劉霞　孫青　陳志軍

摘 要：目的：探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在高脂膳食誘導(dǎo)胰島素抵抗（IR）的形成及運(yùn)動(dòng)干預(yù)中的作用。方法：選用清潔級(jí)的雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組：正常對照組（C組，n=10）；高脂膳食組（H，n=10）；游泳運(yùn)動(dòng)組（E，n=10）；高脂膳食+游泳運(yùn)動(dòng)組（HE，n=10）。按實(shí)驗(yàn)要求分別給予普通飼料和高脂飼料，E、HE組每天無負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)1小時(shí)。11周后檢測各組大鼠空腹血糖（FBG）、血清胰島素（FBG）、骨骼肌AMPK、PI3K、Akt、mTOR、S6K1的表達(dá)量。結(jié)果：1）與C組相比，H組FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）均顯著性升高（P<001）（P<0.05），E組FINS極顯著性下降（P<0.01）；與H組相比，HE組FINS顯著性下降（P<0.05）。2）與C組比較，H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加（P<0.05），S6K1mRNA極顯著性升高（P<0.01）；與H組比較，HE組骨骼肌mTOR、S6K1mRNA顯著性減少（P<0.05）。3）與C組比較， E組骨骼肌Akt和AMPK含量顯著性增加（P<0.01）；與H組比較，HE組骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量有增加，但均無顯著性（P>0.05）。結(jié)論：1）長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號(hào)通路，導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。2）有氧運(yùn)動(dòng)激活A(yù)MPK，抑制mTOR的作用，AMPK/mTOR/S6K1可能在運(yùn)動(dòng)干預(yù)高脂膳食誘導(dǎo)IR形成中起著重要的作用。

關(guān)鍵詞：高脂；胰島素抵抗；運(yùn)動(dòng)干預(yù)； mTOR；AMPK

中圖分類號(hào)：G804.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-2076（2015）05-0057-05

Abstract：Objective：Explore the effect of mTOR on the generation of insulin resistance of high-fat diet and exercise induced.Methods：40 Sprague-Dawley（SD）male rats were randomly divided into control group（C，n=10），High-Fat Diet Rats（H，n=10），Swimming Exercise Rats（E，n=10） and High-Fat Diet+Swimming Exercise Rats（HE，n=10）.According to the acquirement， they should be fed separately normal diet and high-fat diet.Rats in group E and group HE were both asked to swim for one hour with non-weight bearing everyday.After 11weeks，measuring the content of FBG，F(xiàn)INS，the expression of AMPK，PI3K，Akt，mTOR，S6K1 in skeletal muscles.Results：1）Compared with group C，

哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是胰島素經(jīng)典PI3K/AKT信號(hào)通路的下游靶蛋白，受營養(yǎng)物質(zhì)、能量變化以及生長因子的激活，可調(diào)控蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞生長和增殖[1]。已有研究發(fā)現(xiàn)，mTOR與胰島素抵抗（IR）的關(guān)系密切，外界信號(hào)刺激導(dǎo)致mTOR持續(xù)高度活化時(shí)，mTOR可通過負(fù)反饋途徑引起胰島素受體底物-1（IRS-1）絲氨酸磷酸化是IR形成的主要原因[2]。而NiuYM[3]等研究發(fā)現(xiàn)，mTOR/S6K1信號(hào)通路與高脂飲食誘導(dǎo)IR的發(fā)生有著密切的關(guān)系，有氧運(yùn)動(dòng)可能是通過抑制mTOR/S6K1信號(hào)通路，使IR得到改善，但其調(diào)控機(jī)制尚不清楚，為此本研究將通過高脂膳食誘導(dǎo)IR形成的同時(shí)進(jìn)行運(yùn)動(dòng)干預(yù)，來進(jìn)一步探討mTOR與IR的關(guān)系以及運(yùn)動(dòng)對mTOR的調(diào)控機(jī)制。

