結(jié)直腸原發(fā)彌漫大B細胞淋巴瘤細胞中HES1 mRNA表達變化及其與腫瘤預后的關系

胡冬至，田晨，胡均，柳建中

(天津醫(yī)科大學腫瘤醫(yī)院，國家腫瘤臨床醫(yī)學研究中心，天津市腫瘤防治重點實驗室，天津 300060)

摘要：目的觀察結(jié)直腸原發(fā)彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)細胞中HES1 mRNA的表達變化，并探討其與腫瘤預后的關系。方法結(jié)直腸DLBCL患者60例，術(shù)中取腫瘤組織和瘤旁正常組織，采用激光顯微切割法聯(lián)合real-time PCR法檢測HES1 mRNA。根據(jù)檢測結(jié)果將患者分為HES1高表達組和HES1低表達組，比較兩組總生存率(OS)和無復發(fā)生存率(RFS)。采用單因素分析及Cox回歸多因素分析法分析腫瘤預后相關因素。結(jié)果60例患者腫瘤細胞中HES1 mRNA表達量為0.6±0.08，瘤旁正常組織中HES1 mRNA表達量為1.2±0.10，二者相比，P<0.05。HES1高表達組OS為(53.0±1.4)個月、RFS為(28.8±1.2)個月，HES1低表達組分別為(38.6±1.3)、(20.6±1.1)個月，兩組相比，P均<0.05。單因素分析結(jié)果顯示，年齡、IPI評分、瘤體直徑、腫瘤是否突破漿膜層、LDH、HES1 mRNA表達水平是結(jié)直腸原發(fā)DLBCL的預后相關因素。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，HES1 mRNA低表達對OS和RFS有正向提示作用(HR分別為1.134、1.102，P均<0.01)。結(jié)論 結(jié)直腸原發(fā)DLBCL細胞中HES1 mRNA表達降低，HES1 mRNA低表達與腫瘤不良預后有關。

關鍵詞：彌漫大B細胞淋巴瘤；抑癌基因；HES1基因；結(jié)腸腫瘤；直腸腫瘤

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.39.002

中圖分類號：R733.4 文獻標志碼：A

基金項目：國家自然科學基金資助項目(31301161，81101870)。

作者簡介：第一胡冬至(1985-)，男，住院醫(yī)師，主要研究方向為結(jié)直腸腫瘤的診斷與治療。E-mail: tchdz@163.com

作者簡介：通信柳建中(1955-)，男，主任醫(yī)師，主要研究方向為結(jié)直腸腫瘤的診斷與治療。E-mail: liujianzhong@medmail.com.cn

收稿日期：(2015-09-10)

Expression changes of HES1 mRNA in primary colorectal diffuse large

B-cell lymphoma and its relationship with the prognosis

HUDong-zhi,TIANChen,HUJun,LIUJian-zhong

(TianjinMedicalUniversityInstituteandHospital,NationalClinicalResearchCenterForCancer,

TianjinKeyLaboratoryofCancerPreventionandTherapy,Tianjin300060,China)

Abstract:Objective To observe the expression changes of HES1 mRNA in primary colorectal diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and its relationship with the prognosis. MethodsThe samples of 60 newly diagnosed primary colorectal DLBCL patients were collected with Ficoll after approval of the ethics committee and informed consent. Lase microdissection combined with real-time PCR was used to test the mRNA expression of HES1 in the tumor tissues and adjacent tissues of 60 patients. According to the results, the patients were divided into HES1-high group and HES1-low group. The overall survival (OS) and relapse-free survival (RFS) of the tow groups were compared. The Univariate analysis and Multivariate Cox regression analysis were used to analyze the related factors for tumor prognosis. ResultsIn 60 cases of patients, the expression level of HES1 mRNA was 0.6±0.08 in the tumor tissues and 1.2±0.10 in the adjacent normal tissues, significant difference was found between them (P<0.05). The results showed that the low-expression group had a shorter OS and shorter RFS as compared with those of the high-expression group (38.6±1.3 vs. 53.0±1.4 months, 20.6±1.8 months vs. 28.8±1.2 months, respectively, all P<0.05). Univariate analysis showed that age, IPI score, the diameter of tumor, the breakthrough of serous layer, LDH and HES1 mRNA were the related factors for prognosis of colorectal primary DLBCL. Multivariate Cox regression analysis showed that the low mRNA expression of HES1 had positive implications for OS and RFS (HR=1.134, 1.134, all P<0.01). ConclusionThe expression of HES1 mRNA in the primary colorectal DLBCL was decreased, and the low expression was related with the poor prognosis.

