王 昀，郜 茜，綻永華

青海大學(xué)附屬醫(yī)院消化科，青海 西寧810000

乙型病毒性肝炎是一種免疫相關(guān)疾病。細(xì)胞及體液免疫均在肝細(xì)胞損害的發(fā)生中起著重要作用。肝功能失代償后反過來影響機(jī)體免疫系統(tǒng)，造成機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡，尤其是乙肝后肝硬化導(dǎo)致的脾大、脾功能亢進(jìn)更是對機(jī)體免疫細(xì)胞的毀滅性打擊。究竟感染乙型病毒性肝炎的患者在免疫系統(tǒng)上會(huì)發(fā)生什么變化?通過本研究，對其做初步探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取青海大學(xué)附屬醫(yī)院2012 年1 月-2013 年1 月門診及住院乙肝患者共73 例。慢性乙型肝炎患者34 例，男19 例，女15 例，年齡28 ～58 歲;乙肝后肝硬化患者39 例，男21 例，女18 例，年齡31 ～54 歲，其中Child A 級(jí)9 例，Child B 級(jí)15 例，Child C級(jí)15 例;隨機(jī)抽取門診健康體檢者20 名作為對照組，男11 例，女9 例，年齡24 ～47 歲。

1.2 標(biāo)本采集 慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組在明確診斷后于次日晨時(shí)抽取靜脈血5 ml 測定淋巴細(xì)胞亞群，另抽血化驗(yàn)乙肝后肝硬化HBV-DNA 的含量。健康對照組空腹體檢時(shí)抽取5 ml 靜脈血送檢驗(yàn)科測定淋巴細(xì)胞亞群。

1.3 檢測儀器及試劑 周圍靜脈血置于EDTA 二鉀鹽中用于淋巴細(xì)胞亞群的檢測。采用美國貝克曼EPICS XL-MCL ADC 流式細(xì)胞儀，試劑采用美國貝克曼CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 及 CYTO-STAT tetraCHROME CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5。HBV-DNA 定量檢測采用DA7600 熒光定量PCR 儀(達(dá)安)，試劑盒購自廣州中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司，試劑盒的線性范圍為102～108IU/ml，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用s 表示。組間比較采用單因素方差分析，并用SNK 經(jīng)行兩兩比較。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫指標(biāo)在對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組的比較 健康對照組與慢性乙型肝炎組、乙肝后肝硬化組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);慢性乙型肝炎組與乙肝后肝硬化組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見表1)。

表1 對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 1 Comparison of immune indexes in healthy control group，chronic hepatitis B group and liver cirrhosis after hepatitis B group(s，/μl)

表1 對照組、慢性乙型肝炎組及乙肝后肝硬化組免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 1 Comparison of immune indexes in healthy control group，chronic hepatitis B group and liver cirrhosis after hepatitis B group(s，/μl)

注:與對照組比較，※P ＜0.05;與慢性乙型肝炎組比較，△P ＜0.05。

組別 例數(shù) CD3 + CD4 + CD8 + CD56 + CD19+對照組 20 1 364.30 ±191.57 795.40 ±111.72 564.90 ±85.74 519.05 ±82.70 519.60 ±81.88慢性乙型肝炎 34 1 157.14 ±136.34※ 680.14 ±107.70※ 485.41 ±54.16※ 435.97 ±57.50※ 606.38 ±72.37※乙肝后肝硬化 39 739.33 ±149.11※△398.56 ±80.71※△ 363.82 ±58.61※△ 248.61 ±56.53※△ 460.33 ±92.51※△F 值 126.88 132.18 73.07 145.32 27.96 P 值＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 免疫指標(biāo)在不同乙肝后肝硬化Child 分級(jí)的比較 乙肝后肝硬化Child A 組與Child B、Child C 組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);乙肝后肝硬化Child B 與Child C 組CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD19+比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05，見表2)。

表2 乙肝后肝硬化Child 分級(jí)免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 2 Comparison of immune indexes in Child A，Child B and Child C of liver cirrhosis after hepatitis B (s，/μl)

表2 乙肝后肝硬化Child 分級(jí)免疫指標(biāo)的比較(s，/μl)Tab 2 Comparison of immune indexes in Child A，Child B and Child C of liver cirrhosis after hepatitis B (s，/μl)