1 研究對象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選用清潔級(jí)6周齡雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，體重160～180 g，購于南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場。分籠飼養(yǎng)，每籠5只，環(huán)境溫度（25±1）℃，自然光照，每天更換一次墊料，保持籠內(nèi)干燥。隨機(jī)分成4組：正常對照組（C，n=10）；運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組（E，n=10）；高脂對照組（H，n=10）；高脂+運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練組（HE，n=10）。高脂飼料的配方為78.8%基礎(chǔ)飼料、10%蛋黃粉、10%豬油、1%膽固醇和0.2%膽鹽[4]，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場配制。

1.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方案

運(yùn)動(dòng)組（E、HE）大鼠每天進(jìn)行無負(fù)重的游泳訓(xùn)練，每周訓(xùn)練6天，第1周進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，游泳時(shí)間在1周之內(nèi)過渡到60 min，正式運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練11周。游泳池為100 cm×70 cm×60 cm長方體水桶，水深50 cm、水溫（33±1）℃。在訓(xùn)練過程中時(shí)刻觀察大鼠游泳狀態(tài)防止溺水死亡或偷懶休息，并及時(shí)撈出老鼠糞便，確保泳池水質(zhì)清潔。

1.3 實(shí)驗(yàn)取材

大鼠在末次運(yùn)動(dòng)后，禁食12 h，次日晨分別按50 mg/kg的劑量腹腔注射2%的戊巴比妥鈉麻醉，然后腹主動(dòng)脈取血3 mL，放入無菌試管中，在室溫靜置30 min后，4℃、3 500 rpm離心15 min，在2 h內(nèi)測定空腹血糖（FBG），其余血清在-80℃冰箱中保存，以備測定空腹血清胰島素（FINS）；取大鼠腓腸肌，立刻放入液氮中，再轉(zhuǎn)入-80℃保存。然后稱量約300 mg的腓腸肌淺層組織，剪碎后移入玻璃勻漿器中，加入預(yù)冷的生理鹽水3 mL，在冰浴下仔細(xì)研磨制備10%的組織勻漿，并以3 000 rpm低溫離心10 min，取上清液-40℃保存，以備測定骨骼肌中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶（Akt）、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）和 mTOR含量；稱量80～100 mg的淺層腓腸肌，用Trizol （購自Life technologies）法從骨骼肌組織中提取總RNA后，采用NanoDrop ND-3300微量分光光度計(jì)檢測260/ 280吸光度比值，判斷RNA純度。按照cDNA合成試劑盒（購自上海東洋紡生物科技有限公司）中說明書上的操作步驟，使用2720 Thermal Cycler梯度PCR儀（美國）進(jìn)行cDNA合成，反應(yīng)結(jié)束后，在-20℃條件下保存。

1.4 指標(biāo)測試

FBG采用葡萄糖氧化酶法測定，測定儀器為日立全自動(dòng)生化分析儀；FINS、骨骼肌PI3K、Akt、AMPK和 mTOR采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定，試劑盒購于上海博古生物科技有限公司，測定儀器為美國產(chǎn)的ELX800型酶標(biāo)儀；胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=FBG×FINS/22.5。腓腸肌勻漿液中蛋白定量采用BCA法，試劑購于碧云天生物技術(shù)研究所，測試儀器為全波長酶標(biāo)儀；骨骼肌mTOR、S6K1mRNA采用RT-PCR法測定。使用SYBR Green Master（ROX）試劑盒（購自Roche Diagnostics），以cDNA為模板，β-actin為內(nèi)參，在ABI 7500 RT-PCR儀進(jìn)行基因擴(kuò)增。擴(kuò)增程序?yàn)椋?0℃預(yù)處理2 min，95℃預(yù)變性10 min，95℃變性15 s，60℃退火60 s共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。程序運(yùn)行結(jié)束后，將目的基因的Ct值與內(nèi)參GAPDH進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，計(jì)算出目的基因的相對表達(dá)量。mTOR、S6K1和GAPDH的引物由均由上海生物工程有限公司設(shè)計(jì)并合成，引物序列見表1。

表1 mTOR、S6K1和β-actin的引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）表示，H組、E組與C組之間和HE組與H組之間分別采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P<0.05表示具有顯著性差異，P<0.01表示有非常顯著性差異。

