李 鵬，賀 頌，朱鴻翔，徐 圭，肖宇辰

（吉林醫(yī)藥學院，吉林 吉林 132013）

白術多糖對小鼠免疫調節(jié)作用的影響

李 鵬，賀 頌，朱鴻翔，徐 圭，肖宇辰

（吉林醫(yī)藥學院，吉林 吉林 132013）

目的 研究中草藥白術多糖成分對正常小鼠的免疫調節(jié)作用。方法 分別以白術多糖濃度為125，250，500 mg/（kg·d）小鼠灌胃，對照組予以等量的生理鹽水，在連續(xù)灌胃30 d之后，通過血清抗體的測定、小鼠碳廓清實驗的檢測、脾臟以及相關臟器指數(shù)來觀察白術多糖在免疫調節(jié)上的作用。結果 在250～500 mg/（kg·d）劑量范圍之內，尤其是在300 mg左右我們發(fā)現(xiàn)白術多糖在小鼠碳廓清指數(shù)一級Con A所誘導的小鼠脾臟淋巴細胞轉化能力有明顯的提高。結論 白術多糖對正常小鼠具有一定的免疫調節(jié)作用。

白術；多糖；免疫調節(jié)

多糖存在于動植物中，是由單糖形成的天然高分子的化合物，近年來，許多國內外的科學家們發(fā)現(xiàn)動植物的多糖及其多糖復合物在參與和介導細胞免疫和凋亡等調節(jié)上具有很大的作用。大量研究實驗表明動植物多糖具有免疫調節(jié)生物活性和抗腫瘤活性的作用[1-2]。主要是基于其毒性小，作用廣泛，以及功能較多，目前已成為醫(yī)藥界的熱門研究領域。然而白術作為最常用的中草藥，具有健脾胃腸、燥濕利水、益氣補中、安胎、止汗以及促進血液循環(huán)之功效。本文就白術多糖的免疫學的研究領域進一步的探索。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物小鼠是來自于昆明，雌雄并重兼用體重的范圍是在（21±2.1）g，由溫州醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.2 試劑白術多糖

惠州市綠源保健品有限公司；靈芝多糖：南通市力健保健品有限公司。

1.3 實驗儀器與設備離心機

日本波速科技有限公司、HP CLASS100培養(yǎng)箱、超凈工作臺來自江蘇安泰蘇凈集團空氣技術有限公司、MK3553酶聯(lián)免疫吸附檢測儀來自于Thermo Labsystems 公司；倒置顯微鏡來自浙江光電儀器科技公司；型號UV-1800 紫外-可見分光光度計韓國島津公司。

1.4 動物分組

取雌雄并重昆明小鼠150只，按照隨機數(shù)字法進行隨機分成3組，每組50只。實驗方案：分為初次免疫和加強免疫；初次免疫即在實驗的第一天在三組小鼠的大腿內側腹股溝的皮下進行注射相對于的抗原，對照組按照相對于的比例進行生理鹽水的注射，排除其他的因素。1周后加強免疫，即和初次免疫相同。在實驗進行到第14天，進行小鼠眼球的采血，并立即加入3 mL 0.1%碳酸鈉的溶液中，設定在波長675 nm處進行OD值的測定，同時以碳酸鈉溶液作空白對照。最后將小鼠進行頸椎脫臼處理，分別稱取脾臟、肝臟的質量進行測量[3-5]。

1.5 白術多糖對Con A誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化的實驗過程中，按照1.5節(jié)的方法對小鼠進行實驗分組并且進一步的給藥，然后進行無菌情況下取小鼠脾臟約5 g，放入預冷后的PBS溶液中，再將其搗碎，進行上清溶液的吸取，放入離心機進行1500 r/min離心。棄掉上清液，用1 mL無菌水重懸細胞沉淀以裂解紅細胞，靜置40 s之后，加入1.5% NaCl溶液將其調整到等滲狀態(tài)。臺盼蘭染色計數(shù)，活細胞數(shù)大于 95%，將脾細胞懸液加入96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，實驗孔加入10 μL 50 μg/mL ConA，對照孔加入10 μLRPMI-1640培養(yǎng)液，然后放置于5% CO2培養(yǎng)箱時間為48 h，再者每孔加入20 μL 5 mg/mL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，加入異丙醇100 μL/孔，于5% CO237℃培養(yǎng)箱放置過夜后，最后用酶標儀進行測量各孔OD值，參考波長為630 nm、測定波長為570 nm。

1.6 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

在以上實驗中，白術多糖組的校正碳廓清指數(shù)α要明顯的高于對照組，同時，250 mg，500 mg兩組數(shù)據(jù)要交對照組有顯著的差異（P＜0.05），這就表示白術多糖能夠顯著的提高單核巨噬細胞的吞噬活性，同時增強小鼠的免疫能力，加速碳粒的清除。低劑量的白術多糖與空白對照有明顯的差異，表明白術多糖有一定的免疫作用，白術多糖的各組計量之間的的胸腺指數(shù)沒有顯著性差異（P＞0.05）。

3 結 論

在本次的白術多糖實驗過程中，并沒有發(fā)現(xiàn)白術多糖的高劑量對小鼠的免疫功能強于中低計量的情況，這個很可能是和多糖在量效之間有一定的關系，當然還有和白術多糖分子有很大的關系，當然上述的研究結果可以表明，白術多糖可以通過免疫調節(jié)的作用，增強巨噬細胞的活性，進一步的提高免疫細胞在應對抗原入侵時的抵抗力，能更好的發(fā)揮免疫的調節(jié)作用。

[1] 胡啟明,梅余霞,梁運祥.桑黃多糖體外免疫活性研究[J].食品科技,2013,38(9):142-145.

[2] 呂 峰,林勇毅,陳代園.惹該仁活性多糖對小鼠的免疫調節(jié)作用[J].中國食品學報,2013(6):20-24.

[3] 徐賢柱,饒 華,蔡險峰,等杜仲葉多糖提取及對小鼠免疫功能影響研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2013(3):541-542.

[4] 劉亞娟,陳賽娟,李海麗,等.枸杞多糖對生長獺兔生產性能及血清生化指標的影響[J].中國飼料,2013(20):22-25.

[5] 尹美珍,胡 崗,李仲娟,等.艾葉多糖對小鼠腹腔巨噬細胞內酶活性的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2013,24(9):2118-2120.

本文編輯：劉帥帥

R285.5

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ISSN.2095-6681.2016.32.095.01