盧春霞++劉長彬++唐宗貴等

摘要：研究三合激素在奶牛乳中的降解規(guī)律，試驗選擇卵巢靜止的9頭泌乳奶牛，隨機(jī)分為2組，5頭為試驗組，注射治療三合激素后，4頭為對照組不注射激素，間隔不同的天數(shù)采集每頭牛的乳樣品。分別采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法檢測乳中激素的殘留量。結(jié)果表明，14 d后3種激素在奶牛乳中的濃度降至0.5 ng/g 以下，表明奶牛注射三合激素后14 d可降解完全，確定苯甲酸雌二醇的棄奶期為 14 d。

關(guān)鍵詞：苯甲酸雌二醇；孕酮；丙酸睪酮；生鮮乳；降解規(guī)律

中圖分類號： TS201.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2015）11-0378-02

收稿日期：2015-04-22

基金項目：國家科技支撐計劃（編號：2012BAD43B03）。

作者簡介：盧春霞（1978—），女，河南虞城人，博士，副研究員，主要從事食品質(zhì)量安全研究。E-mail：shzlcx2002@163.com。

通信作者：羅小玲，研究員，主要從事食品質(zhì)量安全研究。Tel：（0993）6683009；E-mail：LXL62 622@126.com。 三合激素注射液（tristerone injection）為復(fù)方制劑，主要成分包括苯甲酸雌二醇1.5 mg/mL、孕酮12.5 mg/mL、丙酸睪丸酮25 mg/mL，在奶牛養(yǎng)殖業(yè)中主要用于誘導(dǎo)奶牛發(fā)情[1-2]。雌二醇可在動物組織內(nèi)殘留，通過食物鏈危害人類健康，使女性兒童提前發(fā)育，男性兒童乳腺發(fā)育呈女性化，男性生殖系統(tǒng)發(fā)育異?；蛞鸩∽?，并導(dǎo)致女性乳腺癌和子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生率上升[3-4]。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235號規(guī)定，丙酸睪酮和苯甲酸雌二醇允許作治療用，但不得在動物性食品中檢出，孕酮沒有限制使用，也無限量標(biāo)準(zhǔn)[5]。通過測定丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇和孕酮在牛奶中的殘留，可對藥物安全性作出評價，為休藥期的制定和提高原料乳質(zhì)量安全水平提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗動物選擇卵巢發(fā)育靜止、正常泌乳的荷斯坦奶牛9頭。

1.1.2試劑與藥品Oasis HLB固相萃取柱（60 mg /3 mL，Waters公司）；丙酮、正己烷（色譜級，美國J. T. Baker公司）；乙腈、甲醇、乙酸乙酯、吡啶、異辛烷（色譜級，德國Merck公司）；甲苯（色譜級，德國CNW公司）；苯甲酸雌二醇、孕酮、丙酸睪酮標(biāo)準(zhǔn)品購自中國國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；三合激素注射液（2 mL/支，寧波第二激素廠生產(chǎn)）。其他試劑均為分析純，試驗用水為超純水。

1.1.3儀器設(shè)備Agilent 1200高效液相色譜儀，6460 Triple Quad LC/MS電噴霧串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；7000B Triple Quad GC/MS四極桿質(zhì)譜儀（美國Agilent公司）；MS3 basic渦旋混合器（德國IKA公司）；3-30K高速臺式冷凍離心機(jī)（德國SIGMA公司）；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士步琦公司）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）；優(yōu)普超純水制造系統(tǒng)（成都超純科技公司）。

1.2方法

1.2.1給藥方法試驗牛頭每頭肌肉注射4支三合激素，注射后1、2、3、5、9、14 d采集牛奶。奶樣置-20 ℃冰箱中保存待測。

1.2.2檢測方法孕酮和丙酸睪酮參照農(nóng)業(yè)部1031 號公告[6]檢測。苯甲酸雌二醇檢測參考GB/T 22967—2008方法[7]稍作修改。

2結(jié)果與分析

2.1丙酸睪酮的殘留

從圖1可以看出，5頭試驗牛丙酸睪酮的降解規(guī)律基本一致，于注射藥物后2～3 d在體內(nèi)殘留達(dá)到高峰，然后逐漸降解，基本在第9天完全降解。但是每頭牛在不同日期殘留量差異較大，可能與個體差異有關(guān)。對照組丙酸睪酮含量基本在1 ng/g以下。

2.2孕酮的殘留

與丙酸睪酮比較，孕酮降解較快（圖2），基本于第5天完全降解，但E牛在第5天的降解呈非規(guī)律性。對照組孕酮含量基本為0 ng/g。

2.3苯甲酸雌二醇的殘留

從圖3可以看出，試驗組牛苯甲酸雌二醇的降解規(guī)律基本一致，于藥物注射后2～3 d在體內(nèi)殘留達(dá)到高峰，然后逐漸降低，基本在第14天降解完全。對照組苯甲酸雌二醇含量基本在0 ng/mL。

從以上3種激素的體內(nèi)降解規(guī)律來看，在處理后14 d內(nèi)完全降解，三合激素的安全間隔期為 14 d，與黃凍的研究結(jié)果[8]一致。

2.4激素風(fēng)險因子監(jiān)測結(jié)果

利用以上檢測方法對新疆天山北坡6個規(guī)?；龅纳r奶進(jìn)行監(jiān)測，每個牛場抽取樣品5份。從圖4可以看出，丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇?xì)埩袅枯^低（<1 ng/g），而孕酮激素殘留量較高，可能與懷孕牛本身產(chǎn)生的孕酮有關(guān)。

3結(jié)論

采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法研究了三合激素在奶牛乳中的降解規(guī)律。結(jié)果表明，奶牛注射三合激素后，乳中3種激素在14 d內(nèi)均可降解完全，確定丙酸睪酮、孕酮、苯甲酸雌二醇的安全間隔期為 14 d。同時對6個規(guī)?；錾r乳進(jìn)行監(jiān)測，結(jié)果表明，生鮮乳中孕酮激素含量較高，丙酸睪酮、苯甲酸雌二醇均無殘留。

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[6]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第1031號公告[Z]. 北京：中華人民共和國農(nóng)業(yè)部，2008.

[7]GB/T 22967—2008牛奶和奶粉中β-雌二醇?xì)埩袅康臏y定氣相色譜-負(fù)化學(xué)電離質(zhì)譜法[S].

[8]黃凍. 苯甲酸雌二醇注射液穩(wěn)定性試驗及其在奶牛體內(nèi)藥動學(xué)和牛奶中殘留試驗[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2009.史娟，李江. 微波輔助消解火焰原子吸收光譜法測定茶葉中的微量元素[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（11：380-382.