褪黑素受體MT1在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的表達(dá)及臨床意義*

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-10-13網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20151013.1257.034.html

程俊美1， 候亞莉1， 楊一濤2， 謝鋒1

(1.菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校 病理學(xué)教研室， 山東 菏澤274000； 2.菏澤市立醫(yī)院 眼科， 山東 菏澤274000)

[摘要]目的： 探討褪黑素受體MT1在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(RB)中的表達(dá)及臨床意義。方法： 用免疫組化SP法檢測MT1在49 例RB組織和20例正常視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)，分析MT1的表達(dá)水平與RB臨床分期、細(xì)胞分化程度及是否浸潤神經(jīng)組織的關(guān)系。 結(jié)果： MT1在RB中的表達(dá)明顯高于正常視網(wǎng)膜組織 (P<0.01)，MT1在RB臨床Ⅰ期的表達(dá)低于臨床Ⅱ和Ⅲ期、在未分化RB組織中的表達(dá)高于分化組織、在浸潤神經(jīng)組織的表達(dá)高于未浸潤神經(jīng)組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而MT1表達(dá)與性別無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論： MT1高表達(dá)與RB的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤； 褪黑素受體； 腫瘤分期； 細(xì)胞分化； 免疫組織化學(xué)

[基金項(xiàng)目]*菏澤醫(yī)專課題項(xiàng)目(H13K05)

[中圖分類號(hào)]R739.7[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A

The Expression and Clinical Significance of Melatonin

Receptor MT1 in Retinoblastoma

CHENG Junmei1, HOU Yali1, YANG Yitao2, XIE Feng1

(1.DepartmentofPathology,HezeMedicalSchool,Heze274000,Shandong,China; 2.Departmentof

Ophthalmology,HezeCityHospital,Heze274000,Shandong,China)

Abstract[] Objective: To explore the expression of melatonin receptor (MT1) in retinoblastoma (RB) and its clinical significance. Methods: SP of immunohistochemistry was adopted to detect the expression of melatonin receptor (MT1) in retinoblastoma (49 cases) and normal retina tissue (20 cases). The relationship between the expression of MT1 in retinoblastoma and its clinical and pathologic features were analyzed. Results: The positive expression level of MT1 in retinoblastoma cases was obviously higher than in normal retina tissue cases (P<0. 01). The positive expression rate of MT1 in clinical stage Ⅰ cases was lower than in clinical stage Ⅱand Ⅲ cases (P<0. 01); The expression of MT1 in undifferentiated RB tissue was higher than in differentiated tissue while higher in invasive nerve tissue than in non-invasive nerve tissue, and the differences showed statistical significance (P<0.01). However, there was no significant difference in MT1 expression between male and female (P>0. 05). Conclusion: Melatonin receptor is related to the occurrence and development of retinoblastoma.

[Key words] retinoblastoma; melatonin receptor; neoplasm staging; cell differentiation; immunohistochemistry

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retinoblastoma，RB) 是嬰幼兒最常見的一種眼內(nèi)惡性腫瘤[1]，國際上首選的治療方法是化學(xué)減容法聯(lián)合局部治療，但復(fù)發(fā)率較高[2]。褪黑素(Melatonin, MEL)是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，是作用最強(qiáng)的自由基清除劑，具有明顯的抗腫瘤作用，主要在哺乳動(dòng)物和人類的松果體合成[3]，MEL可通過與其靶器官或靶組織上的褪黑素受體(Melatonin receptor，MR)結(jié)合發(fā)揮作用，因此，MR對(duì)于MEL發(fā)揮抗腫瘤作用至關(guān)重要。MR 廣泛分布于人的多種正常組織及腫瘤組織中[4]，在人類組織有MT1和MT2兩種亞型，關(guān)于MR在人RB中表達(dá)的相關(guān)研究較少。本研究通過探討MT1在RB中的表達(dá)，為進(jìn)一步研究MEL的抗腫瘤作用及其在治療RB中的機(jī)制提供理論依據(jù)。

1對(duì)象與方法

1.1　研究對(duì)象

經(jīng)病理診斷明確的RB手術(shù)切除標(biāo)本49例(49眼)，男23例，女26例；右眼25例，左眼24例；9月~5歲，平均(2.7±1.8)歲，無雙眼均發(fā)病患者。根據(jù)腫瘤分化程度(組織中有無菊形團(tuán)排列)分為分化型22例、未分化型27例，根據(jù)腫瘤有無視神經(jīng)浸潤分為浸潤視神經(jīng)21例、未浸潤視神經(jīng)28例，臨床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分別為21例、18例及10例。20例正常視網(wǎng)膜組織標(biāo)本，受檢者11月~8歲，平均(4.3±2.5)歲，距癌旁5 mm經(jīng)病理診斷為正常視網(wǎng)膜組織15例，外傷眼球摘除術(shù)后病理診斷為正常視網(wǎng)膜組織5例。另選乳腺癌5例作為陽性對(duì)照。組織均為石蠟包埋標(biāo)本。

