侯英楠 黃金英 沈淑波 孫才 鄭銀子 石豪

銅綠假單胞菌產(chǎn)生的ESBLs菌株檢測(cè)和藥敏監(jiān)測(cè)研究

侯英楠 黃金英 沈淑波 孫才 鄭銀子 石豪

目的 探討應(yīng)用雙紙片擴(kuò)散法檢測(cè)銅綠假單胞菌產(chǎn)生的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的方法,掌握銅綠假單胞菌的流行和耐藥趨勢(shì),指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素,減少耐藥性的產(chǎn)生。方法 采用雙紙片確認(rèn)法檢測(cè)ESBLs,藥敏試驗(yàn)采用雙擴(kuò)散法。結(jié)果 68株銅綠假單胞菌中有15株產(chǎn)生ESBLs,檢出率22.06%。結(jié)論 應(yīng)用雙紙片擴(kuò)散法檢測(cè)銅綠假單胞菌產(chǎn)酶菌株,銅綠假單胞菌產(chǎn)ESBls菌株檢出率較高,耐藥性嚴(yán)重,臨床應(yīng)引起重視。

銅綠假單胞菌；超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；藥物敏感試驗(yàn)

銅綠假單胞菌又稱綠膿桿菌,是條件致病菌,廣泛存在于潮濕的環(huán)境中,是院內(nèi)感染的常見致病菌［1］。由于占院內(nèi)感染細(xì)菌的首位,所以β-內(nèi)酰胺酶類藥物是臨床應(yīng)用最多的抗生素,銅綠假單胞菌的耐藥性較為普遍,耐藥的重要機(jī)制之一是產(chǎn)生ESBLs［2,3］。本文通過對(duì)本地區(qū)兩所醫(yī)院分離的銅綠假單胞菌,采用雙紙片擴(kuò)散法對(duì)其產(chǎn)生的ESBLs進(jìn)行檢測(cè),探討此方法的可用性及藥敏情況分析研究?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 選取2013年1～12月本院臨床送檢的住院患者標(biāo)本72株,主要為痰、尿、傷口分泌物,其中痰標(biāo)本55株,傷口分泌物標(biāo)本9株、尿標(biāo)本4株。標(biāo)準(zhǔn)菌株：銅綠假單胞菌ATCC 29853、肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603購(gòu)于國(guó)家衛(wèi)生部(現(xiàn)衛(wèi)計(jì)委)臨檢中心。

1.1.2 藥敏紙片 英國(guó)Oxoid公司提供的亞胺培南紙片,頭孢他啶、頭孢他啶/棒酸、頭孢噻肟、頭孢噻肟/棒酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氧氟沙星、阿米卡星、頭孢哌酮、氨曲南、環(huán)丙沙星、慶大霉素、妥布霉素為北京天壇生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn),M-H藥敏瓊脂為法國(guó)生物梅里埃產(chǎn)品。

1.2 方法 ESBLs檢測(cè)按照美國(guó)臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(NCCLS)推薦確認(rèn)法。將分純菌株進(jìn)行生化鑒定,鑒定為銅綠假單胞菌的細(xì)菌制成0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙壕鶆蛲磕ㄓ?mm的M-H瓊脂上,貼頭孢他啶(CAZ)30 μg/片、頭孢他啶/棒酸；頭孢噻肟(CTX)30 μg/片、頭孢噻肟/棒酸,按標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24 h,分別測(cè)定2種紙片單獨(dú)和加棒酸后的抑菌環(huán)直徑,加棒酸和不加棒酸的抑菌環(huán)直徑之差≥5mm即確認(rèn)為產(chǎn)ESBls菌株。以標(biāo)準(zhǔn)銅綠假單胞菌ATCC 27853菌株為陰性對(duì)照,以標(biāo)準(zhǔn)肺炎克雷伯氏菌ATCC 700603菌株為陽(yáng)性對(duì)照。

2 結(jié)果

68株銅綠假單胞菌檢出ESBLs株15例,檢出率為22.06%。15株ESBLs陽(yáng)性菌株對(duì)抗生素藥敏情況上,哌拉西林/他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮、頭孢三嗪、氨曲南、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、亞胺培南的耐藥率分別為66.67%(10/15)、100.00%(15/15)、100.00%(15/15)、93.33%(14/15)、93.33%(14/15)、80.00%(12/15)、86.07%(13/15)、93.33%(14/15)、80.00%(12/15)、86.67%(13/15)、80.00%(12/15)、86.67%(13/15)。在53株ESBLs陰性銅綠假單胞菌耐藥性上,哌拉西林/他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢哌酮、頭孢三嗪、氨曲南、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、慶大霉素、妥布霉素、阿米卡星、亞胺培南的耐藥率分別為26.42%(14/53)、47.17%(25/53)、58.49%(31/53)、49.06% (26/53)、50.94%(27/53)、47.17%(25/53)、50.94%(27/53)、54.72% (29/53)、37.74%(20/53)、49.06%(26/53)、22.64%(12/53)、11.32%(6/53)。

