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P63陽性基底細(xì)胞在前列腺切除術(shù)后尿道再上皮化中的作用

劉旋1，2，孫兆林2

(1.遵義醫(yī)學(xué)院，貴州遵義563000; 2.貴州省人民醫(yī)院泌尿外科，貴州貴陽550000)

【摘要】目的:探討前列腺切除術(shù)后P63陽性基底細(xì)胞在前列腺部尿道上皮修復(fù)過程中的作用。方法: 15只老年家犬行前列腺增生切除術(shù)，術(shù)后第3、7、14天取材行HE染色和免疫組織化學(xué)染色分別觀察前列腺部尿道上皮修復(fù)過程和P63蛋白表達水平。結(jié)果:術(shù)后3 d手術(shù)創(chuàng)面偶見P63陽性細(xì)胞;術(shù)后7 d可見片狀P63陽性細(xì)胞，且這些細(xì)胞與殘余前列腺組織相連續(xù);術(shù)后14 d可見新生尿道上皮基底層細(xì)胞陽性表達P63。結(jié)論:殘余前列腺組織是BPH術(shù)后尿道再上皮化的重要組織，而位于基底層的P63陽性細(xì)胞可能是這一修復(fù)過程的源細(xì)胞之一。

【關(guān)鍵詞】前列腺切除術(shù); P63;尿路上皮;再上皮化

良性前列腺增生是老齡男性的常見疾病，經(jīng)尿道前列腺切除手術(shù)是治療重度癥狀性前列腺增生的重要手段。迄今，經(jīng)尿道前列腺切除手術(shù)得并發(fā)癥仍然沒有得到有效的改善，這與術(shù)后尿路上皮的修復(fù)息息相關(guān)，術(shù)后尿路上皮修復(fù)機制、修復(fù)過程尚未闡明。Eduardo和作者前期的研究結(jié)果顯示修復(fù)前列腺部尿道的尿路上皮主要源于殘余的前列腺上皮和導(dǎo)管內(nèi)皮，但其具體的修復(fù)機制有待進一步研究［1-3］。

P63基因位于染色體3q27-28，在DNA結(jié)合域與P53基因具高度同源性，被認(rèn)為是P53基因家族的新成員［4］。P63在前列腺發(fā)育過程中起重要作用，并證實其在前列腺基底細(xì)胞中表達［5］。因此，本研究試圖建立犬前列腺切除模型，探討前列腺切除術(shù)后前列腺部尿道的修復(fù)過程，再上皮化的細(xì)胞來源，以及P63陽性的前列腺基地細(xì)胞是否在這一修復(fù)過程中發(fā)揮作用。

1　材料和方法

1.1實驗動物

成年雄性中華田園犬15只(購于遵義醫(yī)學(xué)院實驗動物場)，年齡5～6歲，體重18～20 kg。

1.2犬前列腺切除術(shù)模型

前列腺切除術(shù)模型參見［3］。術(shù)前1 d禁食不禁水，水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉的雄性中華田園犬仰臥位固定于手術(shù)臺上，手術(shù)臺呈斜坡位，方便沖洗液的流出。下腹部恥骨上正中切口，約4 cm，逐層切開，暴露膀胱。設(shè)立實驗組和對照組。實驗組插入電切鏡，直視下由尿道內(nèi)口進入前列腺部尿道，持續(xù)移動光纖，完成前列腺切除，切除前列腺部尿路上皮和增生前列腺組織，避免損傷前列腺包膜。術(shù)中以生理鹽水作為沖洗液，術(shù)畢縫合膀胱，關(guān)閉腹腔，術(shù)后均不帶導(dǎo)尿管。對照組僅切開膀胱后縫合，不完成前列腺切除術(shù)步驟。

1.3取材

前列腺汽化切除術(shù)后第3、7、14天，水合氯醛(0.3 mL/100 g)麻醉后處死犬。取手術(shù)創(chuàng)面和正常的前列腺部尿道組織作進一步研究。

