·科研論著·

冷熱護(hù)理刺激對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞克隆形成能力的影響及機(jī)制的初步研究

羅羽，王仙園

摘要：[目的]研究冷熱護(hù)理刺激對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞克隆形成能力的影響及機(jī)制，以期探索冷熱護(hù)理的新作用機(jī)制，促進(jìn)臨床護(hù)理水平的提高。[方法] HeLa細(xì)胞按常規(guī)用DMEM 高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)；按6孔板每孔100個(gè)～300個(gè)細(xì)胞的濃度接種并在不同培養(yǎng)溫度情況下進(jìn)行細(xì)胞克隆試驗(yàn)；提取在不同溫度環(huán)境下生長(zhǎng)的同批次HeLa細(xì)胞的總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)后獲得cDNA，以此為模板，實(shí)施熒光定量分析不同溫度環(huán)境下pan-QKI mRNA的表達(dá)水平。[結(jié)果]較高的環(huán)境溫度能增強(qiáng)HeLa細(xì)胞的克隆形成能力，抑制pan-QKI mRNA表達(dá)；但較低的環(huán)境溫度則抑制了該細(xì)胞的克隆形成，同時(shí)，pan-QKI mRNA表達(dá)水平顯著增高。[結(jié)論]溫度干預(yù)能對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞的克隆能力產(chǎn)生影響， pan-QKI 在不同溫度環(huán)境中的表達(dá)變化可能是導(dǎo)致HeLa細(xì)胞克隆形成能力差別的重要原因，溫度干預(yù)的護(hù)理效用和機(jī)制值得深入探究。

關(guān)鍵詞：冷熱護(hù)理；宮頸癌；HeLa細(xì)胞；細(xì)胞克?。蛔o(hù)理干預(yù)

中圖分類號(hào)：R471

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目，編號(hào)：31271239；國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展“973”計(jì)劃資助項(xiàng)目，編號(hào)：2009CB941601。

作者簡(jiǎn)介：羅羽，教授，博士，單位：400038，中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)護(hù)理學(xué)院；王仙園(

收稿日期：(2014-05-15；修回日期：2014-12-13)

Preliminary study on influence of hot and cold care stimulus on forming ability of human cervical cancer HeLa cells clone and its mechanism

Luo Yu，Wang Xianyuan(Nursing College of Third Military Medical University of PLA，Chongqing 400038 China)

AbstractObjective：To probe into the influence of hot and cold care stimulus on forming ability of human cervical cancer HeLa cells clone and its mechanism，so as to explore the new action mechanism of hot and cold care promote the improvement of clinical nursing level.Methods：HeLa cells were cultured by routine use of DMEM high glucose medium.According the concentration of 100~300 cells per hole，they were inoculated in 6 hole plate，cell cloning experiments were carried out in different culture temperature circumstances；the total RNA of the same batch of HeLa cells was extracted which grew in different temperatures，the cDNA obtained in the reverse transcription reaction was taken as a template，the fluorescent quantitative analysis was implemented for expression level of pan-QKI mRNA under different temperature environment.Results：The high ambient temperature can enhance the colony formation ability of HeLa cells and inhibit the pan-QKI mRNA expression；but the lower ambient temperature inhibited the cell clone formation，at the same time，the expression level of mRNA was significantly increased in pan-QKI.Conclusion：Temperature intervention can affect cloning ability of human cervical cancer HeLa cells.The changes of pan-QKI expression in different temperature environments may be an important reason of differences of HeLa cell clone forming ability.The efficacy and mechanism of temperature intervention are worth for in-depth inquiry.

