子宮內(nèi)膜異位癥不同中醫(yī)證型與胰島素樣生長因子-Ⅰ的關(guān)系

熊婕，朱詠梅*

(仙桃市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 仙桃 433000)

摘要：目的探討子宮內(nèi)膜異位癥不同中醫(yī)證型與胰島素樣生長因子-Ⅰ的關(guān)系。方法選取因子宮內(nèi)膜異位癥需行腹腔鏡手術(shù)的患者242例，另22例因不孕或者盆腔良性疾病需行腹腔鏡手術(shù)患者為對照組,采用ELISA檢測血清中胰島素樣生長因子-Ⅰ,免疫組化檢測內(nèi)膜組織中胰島素樣生長因子-Ⅰ的表達(dá)情況。結(jié)果242例子宮內(nèi)膜異位癥患者中氣滯血瘀型患者87例(36.0%),痰濕瘀阻型36例(14.9%)，寒凝血瘀型33例(13.6%),熱郁血瘀型24例(9.9%)，腎虛血瘀型43例(17.8%)，氣虛血瘀型19例(7.8%)。ELISA檢測結(jié)果顯示，氣虛血瘀組患者血清中IGF-Ⅰ含量與正常對照組無差異外，其他各組均高于正常對照組(P<0.05)；氣滯血瘀組、腎虛血瘀組患者血清中IGF-Ⅰ含量明顯高于其他組別(P<0.05)；免疫組化檢測結(jié)果顯示，不同中醫(yī)證型患者組織IGF-Ⅰ陽性表達(dá)率相對于正常對照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)，氣滯血瘀型組IGF-Ⅰ陽性表達(dá)率高于痰濕瘀阻組、熱郁血瘀組(P<0.05)，氣滯血瘀組在9～12評分(+++)項(xiàng)中表達(dá)高于其他各組(P<0.05)。結(jié)論子宮內(nèi)膜異位癥患者中醫(yī)證型中氣滯血瘀、腎虛血瘀以及寒凝血瘀型與IGF-1的高表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：子宮內(nèi)膜異位癥；胰島素樣生長因子-Ⅰ；氣滯血瘀；腎虛血瘀；寒凝血瘀

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.11.012

中圖分類號：R711.71文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

基金項(xiàng)目:湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2010CDB09403)。

作者簡介:熊婕，女，大學(xué)本科，主要從事婦科腫瘤、不孕癥等研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張曄2015-03-10)

*通信作者:朱詠梅，電話-13872976198，電子信箱-554993047@qq.com

Relationship of endometriosis syndrome type and insulin-like growth factor -Ⅰ

XIONG Jie,ZHU Yongmei*

(Xiantao Chinese Medicine Hospital,Xiantao 433000,Hubei Province,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the relationship of endometriosis syndrome type and insulin-like growth factor-Ⅰ.MethodsTo select 242 cases as for TCM gynecology gynecology or endometriosis patients and 22 cases of laparoscopic surgery because of infertility or pelvic laparoscopic surgery for benign disease need patients in the control group,using ELISA serum insulin-like growth factor-Ⅰ,immunohistochemical detection of endometrial tissue expression of insulin-like growth factor-Ⅰ.ResultsThe 242 patients with endometriosis in patients with blood stasis type 87 (36.0%),phlegm stasis type 36 cases (14.9%),Hanning Blood type 33 cases (13.6%),hot Yu blood stasis 24 cases (9.9%),43 cases of kidney and blood stasis (17.8%) and 19 cases of Qi and Blood (7.8%).ELISA test results showed no difference in serum QDBS content of IGF-Ⅰ group and the normal control group,the other groups were higher than the normal control group (P<0.05);blood stasis group,Kidney Blood patients serum IGF-Ⅰ were significantly higher than the other groups (P<0.05).Immunohistochemistry showed,IGF-Ⅰ in patients with positive expression of tissue syndrome type relative to the control group with statistical significance (P<0.05，P<0.01);blood stasis type group IGF-Ⅰ expression rate higher than phlegm stasis group,heat and blood stasis group (P<0.05);blood stasis group was higher than the other groups (P<0.05) in the 9-12 score (+++) entry.ConclusionEndometriosis patients with TCM syndrome type of qi and blood stasis,kidney and blood stasis and blood stasis type haemorrheological nature related to the high expression of IGF-1.

