摘要：目的 觀察熱毒寧注射液對病毒性心肌炎（VMC）小鼠血漿IFN-γ及IL-6含量的影響，探討熱毒寧注射液對病毒性心肌炎小鼠的抗炎保護(hù)作用。方法 40只雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組：空白組（A組）、模型組（B組）、更昔洛韋注射液組（C組）、熱毒寧注射液組（D組），每組10只。A組腹腔注射0.5ml生理鹽水，連續(xù)注射10天；B、C、D各組首先腹腔注射巨細(xì)胞病毒（CMV）懸液0.1ml，0.5min后分別注射生理鹽水、更昔洛韋注射液、熱毒寧注射液各0.4ml，連續(xù)治療10d；10d后采集血液，采用ELISA法檢測血漿IFN-γ及IL-6含量。結(jié)果 與B組相比，C、D組小鼠的IFN-γ含量顯著升高，IL-6含量明顯降低（P<0.05），但C、D組相比無明顯差別。結(jié)論 熱毒寧注射液具有抗炎作用，對治療病毒性心肌炎小鼠具有一定的療效。

關(guān)鍵詞：病毒性心肌炎；熱毒寧注射液；IFN-γ；IL-6；小鼠

心肌炎主要是由病毒感染、化學(xué)物質(zhì)損傷或自身免疫引起的心肌局灶性或彌漫性炎性病變。心內(nèi)膜穿刺的病理檢查結(jié)果表明，大約60%心肌炎患者的心肌細(xì)胞病毒檢測為陽性[1]，這種因病毒感染心肌細(xì)胞而引起的心肌炎稱為病毒性心肌炎。大約有20%病毒性心肌炎患者逐漸演變?yōu)閿U(kuò)張型心肌病，其致殘致死率高[2]。能引發(fā)心肌炎的病毒較多，其中以柯薩奇病毒感染最為常見，CMV也是侵犯心肌的重要病毒之一。近年來，病毒性心肌炎患者發(fā)病率逐年上升，但具有明確療效的治療藥物卻為數(shù)不多。本課題研究了熱毒寧注射液對巨細(xì)胞病毒性心肌炎小鼠的抗炎保護(hù)作用。

1資料與方法

1.1實驗病毒、動物 巨細(xì)胞病毒由徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診實驗室保存，40只6～8周齡雄性BALB/c健康小鼠，體重25g左右，購自徐州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。

1.2實驗試劑、藥物 IFN-γ及IL-6測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，更昔洛韋注射液購自湖北科益藥業(yè)有限公司，熱毒寧注射液由連云港康緣藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.3動物分組、取材 將40只6周齡雄性BALB/c健康小鼠隨機(jī)分為4組：空白組（A組）、模型組（B組）、更昔洛韋注射液組（C組）、熱毒寧注射液組（D組），每組10只。A組腹腔注射0.5ml生理鹽水，連續(xù)注射10d；B、C、D各組首先腹腔注射10-4LogTCID50CMV懸液0.1ml[3]，0.5min后分別注射生理鹽水、更昔洛韋注射液、熱毒寧注射液各0.4ml，連續(xù)治療10d； 10d后眼球摘除取血法采集血液約1.0ml，離心后，-20℃冰箱中保存，以檢測IFN-γ及IL-6含量。

1.4 血漿IFN-γ及IL-6含量檢測 按照IFN-γ及IL-6試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作，檢測IFN-γ及IL-6含量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。多組定量資料間的比較進(jìn)行方差齊性檢驗，若方差齊采用單因素方差分析，若方差不齊采用Dunnett’s T3（3）檢驗。單因素方差分析中的兩兩比較采用SNK法檢驗，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與模型組相比，熱毒寧組、更昔洛韋組IFN-γ含量顯著升高，IL-6含量明顯降低（P<0.05），但熱毒寧組與更昔洛韋組相比較無統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 血漿IFN-γ及IL-6的濃度，以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示（pg/ml，x±s，n=10）

