肝癌組織中NF-κBp65的表達(dá)變化及意義

陳增銀1,趙業(yè)民1,商和振1,史光軍2

(1青島市城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院,山東青島266300；2青島市市立醫(yī)院)

摘要：目的觀察核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κBp65在肝癌患者癌組織中的表達(dá)變化，并探討其意義。方法收集經(jīng)手術(shù)切除的肝癌組織、癌旁組織及正常肝組織，采用免疫組化法檢測(cè)三種組織中NF-κBp65蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 NF-κBp65蛋白在肝癌組織、癌旁組織、正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.67%、22.67%、12.00%，三組間兩兩比較，P均<0.05。HBsAg陽(yáng)性與陰性肝癌組織中NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)率分別為64.44%、26.67%，二者比較，P<0.05。NF-κBp65蛋白陽(yáng)性表達(dá)與肝癌患者病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)。NF-κBp65陰性表達(dá)的肝癌患者生存時(shí)間分布好于NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)者,但兩者生存率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 NF-κBp65在肝癌患者癌組織中表達(dá)明顯升高，且HBsAg陽(yáng)性肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于HBsAg陰性肝癌組織, NF-κBp65可能參與了肝癌的發(fā)生、發(fā)展

關(guān)鍵詞：肝腫瘤；肝癌；核轉(zhuǎn)錄因子；核轉(zhuǎn)錄因子-κBp65

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.45.003

中圖分類號(hào)：R735.7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

基金項(xiàng)目：青島市衛(wèi)生局課題(2007Y004)。

作者簡(jiǎn)介：第一陳增銀(1981-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要研究方向?yàn)楦伟┑呐R床診治。E-mail：chzy8168@sina.com

作者簡(jiǎn)介：通信史光軍(1966-)，男，主任醫(yī)師，博士，主要研究方向?yàn)楦伟┑呐R床診治及細(xì)胞移植治療肝癌。E-mail：sgjzp@hotmail.com

收稿日期：(2015-08-15)

Expression changes of NF-κBp65 in hepatocellular carcinoma tissues

and its clinical significance

CHENZeng-yin1, ZHAO Ye-min, SHANG He-zhen, SHI Guang-jun

(1QingdaoChengyangPeople'sHospital,Qingdao266300,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression changes of nuclear transcription factor (NF)-κBp65 in the hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and to explore its clinical significance. Methods The expression of NF-κBp65 protein was detected by immunohistochemistry in the resected HCC tissues, adjacent tissues and normal liver tissues through surgery. ResultsThe positive expression rates of NF-κBp65 protein in the HCC tissues, adjacent tissues and normal tissues were 60.67%, 22.67% and 12.00%, respectively. There were significant differences between each two groups (all P<0.05). The positive rates of NF-κBp65 in HCC tissues with positive or negative HBsAg were 64.44% and 26.67%, and the difference was statistically significant (P<0.05). The positive expression of NF-κBp65 protein was related with pathological grade and lymph node metastasis (all P<0.05). The survival time distribution of NF-κBp65 negative group was better than that of the NF-κBp65 positive group, but the difference was not significant (P>0.05). ConclusionsThe expression of NF-κBp65 was increased significantly in the carcinoma tissues of HCC patients, and the positive expression rate is high in HBV positive cancer tissues. NF-κBp65 may be involved in the occurrence and development of liver cancer.

Key words: liver neoplasms; liver carcinoma; nuclear transcription factor-κBp65

肝細(xì)胞性肝癌 (HCC)是一種病死率較高的惡性腫瘤，該病的發(fā)生、發(fā)展是多基因作用、多因素影響、多個(gè)階段遞進(jìn)形成的一種生物學(xué)過(guò)程。我國(guó)乙型肝炎病毒 (HBV)感染是發(fā)生HCC的主要原因。核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB是一種核蛋白因子，廣泛存于身體的多種細(xì)胞中,其參與多個(gè)生理、病理的基因調(diào)控過(guò)程，如身體的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞分裂、增殖及凋亡過(guò)程。該因子在腫瘤產(chǎn)生、增殖及轉(zhuǎn)移過(guò)程中有重要作用，NF-κB活化狀態(tài)可促進(jìn)瘤細(xì)胞增殖、降低瘤細(xì)胞凋亡率、提升腫瘤組織毛細(xì)血管的生成并增強(qiáng)對(duì)瘤細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力[1]。2010年1月～2013年12月，我們檢測(cè)了肝癌患者癌組織中NF-κBp65表達(dá)情況,探討其在HCC發(fā)生、增殖、轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)過(guò)程中的作用。