2 研究結(jié)果與分析

2.1 實(shí)驗(yàn)大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

從表2可見，與C組相比，H組FBG極顯著性升高（P<0.01），F(xiàn)INS和HOMA-IR均顯著性升高（P<0.05）；E組FBG降低，但無顯著性差異（P>0.05），F(xiàn)INS極顯著性降低（P<0.01），HOMA-IR顯著性降低（P<0.05）。與H組相比，HE組FINS有顯著性下降（P<0.05），F(xiàn)BG和HOMA-IR有下降趨勢，但沒有顯著性（P>0.05）。

表2 實(shí)驗(yàn)大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

注：H組、E組與C組相比，*，P<0.05，**，P<0.01；HE組與H組相比，#，P<0.05，##，P<0.01。

2.2 實(shí)驗(yàn)大鼠骨骼肌mTOR和S6K1含量的變化

從表3可見，與C組比較，H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加（P<0.05），S6K1mRNA極顯著性升高（P<0.01），E組骨骼肌mTOR含量無顯著性差異，mTOR和S6K1mRNA顯著性下降（P<005）。與H組比較，HE組骨骼肌mTOR含量有所減少，但無顯著性差異（P>0.05），mTOR、S6K1mRNA顯著性減少（P<0.05）

表3 實(shí)驗(yàn)大鼠骨骼肌mTOR蛋白、mTOR和S6K1 mRNA的變化

注：H組、E組與C組相比，*，P<0.05，**，P<0.01；HE組與H組相比，#，P<0.05，##，P<0.01。

2.3 實(shí)驗(yàn)大鼠骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量的變化

從表4可見，與C組比較，H組骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異（P>0.05），E組骨骼肌PI3K含量有所增加，但無顯著性差異（P>0.05），Akt含量顯著性增加（P<0.01）；與H組比較，HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加，但均無顯著性（P>0.05）。與C組比較，E組骨骼肌AMPK含量極顯著性增加（P<0.01），H組骨骼肌AMPK含量下降，但無顯著性差異（P>0.05）；與H組比較，HE組骨骼肌AMPK含量有增加趨勢，但無顯著性（P>0.05）。

表4 實(shí)驗(yàn)大鼠骨骼肌PI3K、AKT、AMPK的變化

注：*與C組相比；**為P<0.01。

3 討論

3.1 mTOR在高脂膳食大鼠骨骼肌IR形成與運(yùn)動(dòng)干預(yù)中的作用

與C組相比，11周高脂膳食組大鼠體重、FBG和FIns顯著性升高，且HOMA-IR也顯著性升高，說明高脂膳食組產(chǎn)生了IR。與此同時(shí)，與H組相比，HE組空腹胰島素有顯著性下降（P<0.05），空腹血糖和HOMA-IR有所下降，但沒有顯著性（P>0.05），說明長期的運(yùn)動(dòng)對高脂誘導(dǎo)的IR有一定的干預(yù)作用，但不足以完全改善高脂誘導(dǎo)的IR。

不少研究發(fā)現(xiàn)，mTOR/S6K1信號(hào)通路與高脂飲食誘導(dǎo)IR的發(fā)生有著密切的關(guān)系[3，5-6]。在正常情況下，mTOR參與機(jī)體蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖、能量代謝等生理活動(dòng)，但當(dāng)外界信號(hào)如氨基酸過度刺激導(dǎo)致mTOR持續(xù)高度活化時(shí)，mTOR通過反饋性途徑產(chǎn)生IR[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，與C組比較，H組骨骼肌mTOR含量和mRNA量都有顯著性增加（P<0.05），S6K1mRNA極顯著性升高（P<0.01），說明高脂膳食引起的血糖和胰島素含量的升高激活了骨骼肌mTOR/S6K1信號(hào)通路，使IRS絲氨酸過度磷酸化，從而導(dǎo)致胰島素的反應(yīng)性下降，誘發(fā)IR的出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)表明，8W的高糖高脂膳食可使大鼠產(chǎn)生肥胖、高FFA及炎癥反應(yīng)，從而成功誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生IR，并使脂肪組織 PI3K表達(dá)降低，P70S6K升高[6]。如將db/db小鼠肝臟S6K1基因沉默后，IR有明顯的改善，特別是在空腹?fàn)顟B(tài)時(shí)，增強(qiáng)了胰島素的信號(hào)傳導(dǎo)，糖異生水平下降[7] 。探討其機(jī)制，炎癥及高脂等狀態(tài)可使mTOR及其下游靶點(diǎn)S6K1活化加強(qiáng)有可能導(dǎo)致IRS-1絲氨酸磷酸化，從而抑制胰島素的作用，引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生IR[8-10]。RSK（P90核糖體S6K）能有效抑制IRS-1絲氨酸磷酸化，可能是一個(gè)新的調(diào)節(jié)IR和糖代謝的因子[11]