Keywords:endometriosis;insulin-like growth factor-Ⅰ;qi-stagnation and blood stasis;renal deficiency and blood stasis;congealing cold and blood stasis

子宮內(nèi)膜異位癥是目前臨床較為常見的婦科疾病，其臨床主要表現(xiàn)為痛經(jīng)、不孕，異常內(nèi)膜增厚，常與婦科惡性病變有關(guān)[1]。關(guān)于子宮內(nèi)膜異位癥的病因病機(jī)的現(xiàn)代研究存在多種爭議[2]。目前對于子宮內(nèi)膜異位癥的中醫(yī)治療具有一定的優(yōu)勢，但是仍有其局限性，這可能與其中醫(yī)證型的不同有關(guān)[3]。胰島素樣生長因子-Ⅰ與子宮內(nèi)膜異常增生有關(guān)，不同中醫(yī)證型與胰島素樣生長因子-Ⅰ有著怎樣的關(guān)系，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1研究對象與方法

1.1臨床資料選取2012年3月—2014年6月在我院婦科因子宮內(nèi)膜異位癥需行腹腔鏡手術(shù)的患者242例，其平均年齡為(35.2±4.6)歲(25～39歲)。根據(jù)美國生殖醫(yī)學(xué)協(xié)會提出的美國生育協(xié)會修正分期法對子宮內(nèi)膜異位癥分Ⅰ～Ⅳ期：Ⅰ期49例，Ⅱ期57例，Ⅲ例78例，Ⅳ期58例。患者在手術(shù)時(shí)切除子宮內(nèi)膜異位病灶組織留存，術(shù)后經(jīng)病理檢測確系為子宮內(nèi)膜異位癥。另選取同期22例因不孕或者盆腔良性疾病需行腹腔鏡手術(shù)患者為對照組，經(jīng)病理檢測顯示患者無子宮內(nèi)膜病變。所有患者均簽訂知情同意書，并醫(yī)院倫理委員同意批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.2納入或排除標(biāo)準(zhǔn)[4]納入或者排除的標(biāo)準(zhǔn)為：1)患者在接受手術(shù)前6個(gè)月內(nèi)無使用激素類藥物或者免疫抑制劑；2)年齡在42歲以下，23歲以上；3)患者無其他合并嚴(yán)重疾病，如肝膽疾病、代謝綜合征、惡性腫瘤、盆腔結(jié)核等。

1.3診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]西醫(yī)的診斷標(biāo)準(zhǔn)主要有患者出現(xiàn)繼發(fā)性痛經(jīng)且呈進(jìn)行性加重、不孕或者出現(xiàn)盆腔慢性疼痛，盆腔檢查顯示，其與子宮相連處囊性包塊或者結(jié)節(jié)性疼痛，腹腔鏡證實(shí)上述結(jié)果。中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)則按照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》《中醫(yī)婦科學(xué)》以及《中醫(yī)婦科病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》制定子宮內(nèi)膜異位癥的中醫(yī)標(biāo)準(zhǔn)及其分型，主要為氣滯血瘀型、痰濕瘀阻型、寒凝血瘀型、熱郁血瘀型、腎虛血瘀型以及氣虛血瘀型。

1.4觀察指標(biāo)

1.4.1樣本制備所有患者在進(jìn)入研究后第二天早上空腹抽取肘靜脈血5 mL，靜置后以3 000 r/min離心15 min，分離獲取血清，分裝于EP管中保存在-80 ℃冰箱中待測。