1材料與方法

1.1材料收集2010～2013年青島市市立醫(yī)院與青島市城陽(yáng)區(qū)人民醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理檢查證實(shí)的肝癌組織標(biāo)本150份(肝癌組)，患者男105例、女45例，年齡31～72歲、中位年齡52歲。其中血清HBsAg陽(yáng)性135例，HBsAg陰性15例。包膜完整55例，無(wú)包膜95例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移115例；腫瘤長(zhǎng)徑<5 cm者59例，5～10 cm者61例，>10 cm者30例。分別取相應(yīng)癌旁組織(距癌組織2 cm)150份(癌旁組)。取因非腫瘤因素行肝切除的肝組織25份為對(duì)照組，其中肝血管瘤旁肝組織20份，肝外傷肝組織5份。

1.2NF-κBp65蛋白表達(dá)檢測(cè)采用免疫組化染色，以PBS為空白對(duì)照。兔抗人NF-κBp65單克隆抗體購(gòu)自上海滬震實(shí)業(yè)有限公司,免疫組化染色SP9000 通用型SP Kit 試劑盒、即用型快捷免疫組化Maxvision檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。NF-κBp65免疫組化蛋白表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)和核膜中出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒狀反應(yīng)為陽(yáng)性。高倍鏡下計(jì)數(shù), 隨機(jī)選擇高倍視野3個(gè)，分別計(jì)數(shù)高倍視野中的100 個(gè)細(xì)胞,表達(dá)陽(yáng)性產(chǎn)物的著色強(qiáng)度以Handel分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[2]判斷:陰性表達(dá)<5%,陽(yáng)性表達(dá)≥5%。

1.3生存分析所有患者進(jìn)行嚴(yán)格門(mén)診隨訪或電話隨訪，隨訪日期截至2015年6月。采用Kaplan-Meier 法計(jì)算生存時(shí)間。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。率的比較采用χ2檢驗(yàn)?；颊呱鏁r(shí)間的比較用Log-Rank時(shí)序檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

NF-κBp65蛋白表達(dá)定位于癌旁組織、肝癌組織中的胞質(zhì), 部分胞核表達(dá)陽(yáng)性。在感染HBV、未感染HBV肝癌及癌旁組織中皆可見(jiàn)NF-κBp65蛋白陽(yáng)性表達(dá)。在135例HBsAg陽(yáng)性肝癌組織中，NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)率為64.44%，在15例HBsAg陰性肝癌組織中，NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)率為26.67%，二者比較，P<0.05(χ2=7.452)。肝癌組、癌旁組、對(duì)照組NF-κBp65的陽(yáng)性表達(dá)率分別為60.67%、22.67%、12.00%，三組比較，P<0.05(χ2=6.851)。NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)率與肝癌的病理分級(jí)、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)，高分化、擴(kuò)散能力差的瘤細(xì)胞該因子表達(dá)率低，低分化、擴(kuò)散能力強(qiáng)的瘤細(xì)胞該因子表達(dá)率高(P<0.05),NF-κBp65蛋白陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤包膜大小不相關(guān),見(jiàn)表1。

表1　 肝癌患者臨床病理參數(shù)與NF-κBp65蛋白

全組無(wú)失訪病例。NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)和陰性表達(dá)HCC患者的Kaplan-Meier生存曲線見(jiàn)圖1。NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)患者的生存曲線位于陰性表達(dá)者的曲線下方, HCC患者中NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)者生存時(shí)間分布差于NF-κBp65陰性表達(dá)者,但兩者生存率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.222)。

