劉　華，　王穎智，　沈云岳，　莊亦暉，　康　懿，

王雯靜，　吳樹(shù)英，　蔣　煒，　高　鋒

(上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200233)

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乙肝疫苗接種后新生兒乙型肝炎表面抗原一過(guò)性陽(yáng)性的研究

劉華，王穎智，沈云岳，莊亦暉，康懿，

王雯靜，吳樹(shù)英，蔣煒，高鋒

(上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200233)

摘要：目的回顧性分析并探討接種乙型肝炎(簡(jiǎn)稱乙肝)疫苗與新生兒乙型肝炎表面抗原(HBsAg)一過(guò)性陽(yáng)性的關(guān)系。方法對(duì)進(jìn)行HBsAg檢測(cè)的178例新生兒資料進(jìn)行回顧性分析，對(duì)疫苗接種后的HBsAg陽(yáng)性發(fā)生率、“乙肝二對(duì)半”模式、HBsAg濃度及與接種時(shí)間的關(guān)系等進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，通過(guò)膽紅素干擾試驗(yàn)排除新生兒黃疸對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響，根據(jù)新生兒血容量進(jìn)行乙肝疫苗體外稀釋,檢測(cè)其HBsAg濃度。結(jié)果178例新生兒共檢測(cè)184次，檢出HBsAg陽(yáng)性16例，其中11例為乙肝疫苗引起的HBsAg陽(yáng)性，3例為母嬰垂直傳播引起的HBsAg陽(yáng)性，2例不確定。新生兒乙肝疫苗接種后HBsAg陽(yáng)性主要發(fā)生于接種疫苗后0～7 d，與疫苗接種后8～14 d及15～31 d比較，HBsAg的陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.046、0.032)。疫苗接種后的HBsAg濃度為0.12(0.07～0.25)IU/mL，屬低值水平。接種疫苗后0～2 d，HBsAg濃度最高，之后逐漸下降。乙肝疫苗接種后11例以HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性為主，其中3例同時(shí)伴乙型肝炎表面抗體(HBsAb)陽(yáng)性，不同于乙肝病毒感染后常見(jiàn)血清模式。將乙肝疫苗1∶600稀釋后檢測(cè)HBsAg為0.13 IU/mL，與乙肝疫苗引起的HBsAg陽(yáng)性濃度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]近似。干擾試驗(yàn)顯示383.9 μmol/L總膽紅素、29.9 μmol/L直接膽紅素不影響HBsAg檢測(cè)。結(jié)論接種乙肝疫苗2周內(nèi)的新生兒發(fā)生HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性的可能性較大，建議HBsAg檢測(cè)在乙肝疫苗接種2周后再進(jìn)行。

隨著檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)的靈敏度已達(dá)到0.15 ng/mL。近幾年來(lái)，我們?cè)谂R床檢驗(yàn)工作中就遇到不少新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性的情況，而他們的母親多數(shù)不是乙型肝炎(簡(jiǎn)稱乙肝)患者。這引起了我們的極大關(guān)注。因此，我們對(duì)檢測(cè)HBsAg的新生兒的相關(guān)病史進(jìn)行了回顧性分析，同時(shí)分析了乙肝疫苗引起的HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性發(fā)生時(shí)間、頻率、濃度、乙肝標(biāo)志物模式，將乙肝疫苗按新生兒血容量進(jìn)行體外稀釋，模擬體內(nèi)疫苗濃度并檢測(cè)HBsAg含量，通過(guò)膽紅素干擾試驗(yàn)排除新生兒黃疸對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響，為臨床合理解釋新生兒HBsAg陽(yáng)性結(jié)果提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，也為臨床合理掌握檢測(cè)HBsAg節(jié)點(diǎn)提供指導(dǎo)性建議。

材料和方法

一、研究對(duì)象

收集2010年1月至2013年8月上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院兒科住院部新生兒檢測(cè)HBsAg的病例178例，男100例，女78例，年齡1～31 d。對(duì)178例新生兒病史資料進(jìn)行回顧性分析。其中，147例新生兒在出生24 h內(nèi)接受了乙肝疫苗接種，根據(jù)疫苗接種時(shí)的年齡將這147例新生兒分為0～7 d組、8～14 d組和15～31 d組分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

二、儀器與試劑

ABBOTT i2000全自動(dòng)免疫發(fā)光分析儀及配套HBsAg化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑、HBsAg稀釋液(美國(guó)雅培公司)；HBsAg弱陽(yáng)性混合血清；Sysmex干擾檢測(cè)試劑盒；日立7600全自動(dòng)生化分析儀及配套膽紅素檢測(cè)試劑(日本日立公司)；重組乙肝疫苗(劑量：0.5 mL/支，含重組HBsAg 10 mg)。