1.2　免疫組織化學(xué)

所有組織切片經(jīng)二甲苯脫蠟、酒精水化和抗原修復(fù)等常規(guī)處理。一抗為兔抗人多克隆抗體，按照Max Vision TM試劑盒說明書常規(guī)免疫組織化學(xué)染色。陽性對(duì)照組為已知MT1陽性表達(dá)的乳腺癌組織，陰性對(duì)照組為PBS液代替一抗。按參考文獻(xiàn)[5]判斷結(jié)果，每張組織切片在光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(400×)，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，共計(jì)500個(gè)。按著色的強(qiáng)弱評(píng)分：無色記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分；再按著色陽性細(xì)胞率評(píng)分：腫瘤細(xì)胞中無陽性著色者記0分，陽性細(xì)胞率≤10%記1分，11%~50%記2分，51%~75%記3分，>75%記4分。將兩類評(píng)分相加即得免疫組織化學(xué)綜合評(píng)分， 0～4分記陰性，5～7分記陽性。MT1表達(dá)為胞膜、胞漿同時(shí)著色，胞核分布最少。

1.3　觀察指標(biāo)

記錄并比較MT1在RB和正常視網(wǎng)膜組織中的陽性表達(dá)數(shù)，分析MT1表達(dá)與RB腫瘤分化程度、有無視神經(jīng)浸潤和臨床分期的關(guān)系。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料用例或率(%)表示，各組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　MT 1表達(dá)

陰性對(duì)照或陽性對(duì)照組分別呈陰性或陽性反應(yīng)，提示免疫反應(yīng)結(jié)果可靠。MT1陽性顆粒呈棕黃色或淡黃色，在胞膜和(或)胞漿著色，見圖1。MT1在RB組織中陽性表達(dá)(73.5%)顯著高于正常視網(wǎng)膜組織(35.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

注：A為正常視網(wǎng)膜組織，B為RB組織(免疫組織化學(xué)，400×) 圖1　MT 1在RB和正常視網(wǎng)膜組織中的表達(dá) Fig.1　Expression of MT 1 in RB tissue and normal retina tissue

分組MT1表達(dá)+-陽性率χ2PRB組361373.5%7.3880.007正常組71335.0%

2.2　MT 1表達(dá)與RB腫瘤分化程度、視神經(jīng)浸潤和臨床分期的關(guān)系

結(jié)果顯示，RB腫瘤分化程度越低MT1陽性表達(dá)率越高，未分化組MT1的陽性表達(dá)率(92.6%)高于分化組(50.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。浸潤視神經(jīng)組MT1陽性表達(dá)率(95.2%)高于未浸潤視神經(jīng)組(57.1%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。臨床Ⅰ期和Ⅱ、Ⅲ期中的陽性表達(dá)率分別為47.6%、88.9%、100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；MT1表達(dá)與性別無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表2　MT 1在RB組織中的表達(dá)與

3討論

RB是原發(fā)于視網(wǎng)膜的惡性腫瘤，大多發(fā)生于嬰幼兒，并且具有較高的致盲率和病死率。目前RB的主要治療方法是化療聯(lián)合局部治療，但現(xiàn)有的化療藥物如長春新堿、泊類和環(huán)磷酰胺等，毒副作用較大，還可能誘發(fā)眼外惡性腫瘤[5]，故使其臨床應(yīng)用受限。因此，尋找安全有效的RB化療藥物，一直是研究熱點(diǎn)。MEL具有抗氧化、增強(qiáng)免疫及抗腫瘤的作用[6]。Helmbold等[7]研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性MEL水平和晝夜節(jié)律性與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。MEL作用的發(fā)揮主要通過MR結(jié)合而實(shí)現(xiàn)。MR在乳腺癌[8]、甲狀腺癌[9]、肝細(xì)胞肝癌[10]等高表達(dá)。MR中發(fā)揮抑制腫瘤生長作用的主要是MT1。本研究通過探討MT1在RB中的表達(dá)，為研發(fā)新的靶向藥物提供理論依據(jù)。