研究證實(shí)，有氧運(yùn)動(dòng)能下調(diào)mTOR/S6K1信號(hào)通路，增加骨骼肌對胰島素的敏感性，從而改善IR[12]。WangT[13]研究認(rèn)為，吳茱萸堿可能通過抑制脂肪組織mTOR-S6K信號(hào)和IRS1絲氨酸磷酸化，改善葡萄糖耐量，阻止IR的發(fā)生。但是Medeiros C[14]研究發(fā)現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能夠上調(diào)飲食性肥胖大鼠心肌中mTOR/p70S6k信號(hào)途徑，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成。本研究進(jìn)一步研究了長期有氧運(yùn)動(dòng)對高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/p70S6k信號(hào)途徑的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與H組比較，HE組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降（P<005），說明長期的有氧運(yùn)動(dòng)在一定程度上可下調(diào)高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/S6K1mRNA的表達(dá)，有效防止IR的形成。

3.2 在IR形成與運(yùn)動(dòng)干預(yù)中的mTOR變化的可能機(jī)制

mTOR主要受到PI3K/AKT/mTOR和LKB1/AMPK/mTOR信號(hào)通路的調(diào)控[15]。PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路是胰島素重要的作用途徑，胰島素、生長因子和細(xì)胞因子等可激活PI3K，在磷脂酰肌醇依賴的蛋白激酶（PDK）的協(xié)同作用下，導(dǎo)致Akt從胞漿轉(zhuǎn)位到質(zhì)膜，并促進(jìn)Akt的磷酸化，通過mTOR、糖原合成酶激酶-3（GSK-3）等下游底物磷酸化而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)效應(yīng)[16]。但當(dāng)營養(yǎng)水平過剩時(shí)，生長因子等通過mTOR和S6K1可反饋調(diào)節(jié)PI3K的激活，導(dǎo)致IR。孟艷[17]實(shí)驗(yàn)證實(shí)，PI3K-mTOR信號(hào)通路持續(xù)激活時(shí)，可以通過下調(diào)PDGFR-IRS導(dǎo)致細(xì)胞胰島素信號(hào)通路的傳遞阻滯，發(fā)生IR現(xiàn)象，這與肥胖伴發(fā)的IR和2型糖尿病有著相似的生物學(xué)基礎(chǔ)。但本研究發(fā)現(xiàn)，與C組比較，11周高脂喂養(yǎng)的大鼠（H組）骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異（P>0.05），這可能與實(shí)驗(yàn)方法的選擇以及指標(biāo)測試的方法不同有關(guān)。而長期的有氧運(yùn)動(dòng)對IR骨骼肌PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響，目前結(jié)果并不一致。高晶[18]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與糖尿病組比較，8周有氧運(yùn)動(dòng)可使骨骼肌PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均顯著性增加。但Christ-Roberts等研究發(fā)現(xiàn)，8周的有氧運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練并不能增加超重非糖尿病與2型糖尿病患者骨骼肌中PI3K的活性[19]。在本實(shí)驗(yàn)中，與C組比較，E組骨骼肌PI3K含量有所增加，但無顯著性差異（P>0.05），Akt含量顯著性增加（P<0.01）；與H組比較，HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加，但均無顯著性（P>0.05）。從而進(jìn)一步說明長期的有氧運(yùn)動(dòng)并不能有效地提高高脂膳食大鼠骨骼肌中PI3K、Akt含量。

