呂 強，溫欣茹，陳晶冰 （內蒙古自治區(qū)包頭市包鋼集團第三職工醫(yī)院，內蒙古包頭014010）

·藥學與轉化醫(yī)學·

國產尼群地平有關物質研究

呂 強，溫欣茹，陳晶冰 （內蒙古自治區(qū)包頭市包鋼集團第三職工醫(yī)院，內蒙古包頭014010）

目的：確定尼群地平原料藥及其片劑中有關物質的雜質歸屬.方法：采用2010年版《中國藥典》項下該藥物有關物質檢查法檢查，并采用富集分離的方法收集有關物質，通過LC-MS-MS初步確定其分子量及其結構.結果：通過對2009年及2011年的多廠家多批次的尼群地平原料藥及片劑的考察，說明尼群地平及其片劑中有關物質的雜質歸屬.結論：檢測結果對于尼群地平原料藥及其片劑的雜質分析、質量控制和合成工藝的改進具有重要作用，并且為國產尼群地平的生產和用藥安全提供了檢測方法及判定依據(jù).

尼群地平片；有關物質；雜質歸屬

0 引言

尼群地平（Nitrendipine，NTD）由德國拜爾公司于20世紀60年代首次合成并上市，國內于20世紀70年代開始生產［1］.2010年版《中國藥典》、歐洲藥典、英國藥典、日本藥局方項下均收載此藥，其有關物質的檢查方法均為液相色譜法，但目前國內尚無關于該品種未知雜質的研究.因此，為更好地控制該品種質量，本研究說明尼群地平原料藥及其片劑的雜質歸屬，為國產尼群地平的生產提供指導意見.

1 儀器和試藥

1.1 儀器Alltech液相色譜儀；PDA檢測器；SarloriusBP211D電子天平；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器；ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀；DHG-9145A型電熱鼓風干燥箱；LC-20AD型液相色譜儀；API3200型質譜儀［2］.

1.2 試藥尼群地平對照品；雜質Ⅰ對照品；2011年尼群地平片；尼群地平原料藥；2009年尼群地平片；乙腈、四氫呋喃、甲醇為色譜純其他試劑均為分析純.

2 方法和結果

2.1 溶液的制備片劑供試品溶液：避光操作.取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于尼群地平50 mg），置50 mL量瓶中，加四氫呋喃12 mL，振搖10 min，再加乙腈－水（20∶56）混合溶液適量，振搖使尼群地平溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 m濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為片劑供試品溶液.對照溶液：取2，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-3，5-吡啶二甲酸甲酯乙酯（雜質Ⅰ）對照品，精密稱定，加四氫呋喃適量使溶解，用乙腈－水（20∶56）混合溶液定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，精密加入濃度為1 mg／mL的尼群地平對照品溶液1 mL，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液.系統(tǒng)適應性溶液：取尼群地平對照品與雜質Ⅰ對照品各適量，加四氫呋喃適量使溶解，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中各約含1 mg與10 g的混合溶液，作為系統(tǒng)適應性溶液［3］.

2.2 色譜條件phenomenex十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱（150 mm×4.6 mm），乙腈－四氫呋喃－水（20∶24∶56）為流動相；檢測波長237 nm；進樣量20 L；流速為1 mL／min；柱溫：25℃.

2.3 系統(tǒng)適應性試驗分別取溶液制備項下的原料藥供試品溶液、片劑供試品溶液、對照溶液、空白溶劑及系統(tǒng)適應性溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，由色譜圖可見，在此試驗條件下，主峰與雜質峰分離效果好，峰形較好，保留時間適中，其中主峰保留時間約為10.820 min，雜質Ⅰ峰的保留時間約為8.895 min，理論塔板數(shù)為5780，尼群地平峰與雜質Ⅰ峰的分離度為4.35符合要求［4］.

