李瑞雪，灑玉萍，祁培宏，袁　明，曹志東

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院；2.青海省中醫(yī)院肝病科)

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穴位埋線對(duì)酒精性肝病大鼠的治療作用

李瑞雪1，灑玉萍1，祁培宏2，袁明1，曹志東1

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院；2.青海省中醫(yī)院肝病科)

摘要目的研究穴位埋線對(duì)大鼠肝功及血清相關(guān)指標(biāo)的影響，探討豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線治療酒精性肝病的作用機(jī)制及其療效。方法應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測(cè)穴位埋線對(duì)酒精性肝病大鼠的治療作用。穴位埋線組采用豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線，空白組、模型組予蒸餾水灌胃，硫普羅寧組予硫普羅寧混懸液灌胃，埋線加硫普羅寧組埋線治療同時(shí)輔以硫普羅寧混懸液灌胃，治療4周后檢測(cè)大鼠血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、IL-1β，內(nèi)毒素(LPS)的含量。結(jié)果與空白組比較，模型組血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β，LPS水平顯著升高(P<0.01)；治療組上述指標(biāo)與模型組比較下降顯著(P<0.05)。結(jié)論穴位埋線對(duì)大鼠肝功及血清相關(guān)指標(biāo)存在影響，豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線能通過(guò)降低血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及內(nèi)毒素水平對(duì)酒精性肝病發(fā)揮治療作用。

關(guān)鍵詞穴位埋線酒精性肝病大鼠

THERAPEUTIC EFFECT OF POINT EMBEDDING THERAPY

ON ALCOHOLIC LIVER DISEASE IN RATS

Li Ruixue1，Sa Yuping1，Qi Peihong2，Yuan Ming1，Cao Zhidong1

(1.Qinghai University Medical College；

2.Qinghai Province Hospital of traditional Chinese Medicine，Division of Liver Diseases，

Qinghai Xining 810001，China)

Abstract ObjectiveTo observe the effect of acupoint catgut embedding therapy on hepatic function and serum related indicators in rats，and investigate the function mechanism of acupoint catgut embedding therapy of “fenglong”and“sanyinjiao”in treating alcoholic liver disease(ALD).Methods The therapeutic effects of acupoint catgut embedding therapy in rats with alcoholic liver disease were detected by molecular biology methods.Acupoint catgut embedding therapy at “fenglong”and“sanyinjiao” was applied in the point embedding therapy group.Rats in the blank and model group were administrated distilled water.The tiopronin group was administration with gastric perfusion of tiopronin suspention.The point embedding therapy combined with tiopronin group was treated with acupoint catgut embedding therapy，at the same time supplemented by tiopronin suspention.After treatment of 4 weeks，some indices were detected in the serum such as ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in each group.Results Compared with the blank group，the serum ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in model group were markedly higher(P<0.01)；The ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS in serum was significantly lower in therapy group than that in model group(P<0.05)．Conclusion Acupoint catgut embedding therapy has a definite effect on hepatic function and serum related indicators in rats.Acupoint catgut embedding therapy of“fenglong”and“sanyinjiao” exert the therapeutic effect by reducing ALT，AST，TNF-α，IL-1β，LPS levels in serum on alcoholic liver disease .

KeywordsAcupoint catgut embedding therapyAlcoholic liver diseaseRats

穴位埋線已廣泛用于非酒精性脂肪肝的治療，療效獨(dú)特。劉旭東、王甍[1-2]研究發(fā)現(xiàn)穴位埋線通過(guò)對(duì)肝臟組織胰島素JNK1信號(hào)通路的調(diào)控發(fā)生作用。然而，關(guān)于穴位埋線治療酒精性肝病的作用機(jī)制不明。本研究旨在觀察豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線對(duì)酒精性肝病大鼠血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、IL-1β，內(nèi)毒素(LPS)含量的影響，進(jìn)一步探討穴位埋線對(duì)酒精性肝病的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1動(dòng)物及飼料

清潔級(jí)SD雄性大鼠75只，重量170~190 g，由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心提供(許可證號(hào)：SCXK甘2011-0001)。普通飼料由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)中心配制。

1.2主要藥物及儀器

紅星牌56°二鍋頭白酒(北京紅星股份有限公司)；硫普羅寧腸溶膠囊(海南惠普森醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：140901)混懸液；埋線一次性器具(鎮(zhèn)江高冠醫(yī)療器械有限公司)，3-0號(hào)羊腸線(上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品股份有限公司)。DNM-9602酶標(biāo)分析儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)；RT-3000全自動(dòng)洗板機(jī)(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司)。ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS試劑盒(北京瑞格博科技發(fā)展有限公司)。

