摘要：免疫組化在病理診斷中起著非常重要的作用。免疫組化技術(shù)在腫瘤分類、診斷、預(yù)后判斷方面廣泛應(yīng)用。隨著全自動免疫組化機廣泛應(yīng)用，作者把使用了一段時間全自動免疫組化儀后的體會與大家探討。本文通過對免疫組化技術(shù)的原理的探討，分析了全自動免疫組化機在應(yīng)用中注意事項及優(yōu)點，從而探討其應(yīng)對措施。

關(guān)鍵詞：免疫組化技術(shù)；全自動免疫組化染色機

免疫組織化學(xué)染色技術(shù)是病理技術(shù)中的一項重要染色方法，固免疫組織化學(xué)染色技術(shù)在目前病理診斷中起著非常重要的輔助作用，病理醫(yī)師在很多情況下需要借助免疫組化來明確病變的性質(zhì)、類型以及累及范圍等。免疫組化技術(shù)的應(yīng)用，為相關(guān)腫瘤組織抗原的治療以及預(yù)后供了重要的依據(jù)?？墒?，在當(dāng)前全自動免疫組化儀廣泛應(yīng)用的同時，也伴隨著一些注意事項及優(yōu)點。下面從免疫組化染色原理來探討以下幾點注意事項及優(yōu)點。

1 免疫組化染色技術(shù)的原理

免疫組化染色技術(shù)是通過抗體結(jié)合特殊抗原用DAB顯色及蘇木素復(fù)染的染色技術(shù)。這些抗體抗原的相互結(jié)合往往是以與這抗體相結(jié)合的酶元素來進行顯示。主要是因為沒有著色物質(zhì)的特性，抗原與抗體的結(jié)合使得一些有色物質(zhì)在抗體-抗原相結(jié)合的位置進行沉淀。酶沉淀的物質(zhì)主要包括蛋白質(zhì)、多肽、激素、病原體等，用光學(xué)顯微鏡才能看到。目前使用甲醛固定促使了蛋白的交和凝固，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，但對抗原決定鏃的結(jié)構(gòu)（苯環(huán)）不會產(chǎn)生影響。在使用蛋白酶進行消化后，將抗原決定鏃中的一些雜蛋白行清除，從而使其打開交聯(lián)，在通過使用微波和高壓鍋等熱抗原的修復(fù)工，使抗原決定鏃發(fā)生最大程度的暴露。從而提升免疫組化染色的敏感性[1]。

2 全自動免疫組化儀染色中注意以下幾個問題

2.1抗體的濃度，在滴加一抗時的量，一般在100ul（2～3滴）。

2.2組織的前期處理 組織固定時間以4～6h為宜，最長不超過24h，過長過短都會對染色結(jié)果產(chǎn)生不良影響。因組織固定時間過長會封閉或破壞組織的抗原活性，而固定時間過短則抗原彌散和組織結(jié)構(gòu)不清晰。目前一般都用中性福爾馬林固定，其組織蠟塊中心出現(xiàn)凹陷現(xiàn)象，且凹陷處組織變軟，不易切全。固定欠佳的組織免疫組化染色往往失真，某些較脆弱的抗原（如Ki-67等核抗原）易丟失，而細胞間的裂隙形成也容易造成膜抗原的假陽性。2.3冷凍過的組織，冷凍過的組織經(jīng)過常規(guī)固定，石蠟包埋后，原則上是可以用于免疫組化檢測，但冷凍過程有可能造成抗原的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，因而在一定程度上可能會影響到某些抗原的檢測效果。

2.4切片的選擇 滿意的切片質(zhì)量是保證染色質(zhì)量的基本要求，切片時要做到平整和厚薄適中，以4～6um為宜，避免出現(xiàn)皺褶，氣泡。為避免脫片對染色結(jié)果的影響，需染色前對玻片進行處理。最好使用配套的涂膠玻片，目前常用的是用APEs與多聚賴氨酸（Poly～L～Lysine）制成的涂膠玻片，其防脫效果較為滿意；因免疫組化修復(fù)時需要高溫，固選擇干凈的涂膠切片，如涂膠不均勻或切片不干凈，在封蓋緩沖液上滴加一抗會出現(xiàn)水紋狀，不會廣泛覆蓋組織上，固出現(xiàn)組織上斑塊狀著色。

