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A型肉毒毒素對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠P物質(zhì)含量的影響

張曉英1，楊國(guó)棟2，潘萬(wàn)龍1

(1.川北醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，四川南充637000)

【摘要】目的:研究A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTX-A)對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠P物質(zhì)(substance P，SP)含量的影響。方法: 5 ％福爾馬林50 μL皮下注射于大鼠額區(qū)及顳區(qū)，建立疼痛模型。BTX-A組局部皮下注射10 U/kg BTXA，同時(shí)設(shè)立生理鹽水組及空白對(duì)照組，放射免疫法測(cè)定SP含量。結(jié)果:生理鹽水組SP含量高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，BTX-A組低于生理鹽水組(P＜0.05)。結(jié)論: BTX-A可能通過(guò)抑制感覺(jué)通路神經(jīng)肽-SP的釋放減輕神經(jīng)病理性疼痛癥狀。

【關(guān)鍵詞】A型肉毒毒素;神經(jīng)病理性疼痛; P物質(zhì)

肉毒毒素是由革蘭陽(yáng)性厭氧肉毒桿菌(clostridium botulinum)產(chǎn)生的一種神經(jīng)毒素，其中毒力最強(qiáng)的是A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTXA)，其最早應(yīng)用于試驗(yàn)研究及臨床。BTX-A藥理機(jī)制與膽堿能神經(jīng)末梢SNAP-25蛋白(synaptosomeassociated protein-25)結(jié)合，抑制乙酰膽堿釋放，減少肌肉收縮和痙攣相關(guān)，故其已廣泛用于治療肌肉活動(dòng)過(guò)度性疾病及美容除皺等領(lǐng)域。近年來(lái)，BTX-A在神經(jīng)病理性疼痛中的臨床研究也得到了人們的關(guān)注，但其機(jī)制尚在研究階段［1-7］。本研究通過(guò)測(cè)定神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠P物質(zhì)(substance P，SP)含量變化，對(duì)其止痛機(jī)理進(jìn)行初步研究。

1　材料與方法

1.1材料

健康雌性SD大鼠30只，體重(180±40)g，購(gòu)自蘭州陸軍總院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心; BTX-A由蘭州生物制品研究所提供; SP測(cè)試盒購(gòu)自上海第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物教研室; FJ2008型全自動(dòng)γ放射免疫計(jì)數(shù)器(西安二六二廠);甲醛(山西康寶生物制品股份有限公司)。

1.2方法

分組、建模及檢測(cè):30只成年SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(n =10)，5％福爾馬林50 μL皮下注射于20只大鼠額區(qū)及顳區(qū)，建立福爾馬林疼痛模型。疼痛發(fā)作后2 h分別給予生理鹽水0.05 mL、BTX-A 10 U/kg皮下注射于額區(qū)、顳區(qū)，每日1次，連續(xù)6 d。至第6天，注射2 h后取腦干(主要包括三叉神經(jīng)脊束核和三叉神經(jīng)腦橋核)及三叉神經(jīng)節(jié)。根據(jù)試劑盒說(shuō)明，測(cè)定SP的含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

大鼠皮下注射福爾馬林后出現(xiàn)前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)及往返運(yùn)動(dòng)增多。生理鹽水組腦干及三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，BTXA組與空白對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，低于生理鹽水組(P＜0.05)。各組腦干及三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量比較，見(jiàn)表1。

表1　各組腦干及三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量比較(±s，n)

表1　各組腦干及三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量比較(±s，n)

* P＜0.05，與空白對(duì)照組比較; #P＜0.05，與生理鹽水組比較。

組別　(只)　腦干SP(pg/mL)三叉神經(jīng)節(jié)SP(pg/mL)空白對(duì)照組10　1.42 +0.37　0.91 +0.70生理鹽水組　10　4.73 +2.14*　3.08 +0.54*BTX-A組　10　1.48 +0.57#　1.07 +0.61#