Key wordshot and cold care；cervical cancer；HeLa cell；cell clone；nursing intervention

現(xiàn)代分子醫(yī)學(xué)證實(shí)，宮頸癌是女性在其個(gè)人獨(dú)特基因型基礎(chǔ)上、在不同社會(huì)文化環(huán)境等內(nèi)外因素的共同作用下發(fā)生的子宮頸管或陰道部位細(xì)胞的惡性增生，每位宮頸癌病人具有的基因表達(dá)失控狀態(tài)可能不盡相同，因而其發(fā)病具有一定的基因獨(dú)特性。隨著對(duì)宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的分子醫(yī)學(xué)機(jī)制研究的不斷深入，以及人類實(shí)施基因改造和基因干預(yù)手段的日漸成熟，依據(jù)最新的基因?qū)W發(fā)現(xiàn)和新技術(shù)為宮頸癌病人及其高危人群量身設(shè)計(jì)出特異性基因治療方案和策略應(yīng)該在不久的未來(lái)實(shí)現(xiàn)，基因治療和基于基因治療理論的護(hù)理干預(yù)即將成為防治宮頸癌的最有效手段。許多傳統(tǒng)的護(hù)理干預(yù)手段在腫瘤護(hù)理中的作用也有必要利用新技術(shù)和新手段進(jìn)行探索，以利于發(fā)現(xiàn)其可能在基因調(diào)控中的獨(dú)特作用，利于基因護(hù)理學(xué)的發(fā)展。冷熱護(hù)理是目前臨床護(hù)理的常見手段，在臨床上的運(yùn)用和研究出發(fā)點(diǎn)大多局限在對(duì)冷和熱產(chǎn)生的生理效用方面[1]。護(hù)理領(lǐng)域缺乏對(duì)冷熱護(hù)理干預(yù)或刺激的分子層面的深層次研究。2013年10月，美國(guó)科學(xué)院院刊發(fā)表一篇關(guān)于飼養(yǎng)環(huán)境影響小鼠癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的文章，提出溫度刺激可能是影響腫瘤細(xì)胞增殖的主要因素[2]。本課題組據(jù)此設(shè)計(jì)和開展了冷熱護(hù)理刺激對(duì)人宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的系列研究，期望為傳統(tǒng)護(hù)理干預(yù)的護(hù)理效用和機(jī)制研究增加新的證據(jù)，也期望挖掘出古老的冷熱護(hù)理干預(yù)的新功效，為臨床腫瘤護(hù)理新干預(yù)措施的制定和開發(fā)提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)用人宮頸癌HeLa細(xì)胞株和經(jīng)miR-574-5p抑制的慢病毒感染后篩選出的miR-574-5p穩(wěn)定低表達(dá)HeLa株均為細(xì)胞應(yīng)激國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(廈門大學(xué))保存。

1.2主要材料與設(shè)備HeLa細(xì)胞培養(yǎng)采用添加了10%胎牛血清和1%青鏈霉素雙抗的GIBCO生產(chǎn)的DMEM完全培養(yǎng)基；胎牛血清由北京全式金生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；青霉素、鏈霉素以及消化細(xì)胞使用的胰酶均購(gòu)自生工生物工程(上海)股份有限公司；PBS 磷酸鹽緩沖液購(gòu)自北京市中杉金橋生物技術(shù)有限公司，按說(shuō)明制備后高壓蒸汽滅菌后使用；細(xì)胞培養(yǎng)所用的二氧化碳培養(yǎng)箱為Thermo ElectronForma的Series Ⅱ型產(chǎn)品；拍攝細(xì)胞所用相機(jī)為日本尼康株式會(huì)社產(chǎn)品；超凈工作臺(tái)由蘇州凈化設(shè)備公司生產(chǎn)，型號(hào)為SterilGARD?Advance；RT-PCR試劑盒購(gòu)自TAKARA公司，PrimescriptTMRT reagent kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒為廣東東盛生物科技有限公司的SYBR?Green qPCR Mix(High Rox+)；微量移液器為德國(guó) Eppendorf 產(chǎn)品；電動(dòng)移液管助吸器由德國(guó)Brand公司生產(chǎn)，型號(hào)為ACCU-jet?Pro。

