是在出現(xiàn)無細胞性、彌漫性纖維化之前，特異性阻斷某些關(guān)鍵環(huán)節(jié)有可能阻止纖維化的發(fā)生和發(fā)展，從而達到治療的目的。腎小球濾過功能是腎小球的主要功能，機體產(chǎn)生的大部分代謝廢物以及多余的水分均通過腎小球的濾過功能得以實現(xiàn)。肌酐是肌酸的終末代謝產(chǎn)物，主要經(jīng)腎小球濾過排出，肌酐清除率可以在一定程度上代表腎小球濾過率的高低，因此，血肌酐值的升高在一定程度上反映了腎臟功能損害的程度。正常情況下，腎小球濾過膜可以阻止血漿中較大分子量的蛋白質(zhì)濾入尿液，腎小球濾液中僅含有少量蛋白質(zhì)，尿中腎性蛋白質(zhì)增多可以在一定程度上代表腎小球濾過屏障或腎小管的損傷，但尿中蛋白含量的高低與腎臟損傷程度之間并不成正比關(guān)系。

傳統(tǒng)中醫(yī)理論雖無腎纖維化一詞，但沈崢嶸等〔6〕、王剛等〔7〕指出在腎纖維化過程中，由于血流動力學(xué)的改變，凝血機制被激活，促成纖維素于腎組織中沉積，并刺激血小板凝集，形成血栓以及腎臟病理學(xué)的改變(如細胞外基質(zhì)的積聚、血管襻、細胞的增殖，纖維蛋白樣物的沉積、血栓形成、血管閉塞、局灶或節(jié)段性腎小球硬化與間質(zhì)纖維化等)，都包含在“內(nèi)結(jié)為血瘀”中。丹參始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，中醫(yī)理論認為丹參苦、微寒，入心、心包及肝經(jīng)，具有活血通絡(luò)、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩等功效。古有“一味丹參，功同四物”之說。自20世紀(jì)30年代以來，眾多的學(xué)者對丹參的活性成分和藥理作用進行了大量研究，并得到了許多化學(xué)成分，其藥理學(xué)研究〔8～11〕表明，丹參對心腦血管系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)等疾病均有顯著作用。對中藥抗腎纖維化用藥規(guī)律探析結(jié)果表明丹參在24味常用的活血化瘀藥物中使用頻次高居第一位〔12〕，進一步說明丹參在抗纖維化方面療效肯定。

本研究結(jié)果表明，丹參具有良好的抗腎纖維化作用，它在早期可以改善模型大鼠體重等一般狀態(tài)，降低血肌酐值，減輕腎小管間質(zhì)的微觀病理損害，而且這種作用具有時間及劑量的依賴性，以丹參大劑量在早期效果最為明顯。

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〔2015-06-19修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

基金項目：江西省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目(No.GJJ12479)

中圖分類號〔〕R285.5〔

文獻標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)23-6696-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.022