2.5定時清洗保養(yǎng)儀器上的加熱片，去除污垢，防止加熱片加熱不均勻，檢查廢液管是否通暢，防止（蘇木蘇雜質(zhì)及脫落的組織堵塞管道）排液不暢導(dǎo)致夜間機器自動停止，檢查試劑桶與儀器的連接是否嚴(yán)密[2]。

3 全自動免疫組化儀的優(yōu)點[2]

采用全自動免疫組化染色儀進行免疫組化制片的有點，具有以下的優(yōu)點：①工作效率提高。全自動免疫組化染色機通過程序預(yù)設(shè)，可從脫蠟、抗原修復(fù)、滴加一抗、DAB顯色直至復(fù)染自動滿意運行；②免疫組化操作標(biāo)準(zhǔn)化。在Ventnaa BenchMarkGX全自動染色機上，實驗步驟均由電腦程序控制。機器本身帶有吹氣與液體封蓋膜混勻過程，已保證切片的染色均勻性，避免邊緣不著色；液體封蓋膜保護了滴加一抗后孵育時的溫度及抗原修復(fù)；每一步后都要清洗減少了切片的非特異性著色 [3]；③免疫組織化學(xué)試劑的標(biāo)準(zhǔn)化，全自動免疫組化機所有使用的試劑包括蘇木素、DAB顯色液、清洗緩沖液、油性封蓋膜、修復(fù)液、脫蠟液，都由Ventnaa公司生產(chǎn)，并進行嚴(yán)格的質(zhì)量檢測。確保每批試劑的穩(wěn)定性[3]；④便于玻片歸檔，自動打號機，標(biāo)簽不退色；⑤安全環(huán)保，配有廢液回收系統(tǒng)，可集中處理廢液；⑥全自動免疫組化儀有完整的質(zhì)控記錄，每張玻片都有詳細的實驗過程，可查看實驗時間，試劑的批次和效期。對于已經(jīng)過期的試劑，儀器會自動發(fā)出警報，避免過期試劑造成的實驗誤差；⑦方便科室的庫存管理，可以快速查看到庫存清單，及時訂購試劑。

全自動免疫組化機從質(zhì)量、速度、穩(wěn)定性等諸多方面，實現(xiàn)了病理檢查結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)化，可隨時開機進行實驗，自己調(diào)配時間，機器運行大約2h左右可以完成一批，既加快了實驗步驟，又減少了手工工作的繁瑣，并使免疫組化染色標(biāo)準(zhǔn)化，實驗步驟省力又省時，更加迅速病理報告的發(fā)出，更好的為臨床服務(wù)。Ventnaa BenchMarkGX全自動免疫組化染色儀備有廢液桶，可將實驗步驟所產(chǎn)生的廢液由有資質(zhì)的公司集中回收。為臨床病理診斷提供有力依據(jù)和可靠保證，為病理實驗室與國際標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)展接軌起到重要作用[4]。

參考文獻：

[1]羅玉鳳，曹金伶.簡介免疫組化染色機[J].診斷病理學(xué)雜志，2012，19（4）：31.

[2]余琦，李寧，楊江輝，等.全自動免疫組化染色儀與手工免疫染色的比較[J].局部手術(shù)學(xué)雜志，2010，19（2）：83-85.

[3]楊月紅，袁靜萍，袁修學(xué)，等.自動免疫組化儀的使用體會[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2011，27（3）：333-334.

[4]余琦，李寧，楊江輝，等.全自動免疫組化染色儀與手工免疫染色的比較[J].局部手術(shù)學(xué)雜志，2010，19（2）：83-85.編輯/馮焱