圖1　 不同NF-κBp65表達(dá)肝癌患者Kaplan-Meier

3討論

細(xì)胞的分化、增殖、生長(zhǎng)受各種基因表達(dá)的調(diào)控，而核轉(zhuǎn)錄因子在基因表達(dá)過(guò)程中有開(kāi)關(guān)的作用。癌基因的活化、抑癌基因的丟失、細(xì)胞凋亡的受抑對(duì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展起關(guān)鍵作用。NF-κB自1986年被發(fā)現(xiàn)以來(lái)即引起重視[3]，該因子于B淋巴細(xì)胞中首先被發(fā)現(xiàn)，其與免疫蛋白中增強(qiáng)子的結(jié)合(輕鏈基因中增強(qiáng)子的B位點(diǎn))能調(diào)控該免疫蛋白κ輕鏈基因轉(zhuǎn)錄，經(jīng)過(guò)凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)分析，提取了B淋巴細(xì)胞細(xì)胞核中能與免疫蛋白增強(qiáng)子(κ輕鏈基因的增強(qiáng)子的κB序列：GGGACTTTCC)結(jié)合的一種因子，我們稱之為NF-κB[4]。該因子是可被誘導(dǎo)的NF之一，在機(jī)體生理和病理活動(dòng)中有重要作用，該因子與κB序列的特異性結(jié)合，促進(jìn)κ輕鏈基因的表達(dá)，從而促進(jìn)免疫蛋白的表達(dá)。在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展及凋亡過(guò)程中均有核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的參與[5]。最近有學(xué)者認(rèn)為，該因子的非正?；罨c腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[6]。之所以NF-κB的非正?；罨c惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，是因該因子的氨基末端(約300多個(gè)氨基酸)與病毒癌基因v-Rel同源，其可抑制細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)細(xì)胞的存活[7]。當(dāng)部分因素使NF-κB的非正?；罨?，正常細(xì)胞的凋亡受抑制，細(xì)胞出現(xiàn)異常的克隆性增殖。此因子可啟動(dòng)cyclinD1的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)化，從而導(dǎo)致細(xì)胞增殖過(guò)度，最終出現(xiàn)細(xì)胞的惡性分化及轉(zhuǎn)變[8]。

NF-κB家族包括p65、p50、p52等，其中以p65最為常見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NF-κBp65在肝癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織, 該因子在HBV 陽(yáng)性肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于HBV陰性肝癌組織, 推測(cè)NF-κBp65可能參與了肝癌的發(fā)生,且在NF-κBp65致癌過(guò)程中HBV感染起了不可忽視的作用。HBV基因組含有四個(gè)開(kāi)放讀碼框(ORF)，謂之S、C、P和X，最小的ORF即為HBX。HBX與很多肝臟疾患相關(guān)，包括慢性活動(dòng)性肝炎、肝硬化和HCC。有研究顯示，HBX是NF-κB的激活劑，HBX啟動(dòng)刺激NF-κB對(duì)抗Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡而使肝細(xì)胞存活，而NF-κB介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的功能可被表達(dá)HBX細(xì)胞抑制[9]。在肝癌組中，不同大小腫瘤組織中NF-κB的表達(dá)并無(wú)明顯差別，但病理分級(jí)惡性程度越高，NF-κB陽(yáng)性率越高，提示NF-κB與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。另外，NF-κBp65陽(yáng)性表達(dá)HCC者的生存率低于陰性表達(dá)者, 雖經(jīng)Log-Rank 時(shí)序檢驗(yàn)該差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但HCC患者的實(shí)際生存情況還與術(shù)者的技術(shù)水平、腫瘤的發(fā)展階段、患者的一般狀況存在相關(guān)性。

總之，NF-κBp65在HCC患者癌組織中表達(dá)明顯升高，且該因子在HBV 陽(yáng)性肝癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于HBV陰性肝癌組織,NF-κBp65可能參與了肝癌的發(fā)生、發(fā)展。

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