杜 鵑 白音夫

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

HPLC法同時(shí)測(cè)定蒙古山蘿卜綠原酸、金絲桃苷的含量△

杜 鵑1白音夫2*

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

目的：HPLC法同時(shí)測(cè)定藥材中綠原酸、金絲桃苷的含量。方法：采用HPLC法測(cè)定；流動(dòng)相為乙腈-水-磷酸(12：88：0.1)，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為350nm，柱溫為30℃。結(jié)果：綠原酸在1.5 ～48 μg/mL；金絲桃苷在1.8～120μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999；綠原酸、金絲桃苷平均回收率分別為102.2%、104.21%。結(jié)論：4種不同來(lái)源藥材，綠原酸、金絲桃苷平均含量分別為0.375%、0.048%。該方法快捷、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可作為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。

HPLC法；蒙古山蘿卜；綠原酸；金絲桃苷

蒙古山羅卜Scabiosa comosa Fisch是傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥治療肝病的藥材，可清肝明目，用于肝病，與其它藥材配伍可治療多種肝病[1]。藥材含黃酮類(lèi)化合物，綠原酸是主要成分之一[2]。本文用HPLC法測(cè)定藥材中綠原酸、金絲桃苷含量，以期為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供簡(jiǎn)便快速。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：1100型高效液相色譜儀 (美國(guó)安捷倫公司)，TJ-912型色譜分析平臺(tái)(太極計(jì)算機(jī)公司)，IN-180型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，色譜柱(0203030蘭州化物所)，電子天平(梅特勒)。

1.2 試藥：綠原酸、金絲桃苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水；藥材采自?xún)?nèi)蒙古大青山圣水梁、灰騰梁、南天門(mén)林場(chǎng)與市售。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：ODS-C18柱(150mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：乙腈-水-磷酸(12：88：0.1)；流速：1mL·min-1；溫度：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm；進(jìn)樣量10μL。在此條件下待測(cè)組分可達(dá)到基線分離。樣品中綠原酸、金絲桃苷與其它組分有較好的分離，見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取綠原酸、金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成0.12 mg/mL、0.15mg/mL的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品粉碎過(guò)100目篩，精密稱(chēng)定200mg，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱(chēng)重，超聲處理50min，放冷，稱(chēng)重，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液備用，即得。

2.4 線性關(guān)系考察：精密分別量取綠原酸、金絲桃苷對(duì)照品溶液0.125，0.25，0.5，1，2，4mL和0.125，0.25，0.5，1，2， 4，8mL，加到10mL量瓶?jī)?nèi)，甲醇稀釋至刻度，搖勻，按色譜條件測(cè)定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸, 回歸方程分別為Y=3574745-285223X，r=0.999 ；Y= 23257367X -484647,r=0.999。結(jié)果表明，綠原酸、金絲桃苷分別在1.5 ～48 μg/mL、1.8～120μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)：吸取同一批供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得綠原酸、金絲桃苷峰面積RSD分別為0.84%、0.96%。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，8，12h進(jìn)樣測(cè)定峰面積，計(jì)算綠原酸金、絲桃苷平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)，其RSD分別為0.93%、1.21%。結(jié)果表明，供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取同批藥材(圣水梁)按2.3項(xiàng)下平行制備6份樣品溶液，并按2.1項(xiàng)下測(cè)定，綠原酸平均含量為0.41%，RSD=1.13%；金絲桃苷平均含量為0.07%，RSD=1.24%；

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取同批藥材(圣水梁)已知含量的樣品6份，每份取約100mg，精密稱(chēng)定，分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液2mL (0.22 mg/mL)，金絲桃苷對(duì)照品溶液1 mL(0.075 mg/mL)，按2.3項(xiàng)下制備樣品溶液，同法操作，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。綠原酸平均回收率102.2%，RSD=1.04%；金絲桃苷平均回收率為104.21%，RSD=1.26%

2.9 藥材測(cè)定：取不同采集點(diǎn)藥材制備供試品溶液，同時(shí)取對(duì)照品溶液隨行對(duì)照，按擬定的色譜條件測(cè)定綠原酸、金絲桃苷含量。結(jié)果，大青山圣水梁0.41%、0.07%，灰騰梁0.32%、0.03%，南天門(mén)林場(chǎng)0.47%、0.08%，市售0.30%、0.01%；平均含量0.375%、0.048%。

3 結(jié)論

綠原酸、金絲桃苷是蒙古山蘿卜的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化、抗肝纖維化作用，本文建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定這2種成分的分析方法，可作為蒙古山蘿卜藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)。

[1]衛(wèi)生部藥典委員會(huì).藥材標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)[S].1998,52,166,167,194

[2]白音夫，周雪梅，周長(zhǎng)鳳，等. 蒙古山蘿卜有效成分的分離、鑒定及含量測(cè)定[J].西北藥學(xué)雜志，2014，29(6):564-566.

2016年8月16日收稿

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81260659)內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金(編號(hào)：2014MS0860)

R291.2

B

1006-6810(2016)11-0056-02

*通訊作者