1.4.2血清中胰島素樣生長因子Ⅰ采用ELISA法檢測血清中胰島素樣生長因子Ⅰ(美國R&D公司提供),嚴(yán)格按照試劑盒操作進(jìn)行。

1.4.3免疫組化檢測內(nèi)膜組織胰島素樣生長因子Ⅰ收集的組織標(biāo)本浸泡于10%甲醛中固定,經(jīng)不同濃度乙醇梯度脫水，石蠟包埋、切片，采用SP法檢測組織中IGF-Ⅰ的表達(dá)情況，嚴(yán)格執(zhí)行說明書操作。其中兔抗IGF-Ⅰ、DAB顯色劑以及山羊抗兔二抗均購于北京中杉生物有限公司。用乳腺癌患者陽性切片作為對照，磷酸緩沖鹽代替一抗作陰性對照。其結(jié)果判定為[6-7]:IGF-Ⅰ陽性染色均出現(xiàn)在細(xì)胞漿或者細(xì)胞膜中且呈淡黃色至棕褐色。在每張玻片上選擇5個(gè)視野，觀察300個(gè)子宮異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞，采用半定量判斷結(jié)果。即：陽性細(xì)胞數(shù)在5%以內(nèi)記0分,6%～25%以內(nèi)記1分，26%～50%以內(nèi)記2分，51%～75%以內(nèi)記3分，76%～100%記4分；陽性細(xì)胞以顯色為準(zhǔn)，其中出現(xiàn)淡黃色記1分，黃棕色記2分,棕褐色記3分，兩者乘積，0分記為(-)，1～4分記為(+)，5～8分記為(++)，9～12分記為(+++)。

2結(jié)果

2.1子宮內(nèi)膜異位癥中醫(yī)證型分布情況242例子宮內(nèi)膜異位癥患者中氣滯血瘀型患者87例(36.0%),痰濕瘀阻型36例(14.9%),寒凝血瘀型33例(13.6%)，熱郁血瘀型24例(9.9%),腎虛血瘀型43例(17.8%)以及氣虛血瘀型19例(7.8%)。后續(xù)檢測根據(jù)中醫(yī)證型進(jìn)行分組。

2.2不同中醫(yī)證型患者血清中IGF-Ⅰ含量不同證型組患者血清中IGF-Ⅰ含量表達(dá)不同，除氣虛血瘀組患者血清中IGF-Ⅰ含量與正常對照組無差異外,其他各組均高于正常對照組(P<0.05)；氣滯血瘀組、腎虛血瘀組患者血清中IGF-Ⅰ含量明顯高于其他組(P<0.05)。見表1。

2.3免疫組化檢測內(nèi)膜組織中IGF-Ⅰ表達(dá)免疫組化檢測結(jié)果顯示,不同中醫(yī)證型患者組織IGF-Ⅰ陽性表達(dá)率相對于正常對照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)；氣滯血瘀型組IGF-Ⅰ陽性表達(dá)率高于痰濕瘀阻組、熱郁血瘀組(P<0.05)；此外，氣滯血瘀組在9～12分(+++)項(xiàng)中表達(dá)高于其他各組(P<0.05)。見表2和圖1。

表1　不同中醫(yī)證型患者血清中IGF-Ⅰ含量 ± s)　ng/mL

注：與正常對照組相比較，# P<0.05，## P<0.01；與氣滯血瘀組比較，△ P<0.05，△△ P<0.01；與痰濕瘀阻組比較，▲ P<0.05；與寒凝血瘀組比較，* P<0.05;與熱郁血瘀組比較，◆ P<0.05；與腎虛血瘀組比較，■■ P<0.01

注：與正常對照組相比較，#P<0.05，##P<0.01；與氣滯血瘀組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與痰濕瘀阻組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01;與寒凝血瘀組比較，**P<0.01；與熱郁血瘀組比較，◆◆P<0.01；與腎虛血瘀組比較，■■P<0.01

注：A圖為正常對照組；B圖為氣滯血瘀組；C圖為痰濕瘀阻組；D圖為寒凝血瘀組；E圖為熱郁血瘀組；F圖為腎虛血瘀組；G圖為氣虛血瘀組 圖1　免疫組化檢測內(nèi)膜組織中IGF-Ⅰ表達(dá)