1.4蘇木精-伊紅(Haematoxy-eosin，HE)染色

組織標(biāo)本經(jīng)多聚甲醛固定、乙醇梯度脫水、石蠟包埋，切取4 μm厚切片制成石蠟切片。

切片再經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精、蘇木精染色、伊紅染色、梯度酒精脫水、二甲苯透明后中性樹膠封片。

1.5組織免疫組織化學(xué)染色

石蠟切片用3％ H2O2-甲醇以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性后，1％ BSA封閉30 min，滴加一抗P63 (1∶200)，4℃孵育過夜; PBS沖洗后滴加二抗，PBS沖洗;滴加DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片后鏡檢。PBS代替一抗作陰性對照。

2　結(jié)果

2.1正常對照組犬前列腺部尿路上皮細(xì)胞組織圖

圖1中可見，在犬前列腺部尿道部，可見6～10層上皮細(xì)胞組成厚薄不一的正常尿路上皮，包括基底層、中間層及傘狀細(xì)胞層。

圖1　正常前列腺部尿路上皮HE染色（400X）

2.2手術(shù)后前列腺部創(chuàng)面的組織形態(tài)學(xué)變化

術(shù)后第3天，實驗組犬手術(shù)部位有凝固塊狀壞死，壞死組織周圍炎癥反應(yīng)嚴(yán)重，創(chuàng)面大量的炎癥細(xì)胞滲出。炎癥細(xì)胞主要包括單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，以中性粒細(xì)胞為主。凝固性壞死組織上可見零星、散在的上皮細(xì)胞。術(shù)后1周，炎癥反應(yīng)仍然明顯，組織間水腫，光鏡下可見大量的炎癥細(xì)胞在手術(shù)區(qū)域形成較厚的滲出層。壞死層明顯變薄，肉芽組織增生，血管擴張，成纖維細(xì)胞明顯增加。凝固性壞死組織上可見新生的點片狀、片狀單層上皮細(xì)胞覆蓋。術(shù)后2周，手術(shù)創(chuàng)面基本修復(fù)，上皮細(xì)胞完全覆蓋創(chuàng)面，細(xì)胞缺乏極性，上皮之間偶有點狀缺損，細(xì)胞厚薄不均，最薄處僅2～3層，最厚處可達6～8層。新生上皮下仍有炎癥細(xì)胞浸潤，血管擴張，組織輕度水腫等炎性反應(yīng)。

2.3前列腺部尿道尿路上皮P63的表達水平

P63陽性表達為胞核著色，胞核呈棕褐色的細(xì)胞為P63陽性細(xì)胞。在對照組，正常前列腺部尿道上皮基底層在連續(xù)、不間斷的細(xì)胞核基底細(xì)胞，基地細(xì)胞P63蛋白表達胞核呈棕黃色。同樣在前列腺腺管的基地細(xì)胞的胞核也呈棕黃色的表達。手術(shù)組在正常前列腺部尿道尿路上皮細(xì)胞術(shù)后第3天前列腺部尿道上皮偶見P63陽性表達細(xì)胞，P63蛋白表達胞核呈棕黃色;術(shù)后1周手術(shù)創(chuàng)面創(chuàng)面可見島連續(xù)新生的上皮細(xì)胞表達P63陽性(圖2);術(shù)后14 d前列腺部新生的尿道上皮基底層細(xì)胞P63陽性表達較均勻(圖3)。

圖2　術(shù)后1周手術(shù)創(chuàng)面可見島連續(xù)新生的上皮細(xì)胞表達P63陽性(HE×400)

圖3　術(shù)后2周前列腺部尿道上皮P63陽性在尿路上皮基地層細(xì)胞均勻表達(HE×400)