注:與Child A 比較，※P ＜0.05;與Child B 比較，△P ＜0.05。

Child 分級(jí) 例數(shù) CD3 + CD4 + CD8 + CD56 + CD19+Child A 9 904.04 ±103.03 488.50 ±55.85 421.7 ±50.97 303.40 ±63.50 563.00 ±56.67 Child B 15 755.93 ±75.83※ 407.13 ±40.80※ 365.93 ±33.94※ 251.60 ±38.07※ 471.73 ±48.73※Child C 15 623.66 ±128.00※△ 336.06 ±69.11※△ 323.33 ±47.94※△ 212.73 ±39.98※△ 387.33 ±79.97※△F 值 20.52 20.69 16.01 11.17 21.42 P 值＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 HBV-DNA 含量在乙肝后肝硬化不同Child 分級(jí)中的比較 乙肝后肝硬化Child A 組HBV-DNA 含量［(1.99 ±0.16)×107IU/ml］與Child B［(2.05 ±0.22)×107IU/ml］、Child C 組［(2.02 ±0.16)×107IU/ml］比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05);乙肝后肝硬化Child B 組與Child C 組比較，HBV-DNA 含量的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

3 討論

肝臟是人體中最大的實(shí)質(zhì)性腺體，同時(shí)也具有多種作用，包括分泌膽汁、代謝、造血、合成凝血因子及吞噬、免疫功能。乙肝后肝硬化患者由于肝功能受損、病毒的長期慢性感染及門脈高壓癥的形成直接導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境的紊亂。加上門脈高壓癥時(shí)門脈壓力升高導(dǎo)致腸系膜靜脈及脾臟淤血，脾臟淤血后逐漸腫大。此時(shí)，脾臟的過分阻留作用及吞噬作用使血細(xì)胞逐漸減少，并最終導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞及體液免疫失衡［1］。

肝臟的功能紊亂在機(jī)體特異性免疫、非特異性免疫的紊亂中起著重要作用。本組資料顯示與對照組比較，慢性乙肝組及乙肝后肝硬化組患者CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計(jì)數(shù)明顯下降，隨著肝功能的下降(Child 分級(jí))，肝硬化患者機(jī)體中的CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計(jì)數(shù)明顯下降，這可能與乙肝后肝硬化門脈高壓癥直接導(dǎo)致脾臟免疫功能逐漸亢進(jìn)有關(guān)，主要表現(xiàn)為殺傷和清除機(jī)體正常功能的免疫細(xì)胞。CD56+的NK 細(xì)胞殺傷活性無主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)限制，不依賴抗體，具有抗感染、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用。本研究也顯示乙肝后肝硬化患者的特異性免疫及非特異性免疫隨著B 細(xì)胞及NK 細(xì)胞的減少而逐漸下降。脾臟作為淋巴細(xì)胞再循環(huán)庫，乙肝后肝硬化時(shí)脾臟為外周血補(bǔ)充免疫細(xì)胞的能力下降，從而導(dǎo)致外周免疫細(xì)胞如T、B 及NK 細(xì)胞的絕對數(shù)值減少，說明乙肝后肝硬化淋巴再循環(huán)有阻礙及抑制作用，不利于抵抗外來細(xì)菌及病毒。乙肝后肝硬化Child A級(jí)、Child B 級(jí)及Child C 級(jí)HBV-DNA 含量無明顯變化。提示不能根據(jù)病毒數(shù)量的多少來評(píng)估病情嚴(yán)重程度。

總之，乙肝后肝硬化及其導(dǎo)致的一系列機(jī)體紊亂對機(jī)體的體液及細(xì)胞免疫有抑制作用，具體表現(xiàn)在機(jī)體中的CD3+、CD4+、CD8+、CD56+及CD19+絕對計(jì)數(shù)明顯下降［2-4］，并隨著肝臟儲(chǔ)備功能的下降，免疫功能的紊亂逐漸加重，可以作為肝硬化患者病程發(fā)展及預(yù)后的監(jiān)測指標(biāo)。

［1］ Guo CH，Deng GJ，Sun TT. Immunological parameters on prophase of severe hepatitis B［J］. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi，2013，27(5):370-372.

［2］ Deng GJ，Guo CH，Sun TT. The characteristics of immunocompetent cells in peripheral blood on prophase of severe hepatitis B［J］. Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi，2012，26(4):256-258.

［3］ Dong X，Gong Y，Zeng H，et al. Imbalance between circulating CD4+ regulatory T and conventional T lymphocytes in patients with HBVrelated acute-on-chronic liver failure［J］. Liver Int，2013，33(10):1517-1526.

［4］ Lou YF，Dong W，Ye B，et al. Changes in peripheral T-lymphocyte subsets in acute-on-chronic liver failure patients with artificial liver support system［J］. Hepatogastroenterology，2012，59(115):814-817.