3　討論

BTX-A由一條重鏈和一條輕鏈組成，是肉毒桿菌毒素的7個(gè)分型(A、B、C、D、E、F、G)中最早被提純?yōu)榻Y(jié)晶的蛋白酶，生產(chǎn)工藝最成熟。近年來(lái)報(bào)道了BTX-A對(duì)偏頭痛、緊張性頭痛、叢集性頭痛、帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛、肌筋膜疼痛綜合征及術(shù)后疼痛綜合征［1-7］。成愛(ài)霞等［8］報(bào)道給予38例慢性每日頭痛患者BTX-A 50 U，44例對(duì)照組患者給予利多卡因加潑尼松龍5 mL(2％利多卡因3 mL +醋酸潑尼松龍75 mg×2 mL)。結(jié)果顯示BTX-A對(duì)慢性每日頭痛患者治療顯示出了較好的效果，明顯減少頭痛發(fā)作天數(shù)、減輕頭痛程度，而且作用持久、不良反應(yīng)輕微，對(duì)生活質(zhì)量也有所改善。肉毒毒素治療組治療后僅l例(2.6％)患者出現(xiàn)眉毛下垂，2例(5.2％)出現(xiàn)注射點(diǎn)疼痛，無(wú)任何患者出現(xiàn)頸項(xiàng)痛、頸強(qiáng)直、上瞼下垂、感覺(jué)減退及其他不良反應(yīng)，對(duì)照組中有6 例(13％)患者出現(xiàn)注射點(diǎn)疼痛。王晉榮等［9］也有相似報(bào)道，且表明療效可維持6個(gè)月，患者不良反應(yīng)輕微。汪保華等［10］報(bào)道30例偏頭痛患者BTX-A總有效率達(dá)96.7％，與對(duì)照組口服尼莫地平片的總有效率76.7％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。宋金輝等［11］在彩超水囊引導(dǎo)下BTX-A聯(lián)合紅外偏振光治療慢性偏頭痛患者，結(jié)果顯示發(fā)作臨床療效及不良反應(yīng)優(yōu)于BTX-A治療組及紅外偏振光治療組，值得進(jìn)一步研究后進(jìn)行臨床推廣。BTX-A能緩解由肌肉痙攣引起的疼痛，但當(dāng)肌肉張力恢復(fù)正常后，其止痛作用仍然很明顯。即BTX-A對(duì)由肌痙攣和非肌痙攣引起的疼痛均有效。這表明它的止痛作用尚存在其它的機(jī)制［12］。神經(jīng)病理性疼痛可通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放(如SP、神經(jīng)激肽、降鈣素基因相關(guān)肽、作用于血管的腸內(nèi)多肽等)引起神經(jīng)源性癥，作用于外周神經(jīng)血管系統(tǒng)引起中樞敏化，產(chǎn)生神經(jīng)病理性疼痛。SP作為速激肽家族中的一員，主要存在于脊髓背根神經(jīng)節(jié)及初級(jí)傳入纖維［13-16］。位于三叉神經(jīng)半月節(jié)內(nèi)的SP能神經(jīng)元以中小型為主，且SP能神經(jīng)元的向心纖維終末集中在腦干三叉神經(jīng)尾側(cè)脊束核內(nèi)，在某些因素的刺激(如外周傷害性刺激)作用下可釋放SP。SP在下丘腦含量的多少除與外周傷害性刺激外，還與神經(jīng)細(xì)胞合成速度有關(guān)，即SP屬肽類神經(jīng)遞質(zhì)，合成較為緩慢且無(wú)重復(fù)吸收，使傷害性信息持續(xù)傳人，導(dǎo)致短時(shí)間內(nèi)SP含量減少。SP具有多種生物學(xué)效應(yīng)，如致痛、降壓、血管擴(kuò)張和毛細(xì)血管通透性增加等，而且還可以通過(guò)作用于免疫細(xì)胞引起神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)。SP前體生成后與乙酰膽堿共存神經(jīng)末梢的囊泡，BTX-A與囊泡上SNAP-25的C-末端相結(jié)合，致其囊泡不能釋放，同時(shí)也抑制SP的釋放，從而減輕神經(jīng)病理性疼痛癥狀［17-18］。

本研究結(jié)果顯示，神經(jīng)病理性疼痛的大鼠模型出現(xiàn)前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)及往返運(yùn)動(dòng)增多，提示模型制備成功。生理鹽水組腦干及三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)SP含量高于對(duì)照組，BTX-A組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但低于生理鹽水組。這提示BTX-A可通過(guò)抑制感覺(jué)通路神經(jīng)肽(如SP的釋放)來(lái)減輕神經(jīng)病理性疼痛癥狀。

參考文獻(xiàn)

［1］Bach-Rojecky L，Relja M，Lackovi Z.Botulinum toxin type A in experimental neuropathic pain［J］.J Neural Transm，2005，112 (2):215-219.

［2］Tajti J，Szok D，Tuka B，et al.Botulinum neurotoxin—a therapy in migraine［J］.Ideggyogy Sz，2012，65(3-4):77-82.

［3］Aoki KR.Evidence for antinociceptive activity of botulinum toxin type A in pain management［J］.Headache，2003，43(Suppl 1): S9-S15.

［4］Gady J，F(xiàn)erneini EM.Botulinum toxin A and headache treatment ［J］.Conn Med，2013，77(3):165-166.