Key words: diffuse large B-cell lymphoma; tumor suppressor gene; HES1 gene; colonic neoplasms; rectal neoplasms

彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)是最常見的惡性淋巴瘤，在形態(tài)學、免疫表型、分子生物學和臨床表現(xiàn)方面均有很強的異質(zhì)性。胃腸道是DLBCL最常見的結(jié)外累及部位[1]，占結(jié)外淋巴瘤的30%~40%[2]。結(jié)直腸原發(fā)DLBCL少見，臨床表現(xiàn)缺乏特異性，主要治療手段為化療，但大部分患者因活檢陽性率低而行手術(shù)切除。結(jié)直腸原發(fā)DLBCL預后較好，但部分患者易復發(fā)。HES1是bHLH-HES分子家族的一員，是Notch信號通路下游的效應子。文獻[3~5]報道，HES1在造血細胞發(fā)育及某些血液系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本研究觀察了結(jié)直腸原發(fā)DLBCL細胞中HES1的表達變化，并探討其與腫瘤預后的關系?，F(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料2005年1月~2014年12月收治的結(jié)直腸原發(fā)DLBCL患者60例，男36例、女24例，年齡42~66歲。術(shù)中取腫瘤組織和瘤旁正常組織，4%甲醛固定，流水沖洗，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋備用。

1.2HES1 mRNA檢測組織標本在無RNA酶條件下與鼠抗人CD20抗體(1∶50)孵育5 min，之后再與熒光耦聯(lián)的羊抗鼠二抗孵育5 min后上激光顯微切割儀，激光微切割熒光標記的細胞，通過TRIzol試劑盒進行RNA抽提，將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用real-time PCR法檢測HES1 mRNA。HES1 mRNA上游引物序列為5′-CTCCCGGCATTCCAAGCTAG-3′，下游引物序列為5′-AGCGGGTCACCTCGTTCATG-3′；GAPDH上游引物序列為5′-CGGAGTCAACGGATTTGGTCGTAT-3′，下游引物序列為5′-AGCCTTCTCCATGGTGGTGAAGAC-3′。PCR反應條件：95 ℃、15 s，60 ℃、60 s，共45個循環(huán)。以2-ΔCt代表基因表達量，高于HES1 mRNA平均表達水平者為HES1高表達組，低于HES1 mRNA平均表達水平者為HES1低表達組。

1.3總體生存期(OS)及無復發(fā)生存期(RFS)計算采用Kaplan-Meier方法分析生存期。OS為患者從診斷到死亡或統(tǒng)計截止的生存時間。RFS為患者從完全緩解(CR)到復發(fā)或統(tǒng)計截止日期的生存時間。比較HES1高表達組及HES1低表達組的OS、RFS。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料比較采用t檢驗。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。結(jié)直腸原發(fā)DLBCL預后相關因素分析采用單因素分析及Cox回歸多因素分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1結(jié)直腸原發(fā)DLBCL細胞中HES1 mRNA表達情況60例患者腫瘤細胞中HES1 mRNA表達量為0.6±0.08，瘤旁正常組織中HES1 mRNA表達量為1.2±0.10，二者相比，P<0.05。

2.2HES1高表達組與HES1低表達組OS、RFS比較HES1高表達組中，男17例、女13例，平均年齡55歲；HES1低表達組中，男19例、女11例，平均年齡52歲。HES1低表達組腫瘤突破漿膜層13例，瘤體直徑6 cm，與HES1高表達組(5例、3 cm)相比，P均<0.05。HES1高表達組OS為(53.0±1.4)個月、RFS為(28.8±1.2)個月，HES1低表達組分別為(38.6±1.3)、(20.6±1.1)個月，兩組相比，P均<0.05。

2.3結(jié)直腸原發(fā)DLBCL預后相關因素單因素分析結(jié)果顯示，年齡、IPI評分、瘤體直徑、腫瘤是否突破漿膜層、LDH、HES1 mRNA表達水平是結(jié)直腸原發(fā)DLBCL的預后相關因素。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，HES1 mRNA低表達對OS和RFS有正向提示作用(HR分別為1.134、1.102，P均<0.01)。

3討論

結(jié)直腸原發(fā)DLBCL臨床少見，本病可發(fā)生于任何年齡，男性多于女性，最多見的部位為盲腸(57%)，可能與回盲部淋巴組織較豐富有關，其次為升結(jié)腸(18%)、橫結(jié)腸(10%)、降結(jié)腸(5%)、乙狀結(jié)腸(10%)[6,7]。結(jié)直腸原發(fā)DLBCL臨床表現(xiàn)缺乏特異性，常以腹痛、腹部包塊、排便習慣改變、便血、發(fā)熱為主。該病定性診斷需病理檢查，但因腫瘤發(fā)生于黏膜下層，腸鏡活檢時較難達到黏膜下層，活檢陽性率僅為50%~80%，部分患者依靠手術(shù)切除標本病理檢查確診。