2.4 2011年份的片劑有關物質比較分別取溶液制備項下片劑供試品溶液（2011年樣品），按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，由圖得出18個廠家雜質Ⅰ的平均百分含量為0.74%，雜質Ⅱ的平均百分含量為4.18%，雜質Ⅲ的平均百分含量為0.94%.結果顯示：所測定的這些廠家生產的尼群地平片的有關物質，除A廠、D廠外均可檢出三種雜質，其中雜質Ⅰ為已知雜質，雜質Ⅱ、雜質Ⅲ為未知雜質，其中，A廠、C廠、L廠、N廠、O廠、P廠、Q廠、R廠尼群地平片的有關物質檢查不符合規(guī)定，且雜質Ⅱ超標是造成我國尼群地平片有關物質超標的主要原因，因此有必要對雜質Ⅱ進行深入研究［5］.

2.5 2009年份的片劑有關物質比較分別取溶液制備項下的片劑供試品溶液（2009年樣品），按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，由圖得出18個廠家2009年樣品雜質Ⅰ的平均百分含量為1.12%，雜質Ⅱ的平均百分含量為6.13%，雜質Ⅲ的平均百分含量為1.64%.結果顯示：同一廠家的樣品，2009年份的樣品經放置后，雖在避光條件下，雜質Ⅰ、雜質Ⅱ及雜質Ⅲ的含量較2011年份的同一廠家樣品均有所增加，多數(shù)廠家的片劑有關物質不合格原因為雜質Ⅱ超標，但均未產生新的雜質，且雜質Ⅱ的超標是造成尼群地平片不合格樣品出現(xiàn)的主要原因，所以有必要對未知雜質進行研究［6］.

2.6 LC-MS法解析未知雜質的結構

2.6.1 LC-MS條件 LC條件：phenomenex十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱（250×4.6 mm），流動相乙腈－水（70∶30）.MS條件：電噴霧離子化負離子檢測方式（ESI－）；質核比范圍：100～500；去簇電壓（EP）：－50 V；解簇電壓（DP）：－41 V；碰撞能量（CE）：－25 eV［7］.尼群地平負離子掃描結果分析在負離子模式下，尼群地平的ESI一級掃描主要生成準分離離子峰［M＋H］－，準分子離子峰［M＋H］－值為m／z 359.2，選擇性對m／z 359.2準分子離子峰［M＋H］－進行二級質譜分析，產生的主要碎片為m／z 121.9.

2.6 2 雜質Ⅱ的結構解析 雜質Ⅱ的［M＋H］－準分子離子峰為m／z 345.0，說明雜質Ⅱ的相對分子質量為346.雜質Ⅱ主要的碎片離子為m／z 122.3和m／z 219.0.初步分析，其裂解途徑與尼群地平及雜質Ⅰ相同.由以上分析，并結合合成工藝，可以得出最有可能的結構是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.這個雜質為尼群地平雜質B［8］.

2.6 3 雜質Ⅲ的結構解析 雜質Ⅲ的［M＋H］－準分子離子峰為m／z 373，說明雜質Ⅲ的相對分子質量為374.0.雜質Ⅱ主要的碎片離子為m／z 121.2.初步分析，其裂解途徑與尼群地平及雜質Ⅰ相同.由以上分析，并結合合成工藝，可以得出最有可能的結構是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.這個雜質為尼群地平雜質C.

3 討論

經過初篩，得出結論，不同廠家的尼群地平原料藥、尼群地平片劑有關物質不合格的原因均為單個雜質超標，即雜質Ⅱ，所以建議藥典更科學的修訂對雜質Ⅱ的限量規(guī)定，以達到安全有效用藥的要求［9－10］.

本研究采用富集分離的方法收集有關物質，通過LC-MS－MS初步確定未知有關物質的分子量及其結構.得到雜質Ⅱ可能的結構是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.雜質Ⅲ最有可能的結構是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.本研究為尼群地平有關物質的進一步研究提供依據(jù).

由于尼群地平對光不穩(wěn)定，故本試驗應在所有操作均應在避光條件下進行.

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R927

A

2095-6894（2016）11-66-02

2016－09－14；接受日期：2016－09－30

呂 強.本科，主管藥師.研究方向：藥學.Tel：0472-2166149 E-mail：994215426＠qq.com