3 討論

銅綠假單胞菌作為臨床上常見的條件致病菌,能夠通過不同機(jī)制產(chǎn)生藥物耐受性,對(duì)臨床感染控制構(gòu)成嚴(yán)重威脅。銅綠假單胞菌的抗藥性分子機(jī)理非常復(fù)雜,往往是多種耐藥機(jī)制相互作用下產(chǎn)生的。近年來深入研究,在銅綠假單胞菌中發(fā)現(xiàn)了多種β-內(nèi)酰胺酶［4,5］。研究銅綠假單胞菌β-內(nèi)酰胺酶,一方面可正確認(rèn)識(shí)其耐藥機(jī)制,有助于感染控制；另一方面,由于銅綠假單胞菌有可能是多種耐藥基因的傳播源,這將有助于了解和控制醫(yī)院內(nèi)耐藥基因的播散和流行。β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生是銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制,β-內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌產(chǎn)生的酶類,能夠破壞滲透入菌體內(nèi)的β-內(nèi)酰胺類抗生素的活性。β-內(nèi)酰胺酶種類很多,ESBLs是其中的一種［6］。ESBLs是一類水解窄譜青霉素、頭孢菌素及單環(huán)內(nèi)酰胺菌素的β-內(nèi)酰胺酶［7］。ESBLs則是β-內(nèi)酰胺酶中的一個(gè)類別,主要表現(xiàn)為：能分解第3代頭孢菌素,且能為棒酸抑制,阿莫西林、替卡西林等抗生素中含有棒酸,近些年來其耐藥性的增加,臨床上開始使用哌拉西林/他唑巴坦鈉等抗生素替代。

銅綠假單胞菌產(chǎn)ESBLs菌株的耐藥性明顯高于銅綠假單胞菌產(chǎn)ESBLs陰性菌株。

綠假單胞菌產(chǎn)ESBLs的檢出率為22.06%,對(duì)亞胺培南耐藥并非由金屬酶所致,說明碳青霉烯類對(duì)銅綠假單胞菌的耐藥起作用,臨床上認(rèn)為亞胺培南對(duì)銅綠假單胞菌100%敏感的傳統(tǒng)用藥方法需改變,應(yīng)該在微生物室的正確試驗(yàn)下指導(dǎo)用藥。

雙紙片確證法檢測(cè)ESBLs是NCCLS推薦的檢測(cè)大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌及其他腸桿菌細(xì)菌產(chǎn)ESBLs菌的確定標(biāo)準(zhǔn)方法。銅綠假單胞菌等非發(fā)酵菌產(chǎn)生的ESBLs的檢測(cè)方法,國(guó)內(nèi)外到目前還沒有推薦一種更合適的方法來檢測(cè)。作者應(yīng)用此方法來檢測(cè)其結(jié)果經(jīng)臨床驗(yàn)證也是目前檢測(cè)非發(fā)酵菌產(chǎn)ESBLs菌的一個(gè)有效手段,也能幫助和指導(dǎo)臨床正確選用抗生素,治療感染癥。

銅綠假單胞菌產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)亞胺培南產(chǎn)生部分耐藥外,大部分菌敏感,仍是首選藥,其次選用哌拉西林、阿米卡星、環(huán)丙沙星、頭孢他啶等藥物,臨床上最好在藥物敏感試驗(yàn)指導(dǎo)下采取聯(lián)合用藥,以聯(lián)合用藥達(dá)到較好的臨床治療效果。對(duì)產(chǎn)生ESBLs菌株患者嚴(yán)格管理控制,防止爆發(fā)流行。

［1］金保富,林平,陳佳玉,等.銅綠假單胞菌DHA-1型AmpC酶的檢測(cè)及耐藥性分析.中國(guó)抗生素雜志,2012,37(7):510-513.

［2］張傳飛.多重耐藥銅綠假單胞菌產(chǎn)ESBLs酶與高產(chǎn)AmpC酶情況及藥物敏感性研究.中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,2015,27(1):76-79.

［3］侯佳惠,童郁,費(fèi)靜嫻,等.銅綠假單胞菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶基因分布及流行特征分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012,27(1):39-43.

［4］王章星,黎肇光,汪春,等.新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房銅綠假單胞菌感染分布及抗生素耐藥分析.廣西醫(yī)學(xué),2012,34(7):931-932.

［5］劉吉純,張艷菊,郝英姿,等.銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)及耐藥性分析.中國(guó)抗生素雜志,2011,36(10):783-785.

［6］劉金波,何海明,周寧,等.銅綠假單胞菌高活性β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)及耐藥性分析.臨床檢驗(yàn)雜志,2004(9):389-390.

［7］姚振江,周俊立,曾轉(zhuǎn)萍,等.ESBLs與MDR銅綠假單胞菌流行現(xiàn)狀及其關(guān)系研究.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2011,27(2):199-201.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.11.147

2016-03-02］

163316 大慶市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科