本研究結(jié)果MT1在RB組織中陽性表達(dá)(73.5%)顯著高于正常視網(wǎng)膜組織(35.0%)，P<0.01；RB腫瘤分化程度越低MT1陽性表達(dá)率越高，分化組中的陽性表達(dá)率(50.0%)低于未分化組(92.6%)，P<0.01；浸潤視神經(jīng)組MT1陽性表達(dá)率(95.2%)高于未浸潤視神經(jīng)組(57.1%)，P<0.01；臨床Ⅰ期和Ⅱ、Ⅲ期中的陽性表達(dá)率分別為47.6%、88.9%、100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；說明MT1的高表達(dá)不但與RB的發(fā)生有關(guān)，而且與腫瘤的分化及惡性程度有關(guān)。但與RB患者的性別無關(guān)。曾建等[8]報(bào)道，MT1在乳腺癌組織中的表達(dá)率明顯高于正常乳腺組織，且MT1表達(dá)率與乳腺癌惡性程度呈正相關(guān)。該報(bào)道與本研究結(jié)果一致。李嵐等[9]研究發(fā)現(xiàn)MR介導(dǎo)的抑制成人甲狀腺癌的作用可能主要MT2發(fā)揮。而亢曉彬等[10]研究發(fā)現(xiàn)MT1和MT2在成人肝癌組織上均呈高表達(dá)，說明MT1和MT2都有抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。另有Yuan等[11]研究發(fā)現(xiàn)，MT1在MCF-7乳腺癌細(xì)胞陽性表達(dá)率越高，MEL抑制腫瘤作用越強(qiáng)，并且腫瘤細(xì)胞對(duì)MEL的敏感性也越強(qiáng)。這一研究證實(shí)了MEL 與其受體MT1結(jié)合可以發(fā)揮抑制腫瘤增殖的作用。目前已有臨床研究發(fā)現(xiàn)MEL單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用均可有效地抑制腫瘤的生長和增殖，提高患者生存率，在口服適量MEL時(shí)尚未發(fā)現(xiàn)明確的毒副作用[12]。本課題組的前期研究表明，MEL通過不同的作用機(jī)制，對(duì)體外培養(yǎng)的RBHXO-RB44細(xì)胞顯示出較好的抑制作用[13]。

綜上， MT1在RB中的高表達(dá)可能在RB的發(fā)生、分化、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，可以考慮把MT1作為RB的預(yù)后判斷指標(biāo)。

4參考文獻(xiàn)

[1] 秦靜，段大鵬，車選義，等.RB中SHH與PTCH的表達(dá)及意義[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志， 2015(6)：559-561.

[2] Arika SK, Kasap B, Pintor J, et al. Impact of prognostic factors on survival rates in patients with ovarian carci-noma[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014(15): 6087-6094.

[3] Bretin-ciftci J, Barre B, Wiechmann AF, et al. pRb / E2F-1-mediated caspase-dependent induction of Noxa amplifies the apoptotic effects of the Bcl-2/Bcl-xL inhibitor ABT-737[J]. Cell Death Differ, 2013(5):755-764.

[4] Gencer S, Cebeci A, Rada JA, et al.Silencing of the MMP-3 gene by siRNA transfection in gastric cancer AGS cells [J]. J Gastrointestin Liver Dis, 2011(1): 19-26.

[5] Poudel S, Song J, Jin EJ, et al. Sulfuretin induced miR-30C selectively downregulates cyclin D1 and D2 and triggers cell death in human cancer cell lines [J]. Biochem Biophys Res Com-mun, 2013(3): 572-578.

[6] Tallant C, Marrero A, Comai S, et al. Cell cycle dependent acetylation of Rb2/p130 in NIH3T3 cells [J]. Onco-gene, 2010(42): 5755-5760.

[7] Helmbold H, Galderisi U, Dubocovich M L, et al. The switch from pRb/p105 to Rb2/p130 in DNA damage and cellular senescence [J]. J Cell Physiol, 2012(2): 508-513.

[8] 曾建，陳麗萍，陳淼，等. 乳腺癌組織中褪黑素受體MT1和CUEDC2的表達(dá)及臨床意義[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志, 2012(9): 795-799.

[9] 李嵐，何金，劉志民，張軍初，等. 成人甲狀腺腫瘤褪黑素及褪黑素受體蛋白表達(dá)異常及意義[J].醫(yī)學(xué)與哲學(xué):臨床決策論壇版,2011(5):57-59.

[10]亢曉彬，馬勇，魏偉. 成人肝癌組織褪黑素受體的表達(dá)及結(jié)合特性[J].中國藥理學(xué)通報(bào), 2010(2):174-177.

[11]Yuan L ，Collins A , Kiefer TL et al. Overexpression of the MT1melatonin receptor in MCF-7 human breast cancer cells inhibits mammary tumor formation in nude mice [J]. Cailcer Lett, 2003(1):49-57.

[12]Wang X, Sirianni A, Schernhammer ES，et al. A randomized controlled trial of oral melatonin supplementation and breast cancer biomarkers [J] Cancer Cause Control, 2012(4): 609-616.

[13]楊一濤, 唐羅生, 曾祥云, 等. 褪黑素對(duì)體外培養(yǎng)的RBHXO-RB44細(xì)胞增生活性的影響[J]. 中華眼底病雜志, 2009 (3):103-107.

(2015-07-29收稿，2015-08-30修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 劉華