組別 IL-6 IFN-γ

A385.5±124.11567.2±121.6

B809.3±129.61016.8±112.5

C623.3±152.1b1276.8±175.3b

D615±112.4b1312±180.1b

注：與B組比較，bp<0.05。

3 討論

心肌炎是一種彌漫性或局限性的心肌炎性病變，其詳細(xì)發(fā)病機(jī)制尚不清楚，可能與病毒本身對心肌的直接損傷及其引起的免疫反應(yīng)有關(guān)[4]，目前缺乏特效的病毒根治方法。熱毒寧注射液是復(fù)方中草藥注射劑，有效成分為青蒿、金銀花、梔子，具有解熱、抗病毒、抗細(xì)菌、增加免疫等藥理作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，青蒿含倍半萜內(nèi)酯、黃酮類、青蒿酮，具有抗病毒、解熱、抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)痛等作用，同時還具有免疫抑制和細(xì)胞免疫促進(jìn)作用。

IL-6是一種多效型細(xì)胞因子，可調(diào)節(jié)多種組織細(xì)胞的生長與分化[5]，不僅在機(jī)體的免疫反應(yīng)、防御機(jī)能及造血調(diào)控中起重要作用，而且與臨床諸多疾病的病理變化密切相關(guān)。在病毒感染的急性期，特別是病毒血癥期，由于病毒成分的刺激和誘導(dǎo)，造成單核巨噬細(xì)胞為主的免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生大量IL-6，并釋放到血循環(huán)中，致血漿中IL-6含量顯著升高[6]。IFN-γ由CD8+T細(xì)胞和某些CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生，NK細(xì)胞亦可合成少量的IFN-γ[7]；這些細(xì)胞只有在免疫應(yīng)答中受到抗原或絲裂原活化后才能分泌IFN-γ，IFN-γ不僅能調(diào)節(jié)IL-6的產(chǎn)生，還能與其相互協(xié)同。本研究結(jié)果顯示，熱毒寧注射液組小鼠IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，但與更昔洛韋組無明顯差別，表明熱毒寧注射液具有抗炎作用，其可使病毒性心肌炎小鼠的IFN-γ含量升高，IL-6含量降低，抑制炎癥反應(yīng)。為臨床熱毒寧注射液治療病毒性心肌炎提供了實驗依據(jù)，但熱毒寧注射液治療病毒性心肌炎的具體作用靶點尚有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Luo H ， Wong J ， Wong B .Protein degradation systems in viral myocarditis leading to dilated cardiomyopathy [J].Cardiovascular Research， 2010， 85（2）： 347-356.

[2]Olimulder MA， Van Es J， Galjee MA.The importance of cardiac MRI as a diagnostic tool in viral myocarditis induced cardiomyopathy[J].Netherlands Heart Journal， 2009， 17（12）： 481-486.

[3]WangYX， Da Cunba V， MartinMcNuhy B. Inhibition of Rho-kinase by fasudil attenuated Angiotensin II induced cardiac hypertrophy in apolipoprotein E deficient mice[J].Eur J Pharmacol， 2005， 512（223）：215-222.

[4]Shauer A， Gotsman I， Keren A， et al. Acute？viral？myocarditis： current concepts in diagnosis and treatment[J].Isr Med Assoc J，2013， 15（3）： 180-185.

[5]Briso EM， Dienz O， Rincon M. Cutting Edge： Soluble IL-6R Is Produced by IL-6R Ectodomain Shedding in Activated CD4 T Cells[J].J Immunol，2008，180：7102-7106.

[6]Laure K.Case， Mohamad Moussawi， Brian Roberts. Histamine H1 receptor signaling regulates effector T cell responses and susceptibility to coxsackievirus B3-induced myocarditis[J]. Cell Immunol，2012，272（2）：269-274.

[7]Sylwester AW， Mitchell BL，Edgar JB，eta1. Broadly targeted human cytomegalovirus specific CD4+T and CD8+T cells dominate the memory compartments of exposed subjects[J].J ExpMed，2005， 202（5）：673-685.

編輯/馮焱