1.3動(dòng)物造模方法

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，隨機(jī)分為兩組，即空白組(15只)和ALD模型組(60只)?？瞻捉M大鼠每天中午蒸餾水灌胃，喂以普通飼料，自由飲水；ALD模型組大鼠采用梯度酒精灌胃法建立大鼠酒精性肝病動(dòng)物模型[3]，即自實(shí)驗(yàn)第l周起按8 mL/kg予白酒灌胃；第2周按10 mL/kg灌胃；第3周按12 mL/kg灌胃；第4周按12 mL/kg灌胃；第5周按13 mL/kg灌胃；第6周按12 mL/kg灌胃； 第7、8周按12 mL/kg灌胃，每日中午1次，喂以普通飼料，自由飲水?？瞻捉M灌胃劑量與模型組一致。ALD模型組連續(xù)酒精灌胃8周后，隨機(jī)抽檢動(dòng)物，檢測(cè)血清ALT，AST水平判斷造模是否成功。

1.4分組及治療方法

將ALD模型大鼠再隨機(jī)分為模型組、硫普羅寧組、穴位埋線組、埋線加硫普羅寧組?？瞻捉M、模型組每天中午用蒸餾水灌胃1次(10mL/kg)，喂以普通飼料，自由飲水，持續(xù)4周；硫普羅寧組每天中午灌服硫普羅寧混懸液(10mL/kg)；穴位埋線組選用豐隆，三陰交[4]穴位埋線，用一次性埋線器具將0.5 cm羊腸線快速刺入上述穴位皮下，每周1次，兩側(cè)穴位交替進(jìn)行；埋線加硫普羅寧組每天中午用硫普羅寧混懸液灌胃的同時(shí)輔以每周穴位埋線1次，連續(xù)治療4周。

1.5觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.5.1觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、皮毛色澤度、行為、大便、體重、死亡情況；每周稱重1次，根據(jù)體重變化調(diào)整藥物劑量。

1.5.2檢測(cè)血清生化指標(biāo)，治療4周末大鼠禁食12小時(shí)(不禁水)，次日空腹剖殺，腹主動(dòng)脈取血并分離血清，測(cè)定血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β、LPS含量(嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作)。

1.5.3檢測(cè)肝指數(shù)，采血后，迅速摘取大鼠肝臟，稱重，計(jì)算肝指數(shù)[肝指數(shù) = 肝臟濕質(zhì)量(g)/動(dòng)物體質(zhì)量(g)×100%]。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1一般狀態(tài)

在造模過(guò)程中，初期灌胃時(shí)大鼠安靜，無(wú)劇烈抵抗，后期灌胃大鼠抵抗劇烈。空白組大鼠，皮毛緊實(shí)光滑，食量大，動(dòng)作敏捷，精神狀態(tài)好，睡眠佳，大便呈顆粒狀，未出現(xiàn)死亡。ALD模型組大鼠，皮色暗淡，脫毛嚴(yán)重，精神萎靡，暴躁易激惹，食欲不佳，大便粘滯不成形，夜間打斗撕咬，死亡情況嚴(yán)重。造模期間60只ALD模型組大鼠死亡28只。大鼠死亡原因：(1)極少數(shù)灌胃不當(dāng)，食管捅破。(2)反復(fù)灌胃后，大鼠反抗劇烈，酒精吸入肺部所致。(3)酒精灌胃后，大鼠夜間相互撕咬所致。(4)急性酒精中毒死亡。

2.2穴位埋線大鼠肝指數(shù)(表1)

表1　各組大鼠肝臟指數(shù)比較±s)

表1顯示，模型組大鼠的肝指數(shù)最高，埋線加硫普羅寧組大鼠肝指數(shù)最低，但各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.3穴位埋線大鼠血清ACT和AST值(表2)

表2　各組大鼠血清AST、ALT水平比較

注：△與空白組比較P<0.01；#與模型組比較P<0.05，##P<0.01.

表2顯示，模型組大鼠血清AST、ALT水平顯著升高，與空白組比較有顯著性差異(P<0.01)，說(shuō)明造模成功。與模型組比較，各治療組血清AST、ALT水平顯著降低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，埋線加硫普羅寧組血清ALT水平表現(xiàn)更明顯，差異具有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.4穴位埋線大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平(表3)

表3　各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平比較

注：△與空白組比較P<0.01；#與模型組比較P<0.05，##P<0.01；*與硫普羅寧組比較P<0.05，**P<0.01.