AMPK能夠參與細(xì)胞和組織的糖脂代謝，調(diào)節(jié)機(jī)體的能量攝入和消耗。長期高脂飲食可減少肝臟組織AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性，影響體內(nèi)能量代謝[20]。有研究表明，AMPK也是mTOR重要的上游調(diào)節(jié)因子。在SD大鼠血管平滑肌細(xì)胞中，AICAR激活A(yù)MPK可以顯著抑制細(xì)胞內(nèi)mTOR的mRNA表達(dá)，并顯著抑制p-mTOR的活性[21]。Saha AK[22]在調(diào)節(jié)葡萄糖和亮氨酸誘導(dǎo)的IR實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，AMPK可下調(diào)mTOR/p70S6K活性。電刺激引起的肌肉收縮可激活A(yù)MPK，從而減弱Akt/mTOR、S6K1、4E-BP1和eEF2的信號(hào)作用，并認(rèn)為AMPK對PI3K信號(hào)通路可發(fā)揮雙重作用，即激活PI3K/Akt和抑制mTOR/p70S6K[23]。AMPK激活后一方面能夠直接磷酸化mTORThr2446位點(diǎn)而抑制其活性[24]，另一方面通過激活TSC2而間接抑制mTOR的活性[25]。運(yùn)動(dòng)時(shí)細(xì)胞內(nèi)AMP/ADP明顯升高，可激活A(yù)MPK進(jìn)而抑制mTOR的活性[26]。而長期的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可以使骨骼肌細(xì)胞AMPK表達(dá)水平及其活性顯著升高，從而抑制mTOR的活性[27]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與C組相比，H組大鼠骨骼肌AMPK含量降低，mTOR含量和S6K1mRNA顯著性升高，運(yùn)動(dòng)組骨骼肌AMPK含量顯著性增加，高脂運(yùn)動(dòng)組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降，從而說明AMPK途徑可能參與了運(yùn)動(dòng)對mTOR/S6K1信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。由此推斷運(yùn)動(dòng)刺激或能量限制引起AMPK的激活，可直接磷酸化mTOR而抑制其活性，從而減輕高脂膳食引起mTOR過度激活而形成的IR。因此，長期的高脂膳食激活mTOR可能引起胰島素受體底物的作用減弱，從而導(dǎo)致IR的發(fā)生；而長期的有氧運(yùn)動(dòng)可激活A(yù)MPK，導(dǎo)致mTOR的下降，從而改善IR。

4 結(jié)論

4.1 長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號(hào)通路，導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。

4.2 有氧運(yùn)動(dòng)可激活A(yù)MPK，抑制mTOR的作用，AMPK/mTOR/S6K1可能在運(yùn)動(dòng)干預(yù)高脂膳食誘導(dǎo)IR形成中起著重要的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]Fingar DC，Blenis J.Target of rapamycin（TOR）：an integrator of nutrient and growth factor signals and coordinator of cell growth and cell cycle progression [J] .On cogene，2004，23（18）：3151-3171.

[2]牛培廣，史道華.雷帕霉素抑制mTOR 活性調(diào)控糖脂代謝的研究進(jìn)展[J].中國藥師，2010，13（11）：1583-1585.

[3]Niu YM，Yuan H，Zhang N，et al.The relationship between mTOR/S6K1 signaling pathway and insulin resistance and the study of aerobic exercise on this pathway [J].Chinese Journal of Applied Physiology，2010，26（4）：399-403.

[4]田雷，陳鋼.運(yùn)動(dòng)對高脂飲食大鼠下丘腦SOCS-3和BDNF以及瘦素抵抗的影響[J].廣州體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，33（6）：85-89

[5]Vinod PK，Venkatesh KV.Quantification of the effect of amino acids on an integrated mTOR and insulin signaling pathway [J].Mol Biosyst，2009，5（10）：1163-1173.

[6]王艷軍，尤雪娜，趙丹.PI3K、P70S6K在胰島素抵抗大鼠脂肪中的表達(dá)及其意義[J].中國老年學(xué)雜志，2008，28（6）：559-561.

[7]李樹穎.S6KI在肝臟胰島素抵抗及脂肪肝中作用機(jī)制的研究[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2009.