1.3細(xì)胞克隆形成能力檢測(cè)取生長(zhǎng)狀態(tài)良好、處對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa細(xì)胞，常規(guī)胰酶消化后，用標(biāo)準(zhǔn)血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，確保6孔板中每個(gè)孔內(nèi)接種細(xì)胞數(shù)量100個(gè)～300個(gè)。分別置于含5%二氧化碳的不同孵育溫度的培養(yǎng)箱中。每天觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，2d～3 d為細(xì)胞更換DMEM完全培養(yǎng)基1次，克隆培養(yǎng)時(shí)間6 d。到達(dá)預(yù)期孵育時(shí)相點(diǎn)終止培養(yǎng)，用微量負(fù)壓泵吸去培養(yǎng)基，PBS清洗細(xì)胞1次或2次后，用100%甲醇在4 ℃固定細(xì)胞20 min；PBS清洗1次或2次后，以0.2%結(jié)晶紫染液室溫染色30 min。染色結(jié)束后，PBS清洗3次～5次，室溫晾干、拍照。

1.4細(xì)胞總RNA提取胰酶消化細(xì)胞后，按試劑盒指示用Trizol進(jìn)行HeLa細(xì)胞總RNA提取并測(cè)定濃度，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5cDNA制備按照TAKARA PrimescriptTMRT reagent kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)說(shuō)明書在Bio-RAD PCR擴(kuò)增儀內(nèi)對(duì)已經(jīng)抽提出的總RNA實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)體系為10 μL。

1.6實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定按廣東東盛科技SYBR?Green qPCR Mix(High Rox+)說(shuō)明書構(gòu)建總體積為10 μL的反應(yīng)體系，以95 ℃預(yù)熱1 min后，95 ℃ 10 s、58 ℃ 15 s、72 ℃ 20 s(收集熒光)，重復(fù)40個(gè)循環(huán)反應(yīng)條件進(jìn)行real-time qPCR反應(yīng)。樣品以18S rRNA為內(nèi)參，細(xì)胞設(shè)置3個(gè)獨(dú)立平行樣，每個(gè)獨(dú)立平行樣進(jìn)行4次重復(fù)測(cè)定。檢測(cè)樣本的CT值在測(cè)定結(jié)束后讀取，具體數(shù)據(jù)采用2 - △△ CT法進(jìn)行分析處理。人pan-QKI real-time qPCR引物序列，F(xiàn)orward：CACTGTGGAAGATGCTCAGAA；Reverse：CATCAGCTGCATCTTCTTCAG。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)分析使用GraphPad Prism5.00軟件，采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并制圖。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.138 ℃溫度環(huán)境顯著增強(qiáng)了HeLa細(xì)胞的克隆形成能力本研究發(fā)現(xiàn)，38 ℃的孵育溫度環(huán)境能較常規(guī)37 ℃孵育顯著增強(qiáng)HeLa細(xì)胞的克隆形成能力，在miR-574-5p正常表達(dá)組和抑制組的變化趨勢(shì)一致。見圖1。圖中第1行、第3行為不同溫度下miR-574-5P正常表達(dá)的Hela細(xì)胞，第2行、第4行為不同溫度下miR-574-5P表達(dá)抑制的Hela細(xì)胞。

圖1　38 ℃與37 ℃溫度環(huán)境下HeLa細(xì)胞的克隆形成能力比較

2.235 ℃溫度環(huán)境輕度降低HeLa細(xì)胞的克隆形成能力比較35 ℃和37 ℃孵育時(shí)HeLa細(xì)胞克隆形成情況，發(fā)現(xiàn)在這兩個(gè)溫度環(huán)境下細(xì)胞克隆形成相差不大，35 ℃孵育似能輕微降低miR-574-5p抑制組細(xì)胞克隆形成。見圖2。圖中第1行、第3行為不同溫度下miR-574-5P正常表達(dá)的Hela細(xì)胞，第2行、第4行為不同溫度下miR-574-5P表達(dá)抑制的Hela細(xì)胞。