表3顯示，與空白組比較，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、LPS水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。各治療組血清TNF-α、IL-1β、LPS水平與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。穴位埋線組TNF-α、IL-1β、LPS水平，埋線加硫普羅寧組TNF-α、LPS水平與模型組比較差異有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與硫普羅寧組比較，穴位埋線組LPS水平有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，埋線加硫普羅寧組LPS水平有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3討論

本研究結(jié)果顯示，豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線可通過(guò)降低大鼠血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及內(nèi)毒素水平，起到治療酒精性肝病的目的。

中醫(yī)雖尚無(wú)一個(gè)獨(dú)立的病名與酒精性肝病相對(duì)應(yīng)，但歷代中醫(yī)文獻(xiàn)中對(duì)酒的特性、長(zhǎng)期大量飲酒對(duì)機(jī)體的危害、尤其是對(duì)肝臟的損害已有較全面的認(rèn)識(shí)，根據(jù)臨床特點(diǎn)、發(fā)病過(guò)程將其概括在“脅痛”、“傷酒”、“酒風(fēng)”、“酒勞”、“酒疸”、“酒癖”、“酒臌”、“酒脹”等范疇[5]?！吨T病源候論》曰“酒者，水谷之精氣也，其氣剽悍而有大毒，入胃則酒脹氣逆，內(nèi)熏于肝膽，故氣肝浮膽橫?！秉S坤載《四圣心源》：“酒釀之性，濕熱之媒。其濡潤(rùn)之質(zhì)，入于臟腑則生下濕。辛烈之氣，騰于經(jīng)絡(luò)則生上熱。”指出酒乃辛熱有毒之品，過(guò)飲酒毒首犯肝膽，濕熱蘊(yùn)結(jié)體內(nèi)，進(jìn)而損傷脾胃腎，日久氣、血、痰、濕、瘀、熱相互搏結(jié)，結(jié)為積塊，滯于脅下而成硬化之變。故臨床治療中多采取活血化瘀、清熱利濕、健脾益氣、理氣止痛等治療方法。本實(shí)驗(yàn)選用豐隆(雙)、三陰交(雙)穴位埋線治療酒精性肝病。豐隆為足陽(yáng)明胃經(jīng)絡(luò)穴，可宣通脾胃二經(jīng)之氣機(jī)，為祛痰之要穴，具有化濕除痰，和胃醒脾之功效。三陰交為足太陰脾經(jīng)穴位，又為肝脾腎三經(jīng)交匯穴，具有健脾疏肝補(bǔ)腎作用。兩穴合用，起到化痰利濕，活血化瘀，疏肝健脾的功效[6]。

穴位埋線作為針灸的改良和延伸，是一種新興的穴位刺激療法，集針刺、埋針、刺血多種療法于一體，發(fā)揮多種刺激效應(yīng)，具有刺激性強(qiáng)，療效持久，且無(wú)明顯不良反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。周曉玲、謝勝、侯秋科[7]研究表明取豐隆、足三里、太沖、三陰交，穴位埋線治療非酒精性脂肪性肝病大鼠，治療組大鼠血清ALT、AST水平有下降趨勢(shì)，與模型組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。龔秀杭[8-9]取中脘、氣海、天樞(雙)、脾俞(雙)采用穴位埋線治療非酒精性脂肪肝，結(jié)果顯示患者血清ALT、AST、TG、CHOL、TNF-α水平明顯降低，認(rèn)為穴位埋線對(duì)非酒精性脂肪肝具有較好的治療作用。

當(dāng)慢性肝損傷嚴(yán)重時(shí)，肝細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶釋放入血，使得血清中ALT、AST水平升高，故ALT、AST是反映肝功的敏感指標(biāo)，且其含量與肝損傷程度呈正相關(guān)。正常情況下，腸道細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素(LPS)不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生損害，但長(zhǎng)期過(guò)量飲酒所致的腸道菌群失調(diào)和腸粘膜屏障功能障礙，使得大量LPS吸收入血液循環(huán)。Kupffer細(xì)胞(KC)是肝內(nèi)定居的巨噬細(xì)胞，能夠清除LPS(吞噬功能)，當(dāng)LPS超過(guò)肝臟的清除能力時(shí)，KC又可被LPS激活(分泌功能)，釋放大量炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1β等，誘導(dǎo)肝細(xì)胞壞死、凋亡，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；TNF-α又可促進(jìn)其他炎癥介質(zhì)的釋放，加重肝細(xì)胞的損傷，此時(shí)肝臟是LPS損害的主要靶器官[10-12]。TNF-α及內(nèi)毒素在酒精性肝病的發(fā)病中具有重要作用[13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，穴位埋線治療后大鼠血清AST、ALT、TNF-α、IL-1β及內(nèi)毒素水平顯著下降，顯示穴位埋線在一定程度上可保護(hù)肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，防止脂質(zhì)過(guò)氧化而造成的肝細(xì)胞損傷，達(dá)到保肝降酶的作用；能通過(guò)降低TNF-α、IL-1β的水平，減少肝細(xì)胞的凋亡和壞死；埋線加硫普羅寧組降低模型大鼠血漿內(nèi)毒素水平療效尤其明顯，提示穴位埋線聯(lián)合硫普羅寧能夠通過(guò)降低內(nèi)毒素水平，減弱內(nèi)毒素對(duì)肝細(xì)胞的損害。

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收稿日期2015-01-18

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.04.011

中圖分類號(hào)R245.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

李瑞雪(1989-)，女，漢族，山東籍，青海大學(xué)2013級(jí)研究生