三、方法

1．乙肝指標(biāo)檢測(cè)乙肝指標(biāo)包括HBsAg、乙肝表面抗體(anti-hepatitis B surface antigen antibody, HBsAb)、乙肝e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)、乙肝核心抗體(anti-hepatitis B core antigen antibody, HBcAb)、乙肝e抗體(anti-hepatitis B e antigen antibody, HBeAb)，合稱為“乙肝二對(duì)半”。以上指標(biāo)均采用微粒子化學(xué)發(fā)光法。依據(jù)操作規(guī)程做好定標(biāo)和室內(nèi)質(zhì)量控制，結(jié)果以HBsAg>0.05 IU/mL判定為有反應(yīng)性，所有有反應(yīng)性的樣本均已按復(fù)檢要求復(fù)檢為陽(yáng)性。常見(jiàn)的“乙肝二對(duì)半”模式見(jiàn)表1。

表1　常見(jiàn)“乙肝二對(duì)半”模式

2．總膽紅素(total bilirubin, TBil)和直接膽紅素(direct bilirubin, DBil)檢測(cè)采用礬酸氧化法檢測(cè)TBil和DBil，按要求做好定標(biāo)工作和室內(nèi)質(zhì)量控制，TBil參考區(qū)間為0～18 μmol/L，DBil參考區(qū)間為0～6 μmol/L。

4．重組乙肝疫苗制品HBsAg檢測(cè)使用HBsAg稀釋液按1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000分別對(duì)重組乙肝疫苗進(jìn)行稀釋，然后檢測(cè)HBsAg濃度。如果按新生兒平均體重3 000 g，血容量300 mL，注射一支疫苗(0.5 mL/支)計(jì)算，相當(dāng)于將疫苗1∶600稀釋。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。HBsAg濃度以中位數(shù)(范圍)表示，率的比較采用卡方檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、178例新生兒HBsAg陽(yáng)性結(jié)果分析

178例新生兒中有147例在出生24 h內(nèi)接種了乙肝疫苗，疫苗接種率為82.6%；其中有12例新生兒在接種后1周內(nèi)檢測(cè)HBsAg呈陽(yáng)性，濃度為0.12(0.07～0.25)IU/mL。這12例新生兒中有6例進(jìn)行了第2次HBsAg隨訪檢測(cè)，其中4例確認(rèn)為陰性結(jié)果。查閱這12例HBsAg陽(yáng)性新生兒母親病史，其中11名無(wú)肝炎史，排除母嬰垂直傳播的可能性；另1例新生兒母親病史資料及患兒HBsAg隨訪資料缺失。見(jiàn)表2。

另外31例未接種乙肝疫苗的新生兒中有4例HBsAg呈陽(yáng)性，且其中3例在出生后1 d的“乙肝二對(duì)半”結(jié)果即顯示為“大三陽(yáng)”模式，其母親均為乙肝“大三陽(yáng)”患者，存在母嬰垂直傳播的可能性；另1例新生兒出生后5 d檢測(cè)HBsAg呈陽(yáng)性(0.16 IU/mL)，且“乙肝二對(duì)半”結(jié)果為HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性，其母親肝炎史不詳，該新生兒也未能進(jìn)行HBsAg隨訪。見(jiàn)表3。

178例新生兒HBsAg檢測(cè)結(jié)果的分類統(tǒng)計(jì)流程圖見(jiàn)圖1。

表2　12例接種乙肝疫苗的HBsAg陽(yáng)性新生兒的一般資料

注：“+”表示HBsAg陽(yáng)性；“-”表示HBsAg陰性

表3　未接種乙肝疫苗的HBsAg陽(yáng)性新生兒資料

圖1　新生兒不同時(shí)間內(nèi)檢測(cè)HBsAg結(jié)果分類統(tǒng)計(jì)流式圖

二、乙肝疫苗接種后新生兒HBsAg陽(yáng)性的濃度及“乙肝二對(duì)半”模式分析

未接種組的HBsAg陽(yáng)性濃度[1.11(0.16～2.65) IU/mL]明顯高于接種乙肝疫苗組[0.12(0.07～0.25)IU/mL]。乙肝疫苗接種后HBsAg陽(yáng)性的濃度值多<0.5 IU/mL，而未接種疫苗的4例中有2例HBsAg陽(yáng)性結(jié)果>2 IU/mL，見(jiàn)圖2。

乙肝疫苗接種后HBsAg陽(yáng)性的“乙肝二對(duì)半”模式以HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性為主，其中3例同時(shí)伴HBsAb低值陽(yáng)性，見(jiàn)表2；而未接種疫苗的HBsAg陽(yáng)性的“乙肝二對(duì)半”模式以“大三陽(yáng)”為主，見(jiàn)表3。

