肺癌組織中SPARC與CD105表達變化及意義

鄭英娟，張志華，張秀瓏，湯建華，張志林，馮平

(河北北方學院附屬第一醫(yī)院，河北張家口075000)

摘要：目的觀察富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)與CD105在肺癌組織中的表達變化，并探討其臨床意義。方法 選擇71例肺癌組織、30例癌旁正常肺組織，用免疫組化法檢測組織中SPARC陽性表達率，采用CD105單克隆抗體標記血管內(nèi)皮細胞，計數(shù)微血管密度(MVD)。結(jié)果 SPARC在肺癌組織中的陽性表達率高于正常肺組織，肺癌組織中CD105標記的MVD高于正常肺組織(P均<0.05)。SPARC陽性表達率、CD105標記的MVD與肺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。SPARC陽性表達的肺癌組織中MVD高于陰性表達者(P<0.05)。結(jié)論 肺癌組織中SPARC、CD105呈高表達，SPARC陽性表達的肺癌組織中MVD高；聯(lián)合檢測SPARC與CD105對判斷肺癌的性質(zhì)及預后有重要意義。

關(guān)鍵詞：肺腫瘤；富含半胱氨酸酸性分泌蛋白；CD105；新生血管生成

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.024

中圖分類號：R734.2 文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-05-02)

通信作者：張志華

新生血管生成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的基礎，腫瘤在生長過程中打破了促血管生成和抑制血管生成各因素間的平衡，以滿足其自身血供的需要。肺癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移均依賴血管生成。富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)具有抗黏附、抗增殖、抗腫瘤血管生成和調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)組成的作用。近年有學者認為，SPARC有抑制腫瘤血管生成的作用。CD105是一種主要表達于新生血管內(nèi)皮細胞的細胞黏附分子，是更具有特異性的腫瘤新生血管標志物。本研究觀察肺癌組織中SPARC及CD105表達情況，探討二者與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集本院2008～2012年收治的肺癌患者71例，均經(jīng)病理學檢查證實診斷。其中，男51例、女20例，年齡45～73歲、中位年齡59歲。按WHO(2000)肺癌分類標準組織學分級：高分化6例、中分化41例、低分化18例、未分化6例；組織病理學分類：非小細胞肺癌67例(腺癌50例、鱗狀上皮細胞癌15例、類癌1例、肉瘤樣癌1例)、小細胞癌4例；臨床分期：Ⅰ、Ⅱ期41例、Ⅲ、Ⅳ期30例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例、無轉(zhuǎn)移30例。同時收集30例相應癌旁正常肺組織(距腫瘤切緣>5 cm)作為對照組?；颊咝g(shù)前均未行放療、化療。

1.2SPARC、CD105表達檢測正常肺組織及肺癌組織標本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，用免疫組化PV6000法染色。兔抗人SPARC多克隆抗體工作濃度1∶150，鼠抗人CD105單克隆抗體為即用型抗體，嚴格按說明書操作，以PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性切片作陽性對照。每張切片隨機選擇5個視野進行觀察。SPARC陽性表達結(jié)果判定：參照文獻[1]，根據(jù)著色強度及陽性細胞百分比進行評分，兩項得分相乘后≥4分為陽性。采用CD105單克隆抗體標記血管內(nèi)皮細胞，計數(shù)微血管密度(MVD)。參照Weinder等[2]方法在低倍鏡下掃視整張切片，確定微血管最密集的5個視野，然后在400倍視野下計數(shù)所有染色的微血管，取5個視野計數(shù)結(jié)果的均數(shù)為該切片的微血管數(shù)。計數(shù)時凡呈現(xiàn)單個內(nèi)皮細胞或內(nèi)皮細胞群者只要其與鄰近的微血管、腫瘤細胞或其他結(jié)締組織分開,就作為1個微血管，但肌層較厚及管腔面積>8個紅細胞直徑的血管不計數(shù)。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料采用χ2檢驗。MVD以中位數(shù)[M(P25,P75) ]表示，采用Mann-WhitneyU檢驗及Kruskal-WallisH檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1正常肺組織及肺癌組織中SPARC、CD105表達比較SPARC主要表達于癌細胞周圍的間質(zhì)纖維細胞胞質(zhì)中，少數(shù)表達于胞核，在癌細胞及血管內(nèi)皮細胞偶見陽性表達，陽性表現(xiàn)為棕黃色彌漫狀或顆粒狀。SPARC在肺癌組織、正常肺組織中的陽性表達率分別為56.34%(40/71)、20%(6/30)，二者比較，P<0.05。CD105主要表達于腫瘤血管內(nèi)皮細胞的細胞膜或細胞質(zhì)，呈棕黃色，排列多不規(guī)則，較少形成明顯管腔。在大血管不表達，在正常組織中表達極弱或不表達。在肺癌組織、正常組織中MVD分別為11.20(7.80，15.00)個/視野、0.30(0，0.80)個/視野，二者比較，P<0.05。