圖2　35 ℃與37 ℃溫度環(huán)境下HeLa細(xì)胞的克隆形成能力比較

2.333 ℃溫度環(huán)境顯著降低HeLa細(xì)胞的克隆形成能力進(jìn)一步觀察該細(xì)胞在更低的33 ℃與常規(guī)37 ℃孵育克隆形成情況，結(jié)果顯示，33 ℃孵育能明顯降低HeLa細(xì)胞的克隆形成能力，且miR-574-5p正常表達(dá)組和抑制組克隆能力下降趨勢(shì)一致。見圖3。圖中第1行、第3行為不同溫度下miR-574-5P正常表達(dá)的Hela細(xì)胞，第2行、第4行為不同溫度下miR-574-5P表達(dá)抑制的Hela細(xì)胞。

圖3　33 ℃與37 ℃溫度環(huán)境下HeLa細(xì)胞的克隆形成能力比較

2.4溫度干預(yù)能影響HeLa細(xì)胞pan-QKI的mRNA表達(dá)為探究溫度干預(yù)和刺激引起HeLa細(xì)胞克隆形成能力的機(jī)制，分別提取了在上述不同溫度環(huán)境生長(zhǎng)的HeLa細(xì)胞總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后，進(jìn)行了pan-QKI mRNA表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。研究顯示，不同溫度孵育組HeLa細(xì)胞pan-QKI mRNA的表達(dá)出現(xiàn)明顯變化。與常溫37 ℃孵育組相比，38 ℃孵育組細(xì)胞pan-QKI mRNA表達(dá)出現(xiàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的輕度下降，降幅約10%，而35 ℃、33 ℃孵育組細(xì)胞pan-QKI mRNA的表達(dá)與37 ℃組相比均呈現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的上升，且隨著溫度降低，其細(xì)胞pan-QKI mRNA表達(dá)增高程度更大。見圖4。

圖4　不同環(huán)境溫度下HeLa細(xì)胞pan-QKI mRNA表達(dá)

3討論

冷熱療法(cold and heat therapy)是指利用冷、熱刺激引起的神經(jīng)傳導(dǎo)，導(dǎo)致皮膚和內(nèi)臟器官血管收縮和舒張，改變?nèi)梭w循環(huán)和新陳代謝水平，最終達(dá)到治療、護(hù)理目的的一種常見方法[1]。目前臨床護(hù)理中除了常將其運(yùn)用于病人的降溫、保溫，有目的地使外周血管收縮或擴(kuò)張以達(dá)到預(yù)期目的外，也有不少關(guān)于將冷熱護(hù)理運(yùn)用在預(yù)防乳腺癌術(shù)后化療引起的化學(xué)性靜脈炎[3]、會(huì)陰部側(cè)切的護(hù)理中[4]，甚至在外科膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后的康復(fù)中冷熱療法能起到明顯作用[5]的報(bào)道。這些冷熱護(hù)理的臨床應(yīng)用雖然使用部位不一，但多是基于冷熱護(hù)理改變局部血液循環(huán)和新陳代謝的生理機(jī)制而開展的臨床應(yīng)用。冷和熱作為一種特殊刺激，是否能如同滲透壓改變、缺氧刺激、輻射暴露等一樣[6-10]，刺激機(jī)體產(chǎn)生其他更細(xì)微的分子和基因?qū)用娴膽?yīng)急反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)機(jī)體的代謝和細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生影響？若能獲得明確證據(jù)，則冷熱護(hù)理的臨床作用可以據(jù)此得到更好的認(rèn)識(shí)，冷熱護(hù)理的臨床應(yīng)用空間也將得到擴(kuò)增，而護(hù)理界對(duì)常規(guī)護(hù)理干預(yù)的認(rèn)識(shí)將會(huì)得以豐富。