三、新生兒接種疫苗后HBsAg陽(yáng)性出現(xiàn)的時(shí)間分析

147例接種乙肝疫苗的新生兒中有12例HBsAg呈陽(yáng)性(>0.05 IU/mL)。HBsAg陽(yáng)性主要集中于接種后7 d內(nèi)，接種后8～14 d及15～31 d HBsAg均呈陰性。見(jiàn)圖3。

12例接種乙肝疫苗后HBsAg呈陽(yáng)性的新生兒其HBsAg濃度隨著乙肝疫苗接種時(shí)間的增加而逐漸下降。接種后0～2 d，HBsAg處于較高水平(≥0.2 IU/mL)；接種后3～5 d，HBsAg濃度不斷下降，于6～7 d降至0.1 IU/mL。見(jiàn)圖4。

圖2　接種疫苗組與未接種疫苗組HBsAg濃度比較

注：虛線為HBsAg陽(yáng)性判定值(0.05 IU/mL)；與0～7 d組比較，*P<0.05

圖3新生兒接種乙肝疫苗后HBsAg陽(yáng)性的時(shí)間及結(jié)果

圖4　新生兒接種乙肝疫苗后HBsAg濃度的變化

四、黃疸對(duì)HBsAg低值陽(yáng)性的干擾

對(duì)照樣本HBsAg檢測(cè)均值為0.200 IU/mL(n=12)，±1.96s范圍為0.184～0.206 IU/mL。TBil干擾實(shí)驗(yàn)樣本的HBsAg檢測(cè)均值為0.194 IU/mL(n=7)，DBil干擾實(shí)驗(yàn)樣本的HBsAg檢測(cè)均值為0.188 IU/mL(n=5)，均在可接受范圍內(nèi)。

五、重組乙肝疫苗制品檢測(cè)HBsAg結(jié)果

重組乙肝疫苗直接檢測(cè)HBsAg的結(jié)果為7.00 IU/mL，將疫苗分別以1∶200、1∶600、1∶1 000、1∶2 000稀釋后，檢測(cè)HBsAg濃度分別為0.31、0.13、0.13和0.06 IU/mL。將疫苗以1∶600稀釋測(cè)得的HBsAg濃度與接種疫苗后新生兒HBsAg陽(yáng)性濃度[0.12(0.07～0.25)IU/mL]相符。

討論

乙肝病毒疫苗含有純化的基因重組HBsAg，在注射疫苗后可能會(huì)使HBsAg檢測(cè)呈陽(yáng)性。國(guó)外在乙肝疫苗應(yīng)用初期已發(fā)現(xiàn)了這個(gè)問(wèn)題。20世紀(jì)90年代之后陸續(xù)有研究者發(fā)現(xiàn)因注射乙肝疫苗Engerix B 導(dǎo)致新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性的情況[2-4]。但由于新生兒的血液樣本較難得到，因此這些文獻(xiàn)報(bào)道中的標(biāo)本量都相對(duì)較少，從十幾例至幾十例，疫苗接種后HBsAg的陽(yáng)性檢出率也由17%至55%不等，相差懸殊。之后陸續(xù)有類似情況的報(bào)道，透析患者[5-6]、獻(xiàn)血員[7]及普通成人[8-10]都有涉及。我國(guó)于2002年正式將乙肝疫苗納入計(jì)劃免疫，起步較晚，因此國(guó)內(nèi)罕有關(guān)于新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性的報(bào)道。

本研究針對(duì)中國(guó)人群及國(guó)產(chǎn)疫苗，回顧分析了178名新生兒的184次HBsAg檢測(cè)結(jié)果，樣本量較之前的報(bào)道都大，并首次對(duì)乙肝疫苗接種后新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性常為低值陽(yáng)性的原因給出了解釋。由于新生兒樣本量有限，本研究中的陽(yáng)性標(biāo)本無(wú)法進(jìn)行中和試驗(yàn)確認(rèn)，但所有陽(yáng)性血清樣本及隨訪標(biāo)本均按說(shuō)明書(shū)以10 000×g離心10 min后進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)確認(rèn)。從總體情況來(lái)看，本院乙肝疫苗引起新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性的發(fā)生率為8.2%，低于國(guó)外早期的研究結(jié)果[3-4]，這可能和檢測(cè)方法的不同及Cut-off值的設(shè)定有關(guān)。

從接種時(shí)間上觀察，本研究中新生兒接種乙肝疫苗后檢測(cè)到HBsAg陽(yáng)性都集中于接種疫苗后的1周內(nèi)，這與文獻(xiàn)報(bào)道的時(shí)間相符[3-5]。但8～14 d檢測(cè)到陽(yáng)性的可能性仍然較高，因此建議HBsAg檢測(cè)最好在接種疫苗后至少2周以后再進(jìn)行。有2例新生兒進(jìn)行HBsAg第2次隨訪檢測(cè)時(shí)未能轉(zhuǎn)陰，可能就是由于隨訪時(shí)間在疫苗接種后的1周內(nèi)，血液中仍然存在可檢出的重組HBsAg。