［5］Cho ES，Hwang JY，Kim ST.A proposal to prevent the“Mephisto sign”side effect of botulinum toxin type A injection in chronic migraine［J］.J Yonsei Med，2013，54(6):1542-1544.

［6］Lin KH，Chen SP，F(xiàn)uh JL，et al.Efficacy，safety，and predictors of response to botulinum toxin type A in refractory chronic migraine: A retrospective study［J］.J Chin Med Assoc，2014，77(1): 10- 15.

［7］劉海鵬，宋焱鋒，王賢東.A型肉毒毒素治療帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛臨床研究［J］.山東醫(yī)藥，2009，49(12):71-72.

［8］成愛(ài)霞，吳珊.A型肉毒毒素治療慢性每日頭痛的療效與安全性［J］.中華神經(jīng)科雜志，2010，43(12):874-877.

［9］王晉榮，祝海燕，徐艷.A型肉毒毒素顱周肌肉注射治療慢性偏頭痛臨床觀察［J］.浙江醫(yī)學(xué)，2013，35(1):38-40.

［10］汪保華，呂志華，陳斌，等.A型肉毒毒素局部注射治療發(fā)作期偏頭痛的臨床療效分析［J］.中國(guó)臨床實(shí)用醫(yī)學(xué)，2009，3 (11):11-12.

［11］宋金輝，丁旭東，黃瓅，等.A型肉毒毒素注射聯(lián)合紅外偏振光治療慢性偏頭痛的療效觀察［J］.中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志，2012，34 (3):216-219.

［12］FreundB，Schwartz M.Temporal relationship of muscle weakness and pain reduction in subjects treated with botulinum toxin A［J］.J Pain，2003，4(3):159-165.

［13］Shibata M.Pathophysiology of migraine chronification［J］.Rinsho Shinkeigaku，2013，53(11):1220-1222.

［14］Shi H，Li JH，Ji CF，et al.Effect of electroacupuncture on cortical spreading depression and plasma CGRP and substance P contents in migraine rats［J］.Zhen Ci Yan Jiu，2010，35(1):17-21.

［15］Fusayasu E，Kowa H，Takeshima T，et al.Increased plasma substance P and CGRP levels，and high ACE activity in migraineurs during headache-free periods［J］.Pain，2007，128(3):209-214.

［16］Jang MU，Park JW，Kho HS，et al.Plasma and saliva levels of nerve growth factor and neuropeptides in chronic migraine patients［J］.Oral Dis，2011，17(2):187-193.

［17］G?bel H，Heinze A，Heinze-Kuhn K，et al.Botulinum toxin A for the treatment of headache disorders and pericranial pain syndromes ［J］.Nervenarzt，2001，72(4):261-274.

［18］Carruthers A，Carruthers J.Update on the botulinum neurotoxins ［J］.Skin Therapy Lett，2001，6(13):1-2.

(學(xué)術(shù)編輯:楊健)

The change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A

ZHANG Xiao-ying1，YANG Guo-dong2，PAN Wan-long1

(1.School of Basic Medicine，North Sichuan Medical College; 2.Department of Gastroenterology，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，Sichuan，China)

【Abstract】Objective: To detect the change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A.Methods: Besides control group，neuropathic pain rats triggered by 5 ％ formalin subcutaneously injected into frontal and temporal areas，then they had been respectively treated with 0.9 ％ NaCl (n =10)and 10 U/kg BTX-A (n =10)for 6 days.All of groups were detected the content of substance P(SP)by radioimmunoassay.Results: The content of SP increased significantly in saline group than that in control group (P＜0.05)，but decreased significantly in BTX-A groups than in saline group(P＜0.05).Conclusion: BTXA could inhibit SP releasing from sensory pathways to relieve the symptoms of neuropathic pain.

【Key words】Botulinum toxin type A; Neuropathic Pain; Substance P

通訊作者:楊國(guó)棟，E-mail: ygd_ld2003@163.com

作者簡(jiǎn)介:張曉英，(1980-)，女，山西太原人，博士，講師，主要從事A型肉毒毒素對(duì)疼痛模型作用機(jī)制的研究。

基金項(xiàng)目:四川省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目(14ZAO194);川北醫(yī)學(xué)院科研發(fā)展重點(diǎn)培育項(xiàng)目(CBY13-A-ZP21)

收稿日期:2014-09-30

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.02.08

【文章編號(hào)】1005-3697(2015)02-0163-03

【中圖分類號(hào)】R378.8

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間: 2015-5-1 01∶33網(wǎng)絡(luò)出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150501.1333.005.html