HES1作為HES家族的一員，是Notch信號通路的下游效應子。文獻[8,9]報道，HES1在胚胎形成及正常造血組織發(fā)育中起重要作用。HES1與細胞周期調(diào)控有關，并可維持多能干細胞處于未分化狀態(tài)?，F(xiàn)已證實，HES1與慢性粒細胞白血病、T淋巴細胞白血病的發(fā)病密切相關[10]。HES1低表達可作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤和急性T淋巴細胞白血病預后不良的相關因素[11]。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)，HES1是急性髓細胞白血病預后不良的相關因素[12~14]。DLBCL的預后相關因素很多[15]，但HES1表達與結(jié)直腸原發(fā)DLBCL預后的關系尚無報道。

本研究結(jié)果顯示，60例患者腫瘤細胞中HES1 mRNA表達量低于瘤旁正常組織，且HES1高表達組OS和RFS均長于HES1低表達組，提示HES1 mRNA表達水平可能是結(jié)直腸原發(fā)DLBCL的預后影響因素。我們進一步分析發(fā)現(xiàn)，年齡、IPI評分、瘤體直徑、腫瘤是否突破漿膜層、LDH、HES1 mRNA表達水平是結(jié)直腸原發(fā)DLBCL的預后相關因素，其中HES1是獨立預后因子。上述研究結(jié)果表明，HES1低表達在結(jié)直腸原發(fā)DLBCL發(fā)病中起重要作用，且為腫瘤預后不良的相關因素。

參考文獻：

[1] Castro FA, Jansen L, Krilaviciute A, et al. Survival of patients with gastric lymphoma in Germany and the United States[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2015,30(10):1485-1491.

[2] Tevlin R, Larkin JO, Hyland JM, et al. Primary colorectal lymphoma-A single centre experience[J]. Surgeon, 2015,13(3):151-155.

[3] Kato T, Sakata-Yanagimoto M, Nishikii H, et al. HES1 suppresses acute myeloid leukemia development through FLT3 repression[J]. Leukemia, 2015,29(3):576-585.

[4] Kannan S, Sutphin RM, Hall MG, et al. Notch activation inhibits AML growth and survival: a potential therapeutic approach[J]. J Exp Med, 2013,210(2):321-337.

[5] Tian C, Zheng GG, Cao ZP, et al. HES1 protects the function of normal HSC in leukemic microenviroment[J]. Cell Cycle, 2013,12(2):322-331.

[6] 黃帥,鄭朝旭,徐泉,等.52例結(jié)直腸非霍奇金淋巴瘤的臨床病理特征與預后分析[J].中華腫瘤雜志,2013,35(4):305-308.

[7] She WH, Day W, Lau PY, et al. Primary colorectal lymphoma: case series and literature review[J]. Asian J Surg, 2011,34(3):111-114.

[8] Kanamori E, Itoh M, Tojo N, et al. Flow cytometric analysis of Notch1 and Jagged1 expression in normal blood cells and leukemia cells[J]. Exp Ther Med, 2014,4(3):397-400.

[9] Yu X, Alder JK, Chun JH, et al. HES1 inhibits cycling of hematopoietic progenitor cells via DNA binding[J]. Stem Cells, 2006,24(4):876-888.

[10] 田晨,王超雨,賈勇勝,等.T-ALL患者骨髓CD+34細胞的HES1基因表達、數(shù)量、增殖變化及機制探討[J].山東醫(yī)藥,2014,54(39):5-7.

[11] Fiaschetti G, Abela L, Nonoguchi N, et al. Epigenetic silencing of miRNA-9 is associated with HES1 oncogenic activity and poor prognosis of medulloblastoma[J]. Br J Cancer, 2014,110(3):636-647.

[12] Tian C, Tang Y, Wang T, et al. HES1 is an independent prognostic factor for acute myeloid leukemia[J]. Oncol Targets Ther, 2015,8(1): 899-904.

[13] Tian C, Yu Y, Jia Y, et al. HES1 activation suppresses proliferation of leukemia cells in acute myeloid leukemia[J]. Ann Hematol, 2015,94(9):1477-1483.

[14] 田晨,朱磊,王超雨,等.高危急性髓系白血病的診療現(xiàn)狀[J].山東醫(yī)藥,2015,55(9):96-99.

[15] Song CG, Huang JJ, Li YJ, et al. Prognostic significance of Epstein-Barr virus DNA detection in pretreatment serum in diffuse large B-cell lymphoma[J]. PLoS One, 2015,10(7):e0133973.