劉美蘭

【摘要】目的：本文主要探討血栓與止血檢測用于出血病與易栓癥中的臨床診斷應用研究。方法：選取出血病15個病種、156個家系、168例先證者和616名家族成員進行了檢測，在人類基因庫中尋找相關的基因序列，通過RT-PCR、AS-PCR和實時PCR擴增，得到PCR的純化產(chǎn)物，再用RFLP、TA克隆和直接測序等方法進行基因診斷；同時采用抽取DNA、合成引物、PCR擴增、PCR產(chǎn)物純化及直接測序分析方法，并采用RFLP和AS-PCR驗證等技術，分別對4個家系的AT缺陷癥、4個家系的PC缺陷癥及2個家系的PS缺陷癥作出基因診斷。結(jié)果：在血栓與止血檢測在出血病方面的應用，發(fā)現(xiàn)診斷準確率達100%；在血栓與止血檢測在易栓癥方面的應用，診斷準確率達100%。結(jié)論：發(fā)現(xiàn)栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應出血病和易栓癥的診斷。

【關鍵詞】血栓；止血；出血病；易栓癥

出血癥是由于凝血系統(tǒng)出現(xiàn)問題而發(fā)生的出血現(xiàn)象，而易栓癥是由于凝血因子、抗凝蛋白等的遺傳性或獲得性缺陷而發(fā)生血栓栓塞癥狀。其二者是臨床中最為常見的危害人類健康的疾病，而血栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應出血病和易栓癥的診斷。

1、資料與方法

1.1血栓與止血檢測

對血栓和止血的檢測一定程度上可反應出血病和易栓癥的診斷，診斷方法大致可分為表型檢測和篩選試驗這兩類。表型檢測常用作診斷試驗；篩選試驗常需監(jiān)測的指標主要有血小板計數(shù)（PLT）、出血時間（BT）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）、優(yōu)球蛋白溶解時間（ELT）、纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDPs）等等。

目前對部分先天性和遺傳性出血疾病和易栓癥需要進行基因檢測，以確定是否存在基因缺陷。

1.2血栓與止血檢測在出血病和易栓癥中的應用

出血病包括有新生兒出血癥和腦干出血癥和兩種，主要是由一期止血缺陷和二期止血缺陷所導致的，一期止血缺陷主要由血管壁和血小板異常所引發(fā)的止血性功能缺陷，而二期止血缺陷主要由抗凝物質(zhì)和凝血障礙所引起的止血性功能缺陷。本研究對15個病種、156個家系、168例先證者和616名家族成員進行了檢測。在人類基因庫中尋找相關的基因序列，通過RT-PCR、AS-PCR和實時PCR擴增，得到PCR的純化產(chǎn)物，再用RFLP、TA克隆和直接測序等方法進行基因診斷，并已獲得102種國內(nèi)外首先報道的突變基因。

血栓病在臨床上可以分為遺傳性和獲得性兩種，無論是遺傳性易栓癥還是獲得性易栓癥，二者共同的最主要臨床特點都是血栓易發(fā)傾向，又多數(shù)以靜脈血栓栓塞性疾病（VTE）形式出現(xiàn)，有些疾病動脈血栓的發(fā)生率也有升高。體內(nèi)主要抗凝蛋白如抗凝血酶（antithrombin，AT）、蛋白S（proteinS，PS）、蛋白C（proteinC，PC）的先天缺乏會導致血栓性疾病。對靜脈系統(tǒng)血栓病的檢測可發(fā)現(xiàn)部分患者具備這種先天性缺陷。肺栓塞（PulmonaryembolismPE）是DVT中常見的并發(fā)癥，也是靜脈血栓形成和導致死亡的最為主要的因素，易栓癥的診斷見表1。

2、結(jié)果

在血栓與止血檢測用于出血病應用方面，基于研究閱讀文獻，通過對137名血友病患者進行產(chǎn)前診斷，采用Southern-Blot和PCR-DGGE技術手段，檢測F8內(nèi)含子22倒位；根據(jù)性別基因位點和多態(tài)性位點，再對內(nèi)含子22倒位陰性者進行間接連鎖分析，發(fā)現(xiàn)其累積識別能力高達99.4%，準確率高達100%，同時診斷率也高達100%。

在血栓與止血檢測用于易栓癥應用方面，本研究采用抽取DNA、合成引物、PCR擴增、PCR產(chǎn)物純化及送入公司進行測序等分析方法，并采用AS-PCR和RFLP等驗證技術，分別對4個家系的PC缺陷癥、4個家系的AT缺陷癥及2個家系的PS缺陷癥進行基因診斷，發(fā)現(xiàn)突變基因共計8種，最終診斷準確率高達100%。

3、討論

基于前人研究發(fā)現(xiàn)血栓和止血監(jiān)測的結(jié)果在一定程度上可反應出血病和易栓癥的診斷。本實驗首先研究了血栓與止血檢測在出血病中的臨床應用，對137名血友病患者進行產(chǎn)前診斷，發(fā)現(xiàn)累積識別能力達99.4%，準確率高達100%，同時診斷率也高達100%。其次研究了血栓與止血檢測在易栓癥中的臨床應用，采用多種醫(yī)學手段對易栓癥多種病癥進行基因診斷，診斷準確率達100%。綜上可見，在診斷出血病與易栓癥中，血栓和止血檢測可作為決定性檢測指標。