3討論

子宮內(nèi)膜異位癥臨床主要表現(xiàn)為繼發(fā)性痛經(jīng)進(jìn)行性加重，腰骶疼痛、不孕以及月經(jīng)失調(diào)等[8]。流行病學(xué)研究顯示[9]，育齡期是該病發(fā)病高峰。目前對于該病的病因病機(jī)尚未完全闡明，較為認(rèn)可的是經(jīng)血逆流種植學(xué)說。這一學(xué)說能夠解釋子宮內(nèi)膜異位癥的臨床特點(diǎn)，但卻不能解釋正常婦女均出現(xiàn)經(jīng)血逆流現(xiàn)象，而為什么只有少數(shù)婦女發(fā)生子宮內(nèi)膜異位癥[10]。現(xiàn)代研究也證實(shí)痛經(jīng)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生有著密切的關(guān)系?！夺樉募滓医?jīng)》“女子無血、血不血在內(nèi)不下”，指出了瘀血是導(dǎo)致女性不孕的原因。通過古代文獻(xiàn)以及現(xiàn)代研究證實(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥可能是由于痛經(jīng)、勞累以及外感傷寒導(dǎo)致內(nèi)膜異常增生，進(jìn)而導(dǎo)致不孕、性交痛等惡性循環(huán)的產(chǎn)生。

歷代醫(yī)家均有子宮內(nèi)膜異位癥的論述，其中《景岳全書·婦人規(guī)經(jīng)期腹痛十一》[11]中指出子宮內(nèi)膜異位癥的病因病機(jī)：“經(jīng)行腹痛，證有實(shí)虛，其虛者或有因血虛，或因氣虛；其實(shí)者或因血滯，或因氣滯?！逼渌t(yī)家對子宮內(nèi)膜異位癥的病因病機(jī)的論述也基本認(rèn)為是“氣滯血瘀、氣虛血虛、寒凝血滯”。因此本文根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)以及中醫(yī)對子宮內(nèi)膜異位癥病因病機(jī)的論述，將該病分為本文闡述的6種中醫(yī)證型。研究顯示,子宮內(nèi)膜異位癥患者中氣滯血瘀、腎虛血瘀型患者居多，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這一研究結(jié)果與中醫(yī)所闡述的病因病機(jī)基本一致。

胰島素樣生長因子(IGFs)對細(xì)胞的生長、分化以及代謝具有顯著的調(diào)節(jié)作用?，F(xiàn)代研究[12]顯示，IGFs對于子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜的異常增生存在復(fù)雜的調(diào)節(jié)作用，目前其異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展成為研究的熱點(diǎn)。IGFs主要包括IGF-Ⅰ、Ⅱ,其中IGF-Ⅰ與子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖、分化有著更為密切的關(guān)系。有研究顯示,雌激素能夠促進(jìn)IGF-Ⅰ在子宮內(nèi)膜中表達(dá),其表達(dá)量水平基本可以評估子宮內(nèi)膜分子水平雌孕激素反應(yīng)[13-14]。以往研究[15-16]顯示,IGF-Ⅰ與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生密切相關(guān)，但是不同中醫(yī)證型與IGF-Ⅰ關(guān)系如何鮮為報(bào)道。通過本研究顯示,子宮內(nèi)膜異位癥患者中氣滯血瘀型、腎虛血瘀型以及寒凝血瘀型患者IGF-Ⅰ含量相對于正常對照組以及其他證型組均顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,這一結(jié)果提示上述中醫(yī)證型患者出現(xiàn)的臨床癥狀與IGF-Ⅰ的異常升高有著密切的關(guān)系。但是需要指出的是，氣虛血瘀型、熱郁血瘀型以及痰濕瘀阻型與哪些因素有關(guān)值得進(jìn)一步探討。免疫組化研究結(jié)果顯示,異常內(nèi)膜組織中各組IGF-Ⅰ陽性表達(dá)率均高于正常對照組，這一結(jié)果顯示異常內(nèi)膜的出現(xiàn)與IGF-Ⅰ的表達(dá)仍有一定關(guān)系。此外,氣滯血瘀型患者組織中IGF-Ⅰ呈陽性強(qiáng)表達(dá)，與其他各組相比較，均顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。但為何血清檢測不一致有待進(jìn)一步研究。

總之,子宮內(nèi)膜異位癥患者中醫(yī)證型中氣滯血瘀、腎虛血瘀以及寒凝血瘀型與IGF-Ⅰ的高表達(dá)有關(guān)。

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