從HBsAg陽(yáng)性濃度分析，疫苗接種后新生兒HBsAg陽(yáng)性濃度為低值水平[0.12(0.07～0.25)IU/mL]，一過(guò)性HBsAg陽(yáng)性濃度在接種疫苗后0～2 d較高，之后隨著乙肝疫苗接種時(shí)間的增加而呈逐漸下降的趨勢(shì)，這與BERNSTEIN等[4]與RYSGAARD等[8]的報(bào)道稍有差異，他們發(fā)現(xiàn)HBsAg高峰值出現(xiàn)在接種疫苗后的2～3 d，之后逐漸下降。原因可能為一方面研究對(duì)象不完全相同，另一方面本研究中0～2 d的例數(shù)相對(duì)較少，不能完全代表整體水平。從“乙肝二對(duì)半”模式上發(fā)現(xiàn)，接種疫苗后的模式只分為HBsAg單項(xiàng)陽(yáng)性(75%)以及HBsAg陽(yáng)性伴低值HBsAb陽(yáng)性(25%)2種模式，不同于常規(guī)乙肝病毒感染后的模式。干擾試驗(yàn)證明，本研究中新生兒黃疸對(duì)HBsAg檢測(cè)無(wú)影響，HBsAg陽(yáng)性與黃疸無(wú)關(guān)。

綜上所述，我們初步推斷新生兒HBsAg一過(guò)性陽(yáng)性可能與乙肝疫苗接種直接相關(guān)。因此提醒臨床醫(yī)師盡量在疫苗接種2周后再進(jìn)行HBsAg檢測(cè)，以排除乙肝疫苗對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響。

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(本文編輯：龔曉霖)

關(guān)鍵詞：乙型肝炎表面抗原；一過(guò)性陽(yáng)性；乙型肝炎疫苗；新生兒

Research on vaccine-induced transient hepatitis B surface antigen positivity in newborn infantsLIUHua，WANGYingzhi，SHENYunyue，ZHUANGYihui，KANGYi，WANGWenjing，WUShuying，JIANGWei，GAOFeng. (DepartmentofClinicalLaboratory，theSixthHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200233，China)

Abstract:ObjectiveTo retrospectively analyze and study the relationship of vaccination against hepatitis B virus with transient hepatitis B surface antigen(HBsAg) positivity in newborn infants. MethodsThe data of 178 newborn infants were collected and analyzed retrospectively, who were determined for HBsAg. The positive rate of HBsAg, hepatitis B 5 items, HBsAg concentration and vaccination time after vaccine inducing were determined, and the relationships were analyzed statistically. Interference testing was performed to investigate the influence of serum jaundice in HBsAg assay. The hepatitis B virus vaccine was diluted in vitro according to neonatal blood volume, and HBsAg concentration was detected. ResultsA total of 178 newborn infants were determined for 184 times totally, and 16 newborn infants had positive HBsAg. Of these 16 newborn infants， 11 cases could be attributed to vaccination， 3 cases were due to mother-to-child transmission， and 2 cases were with unknown cause. The HBsAg positivity for newborn infants receiving vaccine 0-7d were statistically significant in comparison with those of 8-14 d and 15-31 d (P=0.046 and 0.032). After the vaccine was injected, the concentration of HBsAg was 0.12 (0.07-0.25) IU/mL, which was at low level. The concentration of HBsAg reached the highest level after 0-2d of injection, and then it decreased gradually. There were totally 11 samples which were HBsAg single positive, and 3 samples of them were both HBsAg and anti-hepatitis B surface antigen antibody (HBsAb) positive, which was obviously different from the common serum pattern of hepatitis B virus infection. HBsAg concentration was 0.13 IU/mL at 1∶600 dilution of vaccine， being similar with that of vaccine-induced HBsAg positive [0.12 (0.07-0.25) IU/mL]. Jaundice interference testing showed that 383.9 μmol/L total bilirubin and 29.9 μmol/L direct bilirubin distractors did not affect HBsAg results. ConclusionsTransient HBsAg positivity can occur in newborn infants within 2 weeks post-vaccination. Newborn infants may not be screened for HBsAg within 2 weeks following vaccination against hepatitis B virus.

Key words:Hepatitis B surface antigen；Transient positivity；Hepatitis B virus vaccine；Newborn infant

收稿日期：(2015-03-23)

通訊作者：髙鋒，聯(lián)系電話：021-24058702。

作者簡(jiǎn)介：劉華，女，1976年生，學(xué)士，主管技師，主要從事臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)工作。

中圖分類號(hào)：

文章編號(hào)：1673-8640(2015)11-1107-05R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.11.012