眾所周知，開展臨床護(hù)理干預(yù)研究的前提是獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室研究實(shí)證，結(jié)合溫度刺激的相關(guān)文獻(xiàn)，本研究設(shè)計(jì)了3種不同的環(huán)境溫度刺激與最接近人體的常規(guī)培養(yǎng)溫度37 ℃，分別進(jìn)行了不同的環(huán)境溫度刺激對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞克隆形成能力的對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)略高于人體正常體溫的38 ℃孵育溫度刺激明顯增強(qiáng)了HeLa細(xì)胞的克隆形成能力，而明顯低于體溫的溫度刺激，包括在35 ℃和33 ℃的溫度刺激下細(xì)胞的克隆形成能力均明顯變?nèi)?，這種形態(tài)學(xué)上的證據(jù)顯示，對(duì)于HeLa細(xì)胞而言，較正常人體更低的溫度環(huán)境不利于腫瘤的生長(zhǎng)。近期，美國(guó)科學(xué)院院刊(Proc Natl Acad Sci USA)在2013年10月也報(bào)道，小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境溫度能改變小鼠癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散，進(jìn)而對(duì)其腫瘤的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生影響，在比常溫更高的飼養(yǎng)環(huán)境下，如30 ℃～31 ℃的生長(zhǎng)環(huán)境溫度下活體小鼠的癌癥更容易得到控制，學(xué)者們還發(fā)現(xiàn)小鼠癌細(xì)胞在偏冷的環(huán)境更容易生長(zhǎng)[2]。該研究也從一個(gè)側(cè)面證明了改變腫瘤生長(zhǎng)的環(huán)境溫度可能是抑制腫瘤生長(zhǎng)的一種有效干預(yù)策略，可供臨床參考。當(dāng)然，從體外實(shí)驗(yàn)細(xì)胞層面的研究到體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證，再到臨床病人的實(shí)際應(yīng)用，需要進(jìn)行的研究還很多，需要更系統(tǒng)和更深入的研究。

關(guān)于溫度刺激為何能引起人宮頸癌HeLa細(xì)胞的克隆能力變化，本研究也進(jìn)行了初步探究。Quaking信號(hào)蛋白(QKI)屬信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與RNA活化(signal transduction and activation of RNA，STAR)家族成員，是一類特殊的、集合了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和RNA激活功能為一體的蛋白質(zhì)[11]。最新生物信息學(xué)分析顯示，QKI可通過(guò)與多種mRNA上的Quaking 反應(yīng)原件(quaking response elements，QRE)的相互作用，調(diào)控包括多種原癌基因、細(xì)胞周期蛋白在內(nèi)的超過(guò)1 400種mRNAs[12]，QKI蛋白借助這些機(jī)制調(diào)控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸已經(jīng)獲得證實(shí)，如QKI就已被發(fā)現(xiàn)是結(jié)直腸癌細(xì)胞的重要抑癌蛋白[13]。本研究也顯示，在38 ℃高于體溫的溫度環(huán)境下，HeLa細(xì)胞中pan-QKI mRNA的表達(dá)水平出現(xiàn)降低，而在35 ℃和33 ℃的較低溫度環(huán)境刺激下，該細(xì)胞的pan-QKI mRNA表達(dá)水平卻出現(xiàn)明顯變化，顯著高于接近人體溫度的37 ℃時(shí)的表達(dá)。這一結(jié)果在證明了QKI在人宮頸癌中也同樣具有抑癌作用的同時(shí)，還證實(shí)了溫度刺激能通過(guò)影響一些RNA結(jié)合蛋白的表達(dá)，影響宮頸癌腫瘤細(xì)胞的克隆形成和生長(zhǎng)。這一研究結(jié)果對(duì)開發(fā)抑制腫瘤形成和抑制的策略具有積極作用。本研究還提示，溫度護(hù)理干預(yù)可能通過(guò)復(fù)雜的機(jī)制起到超出護(hù)理界既往確定的更多重要作用，值得護(hù)理同行們深究。