2.2肺癌組織中SPARC陽性表達、CD105表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系結(jié)果見表1。

表1　 肺癌組織中SPARC陽性表達、CD105表達

2.3肺癌組織中SPARC陽性表達與MVD水平的關(guān)系SPARC陽性表達者MVD中位數(shù)為9.60個/視野，陰性表達者為12.80個/視野，二者比較，P<0.05。

3討論

腫瘤生長需豐富的血液供應，新生血管生成可為腫瘤提供氧氣、營養(yǎng)、促進其生長、轉(zhuǎn)移的細胞因子及轉(zhuǎn)移通道，腫瘤體積迅速增大，發(fā)生擴散和轉(zhuǎn)移。肺癌如無新生血管生成來供應營養(yǎng)，腫瘤直徑1～2 mm后將不再增長，腫瘤血管的生成機制在不同腫瘤細胞、不同器官生長點可能不同。腫瘤組織MVD是目前衡量新生血管的最主要量化指標。

SPARC是一種富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，其與胚胎發(fā)育、血管生成、細胞更新、組織修復及重塑等均有密切關(guān)系。在不同組織不同微環(huán)境中，SPARC作用不同。SPARC在結(jié)直腸癌[6]、胃癌[7]、胰腺癌[8]、前列腺癌[9]、卵巢癌[10]等腫瘤組織中起抑制作用，在乳腺癌[11]、肝癌[12]等腫瘤組織中起促進作用。但SPARC在肺癌中的作用仍不明確，研究結(jié)果不盡相同。本研究結(jié)果顯示，SPARC主要表達于癌細胞周圍的間質(zhì)纖維細胞胞質(zhì)中，在臨床分期越低、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的患者中其陽性表達率越高，考慮SPARC主要表達于間質(zhì)纖維細胞中，有可能起到維持腫瘤微環(huán)境的作用，進而抑制肺癌進展。隨著肺癌臨床分期與淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移時，MVD逐漸增加，而相應的SPARC陽性表達降低，在臨床早期、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移時，SPARC表達陽性時，MVD減少。提示肺癌組織中SPARC可能通過抑制新生血管生成來抑制肺癌的進展。

CD105是一種同型二聚體的膜結(jié)合糖蛋白，可選擇性表達于增殖狀態(tài)的血管中[3]。在腫瘤新生血管構(gòu)筑的研究中發(fā)現(xiàn)，CD105僅在處于增殖狀態(tài)的腫瘤組織血管內(nèi)皮細胞即新生血管內(nèi)皮細胞上強表達，而在正常組織的血管內(nèi)皮細胞上無表達或弱表達，CD105可準確反映血管內(nèi)皮細胞的增殖狀態(tài)[4]。因此CD105主要標記腫瘤新生血管。本實驗結(jié)果顯示CD105標記的微血管較幼稚，多數(shù)微血管僅由1～2個血管內(nèi)皮細胞組成，個別甚至尚未形成管腔，提示CD105標記的多是剛形成的微血管。而且有研究報道CD105有促進腫瘤血管生成的作用[5]。

綜上所述，SPARC在肺癌組織中的高表達可能有抑制腫瘤進展的作用，肺癌組織中SPARC陽性表達者MVD低，聯(lián)合檢測SPARC與CD105對判斷肺癌的性質(zhì)及預后有重要意義。

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