[8] Um SH，D'Alessio D，Thomas G.Nutrient overload，insulin resistance，and ribosomal protein S6 kinase 1，S6K1 [J].Cell Metab，2006，3（6）：393-402.

[9]吳瑜，趙蕾，李青，等.高脂飲食致C57BL/6J 小鼠脂肪組織中胰島素受體底物蛋白1異常磷酸化的分子機(jī)制[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，38（4）：350-354.

[10]王堯，萬立華，蔣樸，等.觀察炎癥狀態(tài)和高脂狀態(tài)對mTOR/S6K/IRS1-Ser和IRS1-Tyr信號(hào)通路表達(dá)的影響[J].免疫學(xué)雜志，2012，28（6）：497-501.

[11] Smadja-Lamere N，Shum M，Deleris P，et al.Insulin activates RSK（p90 ribosomal S6 kinase） to trigger a new negative feedback loop that regulates insulin signaling for glucose metabolism [J].J Biol Chem，2013，288（43）：31165-31176.

[12]苑紅.mTOR/S6K1信號(hào)通路在高脂飲食誘導(dǎo)C57BL/6小鼠胰島素抵抗發(fā)生中的作用及有氧運(yùn)動(dòng)對其影響的研究[D].天津：天津體育學(xué)院，2008.

[13] Wang T，Kusudo T，Takeuchi T，et al.Evodiamine inhibits insulin-stimulated mTOR-S6K activation and IRS1 serine phosphorylation in adipocytes and improves glucose tolerance in obese/diabetic mice [J].PLoS One，2013，8（12）：e83264

[14]Medeiros C，F(xiàn)rederico MJ，da Luz G，et al.Exercise training reduces insulin resistance and upregulates the mTOR/p70S6k pathway in cardiac muscle of diet-induced obesity rats [J].J Cell Physiol，2011，226（3）：666-674.

[15]Brazil D P，Hemmings B A.Ten years of protein kinase B signalling：A hard Akt to follow[J].Trend Biochem Sci，2001，26（11）：657- 664.

[16]張明軍.運(yùn)動(dòng)對RBP4誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠骨骼肌 PI3-K表達(dá)的影響[J].天津體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，25（4）：482-485.

[17]孟艷.PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞分化[D].北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2008.

[18]高晶.運(yùn)動(dòng)對糖尿病大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響[D].沈陽：中國醫(yī)科大學(xué)，2009.

[19]Christ-Roberts CY，Pratipanawatr T，Pratipanawatr W，et al.Exercise training increases glycogen synthase activity and GLUT4 expression but not insulin signaling in overweight nondiabetic and type 2 diabetic subjects [J].Metabolism，2004，53（9）：1233-1242.

[20]丁曉潔.高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達(dá)及其活性的影響[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，44（6）：680-684.

[21]張萌.AMPK通過mTOR途徑影響大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖的研究[D].廣州：廣州醫(yī)學(xué)院，2010.

[22] Saha AK，Xu XJ，Balon TW，et al.Insulin resistance due to nutrient excess：is it a consequence of AMPK downregulation [J].Cell Cycle，2011，10（20）：3447-3451.

[23]Tao R，Gong J，Luo X，et al.AMPK exerts dual regulatory effects on the PI3K pathway [J].J Mol Signal， 2010，5（1）：1-9.

[24]Cheng SW，F(xiàn)ryer LG，Carling D，et al.Thr 2446 is a novel mammamlian target of rapamycin（mTOR） phosphorylation site regulated by nutrient status [J].J Biol Chem，2004，279：15719-15722.

[25]Inoki K，Zhu T，Guan K L.TSC2 mediates cellular energy response to control cell growth and surviva [J].Cell，2003，115（5）：577-590.

[26]Matsakas A，Narkar VA.Endurance exercise mimetics in skeletal muscle [J].Curr Sports Med Rep，2010，9（4）：227-232.

[27]張國華，曾凡星.AMPK抑制運(yùn)動(dòng)中骨骼肌蛋白合成的研究進(jìn)展[J].中國運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2008 ，27（4）：536-539.第31卷第5期2015年10月