3　討論

前列腺切除術(shù)后，前列腺部尿道的再上皮化是前列腺切除術(shù)后修復(fù)的重要步驟。術(shù)后血尿，尿道狹窄，尿痛和尿路感染與前列腺部尿道是否能再上皮化息息相關(guān)。為探討這一過程，作者序貫觀察前列腺切除后犬前列腺部尿道再上皮化過程。結(jié)果顯示:術(shù)后有大量的炎癥細(xì)胞滲出和新生細(xì)胞在1周內(nèi)出現(xiàn)，在整個修復(fù)過程中，未見來源于近端膀胱頸或精阜遠(yuǎn)端的上皮爬行覆蓋手術(shù)創(chuàng)面的跡象。因此，前列腺切除術(shù)后前列腺部尿道的再上皮化來源于膀胱頸或精阜遠(yuǎn)端的上皮爬行覆蓋手術(shù)創(chuàng)面的可能性較小，而殘余前列腺組織有可能是前列腺部尿道再上皮化的重要組織來源之一。

Apodaca等［6-7］認(rèn)為前列腺腺體的再生可能源于基底細(xì)胞的增殖和分化。本實驗研究通過免疫組化檢測基底細(xì)胞特異性的標(biāo)記P63來觀察基底細(xì)胞是否參與前列腺部尿道的再上皮化過程。實驗結(jié)果表明: P63在增生的前列腺組織的腺管和腺泡的基底細(xì)胞均呈高表達，術(shù)后1周手術(shù)創(chuàng)面可見連續(xù)新生的上皮細(xì)胞表達P63陽性;術(shù)后1周和2周前列腺部新生的尿道上皮基底層細(xì)胞P63均呈陽性表達。在術(shù)后1周，前列腺部尿道再上皮化過程中均能顯著觀察到殘余前列腺的腺管或腺泡狀結(jié)構(gòu)中的P63陽性細(xì)胞的參與。

綜上所述，作者認(rèn)為前列腺切除術(shù)后殘余前列腺組織是前列腺尿道再上皮化的重要組織，來源于近端膀胱頸或精阜遠(yuǎn)端的上皮爬行覆蓋手術(shù)創(chuàng)面可能性小，而位于基底層P63陽性的基底細(xì)胞可能是這一修復(fù)過程的重要細(xì)胞之一。

參考文獻

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(學(xué)術(shù)編輯:羅光恒)

The role of P63 postive basal cell in re-epithelialization of prostatic urethra after resection of prostate

LIU Xuan1，2，SUN Zhao-lin2

(1.Zunyi Medical College，Zunyi 563000; 2.Department of Urology，the Guizhou People's Hospital，Guiyang 550000，Guizhou China)

【Abstract】Objective: To evaluate the role of P63 postive basal cell in re-epithelialization of prostatic urethra after resection of the prostate).Methods:15 older male dogs were treated with resection of the prostate.Specimens of the residual wounds were taken at days 3，7 and 14 postoperatively to evaluate the expression level of P63 and with HE and immunohistochemical staining.Results: P63 positive cells were detected occasionally in the wounds three days after surgery.At days 7，P63 postive cells appeared lamellar distribution connecting with remaining prostatic tissue and at days 14，P63 positive expression was observed in basal cells of newborn urothelium.Coclusion: The remaining prostatic tissue plays a great role in re-epithelialization of prostatic urethra after TmLRP and P63 postive cells of basal lamina may be one of the origins of cells for the process.

【Key words】Resection of prostate; P63; Urothelium; Re-epithelialization

作者簡介:劉旋(1987-)，男，貴州貴陽人，碩士研究生，主要從事膀胱癌方面的研究。E-mail:693480126@qq.com

基金項目:國家自然科學(xué)基金(81260119);貴州省科技廳基金(黔科合LS［2011］020);貴州省科技廳基金(黔科合SZ字2012［3077］、黔科合SY字2011［3024］、黔科合人才團隊2012［4013］)資助。

收稿日期:2015-01-21

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.02.07

【文章編號】1005-3697(2015)02-0160-03

【中圖分類號】

【文獻標(biāo)志碼】A

網(wǎng)絡(luò)出版時間: 2015-5-1 01∶33網(wǎng)絡(luò)出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150501.1333.004.html