4小結(jié)

冷熱護(hù)理是護(hù)理專業(yè)基礎(chǔ)課程《基礎(chǔ)護(hù)理學(xué)》教材中的重要內(nèi)容，臨床護(hù)理中也常常使用冷熱療法對(duì)病人進(jìn)行癥狀控制，但冷和熱在臨床護(hù)理中運(yùn)用時(shí)導(dǎo)致的影響既往多局限于對(duì)人體生理學(xué)影響層面，護(hù)理領(lǐng)域缺乏分子層面的深層次研究。本研究利用分子生物學(xué)和分子醫(yī)學(xué)的一些研究手段，進(jìn)行了溫度對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成能力和機(jī)制方面的初步探索，獲得了系列明證。這充分證明對(duì)于一些傳統(tǒng)護(hù)理干預(yù)的作用機(jī)制和作用有必要對(duì)其進(jìn)行新的探索；另一方面，在護(hù)理臨床研究中也需要護(hù)理研究者充分利用先進(jìn)的研究方法開展研究，不斷借鑒其他相關(guān)學(xué)科的研究手段和研究思路，更好地促進(jìn)護(hù)理研究工作的開展，促進(jìn)護(hù)理學(xué)科的進(jìn)步。

參考文獻(xiàn)：

[1]李曉寒,尚少梅.基礎(chǔ)護(hù)理學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:250.

[2]Kokolus KM,Capitano ML，Lee CT,etal.Baseline tumor growth and immune control in laboratory mice are significantly influenced by subthermoneutral housing temperature[J].Proc Natl Acad Sci USA,2013,110(50):20176-20181.

[3]桂詩(shī)敏.冷熱療法預(yù)防化學(xué)性靜脈炎的效果探討[J].中醫(yī)藥指南，2010,8(33):232-233.

[4]何麗麗,葉福蓮,李蘭花.會(huì)陰側(cè)切術(shù)后應(yīng)用冷熱療法的效果觀察及護(hù)理[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2012,12:124-125.

[5]劉東哲,琚楠楠.冷熱療法用于膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后康復(fù)的療效觀察[J].全科護(hù)理,2013,11(1B):111-112.

[6]Keller A,Leidinger P,Borries A,etal.miRNAs in lung cancer-studing complex finger prints in patient’s blood cells by microassay experiments[J].BMC Cancer,2009,9:353-358.

[7]Ranad AR，Cherba D,Sridhar S,etal.MicroRNA 92a-2:A biomarker predictive for chemoresistance and prognostic for survival in patients with small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2010,5:1273-1278.

[8]Foss K,Sima C,Ugolini D,etal.miR-1254 and miR -574-5p:Serum-based microRNA biomarkers for early-stage non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2011,6:482-488.

[9]Ali S，Almhanna K,Chen W,etal. Differentially expressed miRNA in plasma may provide a molecular signature for aggressive pancreatic cancer[J].Am J Transl Res,2010,3:28-47.

[10]Wyman SK,Parkin RK,Mitchell PS，etal.Repertoire of microRNAs in epithelial ovarian cancer as determined by next generation sequencing of small RNA cDNA libraries[J].PloS One,2009,4:e5311.

[11]Chenard CA,Richard S.New implications for the QUAKING RNA binding protein in human disease[J].J Neurosci Res,2008,86:233-242.

[12]徐東,楊小龍.Wnt-1或Wnt-beta-catinin信號(hào)通路在惡性腫瘤中研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代診斷與治療，2010,21(4):214-217.

[13]Yang G，F(xiàn)u H，Zhang J，etal.RNA-binding protein quaking，a critical regulator of colon epithelial differentiation and a suppressor of colon cancer[J].Gastroenterology，2012,38:231-240.

(本文編輯李亞琴)