韓莉莉，沈曉麗，賴力，林賽梅，陳點(diǎn)，劉小晴，浦曉東，胡潔

福建省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，福建福州350001

福建漢族人群D1S1656基因座遺傳多態(tài)性及其在親權(quán)鑒定中的應(yīng)用

韓莉莉，沈曉麗，賴力，林賽梅，陳點(diǎn)，劉小晴，浦曉東，胡潔

福建省立醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，福建福州350001

目的研究福建漢族人群D1S1656的遺傳多態(tài)性及其在親權(quán)鑒定中的應(yīng)用價(jià)值。方法應(yīng)用熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)對(duì)日常檢案中收集的521名福建漢族無(wú)關(guān)個(gè)體血樣DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用ABI 3130基因分析儀對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapper v3.1軟件進(jìn)行基因分型，統(tǒng)計(jì)分析D1S1656基因座的多態(tài)信息，并與其他5個(gè)群體進(jìn)行比較。結(jié)果在D1S1656基因座發(fā)現(xiàn)17個(gè)等位基因，在福建漢族人群中的個(gè)體識(shí)別能力為0.948，非父排除率為0.665。結(jié)論D1S1656基因座在福建漢族人群具有高度多態(tài)性，在親權(quán)鑒定中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

福建；漢族；D1S1656；短串聯(lián)重復(fù)序列；親權(quán)鑒定

短串聯(lián)重復(fù)序列（STR）是基因組中廣泛分布、高度多態(tài)性的一類分子標(biāo)記，是群體遺傳學(xué)和法醫(yī)血液遺傳學(xué)高信息基因座的豐富來(lái)源。隨著DNA檢驗(yàn)在法庭科學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，新的STR遺傳標(biāo)記被相繼發(fā)現(xiàn)，該研究即對(duì)福建漢族人群D1S1656基因座進(jìn)行群體遺傳學(xué)調(diào)查并探討其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。該研究采用熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)，對(duì)521名漢族無(wú)關(guān)個(gè)體進(jìn)行了D1S1656基因座的分型檢測(cè)，分析其多態(tài)性，計(jì)算其個(gè)體識(shí)別能力和非父排除能力，驗(yàn)證其應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

日常檢案中收集的521名漢族無(wú)關(guān)個(gè)體血樣、PowerPlex 21TM。

1.2 方法

Chelex-100法提取血液DNA[1]。采用10 uL體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件嚴(yán)格按照使用說(shuō)明書操作，擴(kuò)增產(chǎn)物在3130基因分析儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用Data Collection v2.1軟件收集電泳信息，GeneMapper ID v3.1軟件分析基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

用χ2檢驗(yàn)判斷D1S1656的基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，采用PowerStatsV12軟件計(jì)算雜合度H（heterozygosity，H）、個(gè)體識(shí)別力DP（power of discrimination，DP）、非父排除率EP（Power of Exclusion，EP）和多態(tài)信息總量PIC（polymorphism information content，PIC），采用Arlequin v3.5軟件比較不同群體間等位基因頻率差異。

2 結(jié)果

2.1 等位基因及分布頻率

在521名福建漢族無(wú)關(guān)個(gè)體中，D1S1656基因座檢測(cè)到17種等位基因，發(fā)現(xiàn)了某些在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道的等位基因14.1、16.1和20，基因頻率分布從0.0010到0.3109。χ2檢驗(yàn)證實(shí)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，見(jiàn)表1。

表1 福建漢族人群D1S1656基因座的等位基因分布頻率

2.2 法醫(yī)學(xué)參數(shù)

根據(jù)PowerStatsV12軟件計(jì)算出雜合度H為0.835，個(gè)體識(shí)別力DP為0.948，非父排除率EP為0.665和多態(tài)信息總量PIC為0.80。

2.3 福建人群與其它群體的等位基因頻率分布比較

福建漢族人群與文獻(xiàn)報(bào)道[3-7]的群體在D1S1656基因座上未存在頻率分布差異，見(jiàn)表2。

表2 福建漢族人群與其它地區(qū)漢族人群D1S1656基因座基因頻率比較

2.4 D1S1656基因座在親權(quán)鑒定中的應(yīng)用

將D1S1656基因座應(yīng)用于321例親權(quán)鑒定案例，其中三聯(lián)體162例，二聯(lián)體159例。162例三聯(lián)體中，有21例排除親子關(guān)系，其中D1S1656基因座排除9例，排除率為42.9%；159例二聯(lián)體中，38例排除親子關(guān)系，其中D1S1656基因座排除21例，排除率為55.3%。

3 討論

D1S1656基因座位于1號(hào)染色體1q42，是4核苷酸重復(fù)基因座，核心序列是TAGA，具有低影子帶、高度多態(tài)性。目前，關(guān)于漢族人群D1S1656基因座的遺傳多態(tài)性已有報(bào)道,但由于STR的基因型分布在不同種族、不同人群和不同地區(qū)有所不同,甚至差異顯著，國(guó)際遺傳學(xué)DNA委員會(huì)倡導(dǎo)建立各地區(qū)各種族的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù),作為相應(yīng)群體的代表。因此，建立福建漢族D1S1656的遺傳多態(tài)性并分析其應(yīng)用價(jià)值極有必要,是進(jìn)行個(gè)體識(shí)別、親子鑒定等DNA檢驗(yàn)的前提條件。

該研究顯示,該基因座的等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,表明適合作為福建漢族人群的遺傳學(xué)標(biāo)志。與以往報(bào)道比較，D1S1656在不同地區(qū)人群中的等位基因頻率分布有一定差異，在福建漢族人群首先發(fā)現(xiàn)了14.1、16.1、20等位基因。張慶霞[3]、郝宏蕾[4]、劉向陽(yáng)[5]、王冰梅[6]、尚杰[7]等分別調(diào)查了D1S1656基因座在北京、浙江、河南、吉林、潮汕漢族群體的遺傳多態(tài)性，該研究結(jié)果與上述地區(qū)漢族人群的頻率分布稍有不同,但經(jīng)比較分析差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明福建漢族人群在發(fā)生遷徙和混雜的過(guò)程中對(duì)總體基因的影響有限。

通過(guò)該組資料，獲得D1S1656基因座在福建漢族人群的分布特征，并將其應(yīng)用于親子鑒定案例，說(shuō)明D1S1656基因座在親權(quán)鑒定中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，D1S1656基因座在福建漢族人群具有較高多態(tài)性，適合法醫(yī)學(xué)個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定以及DNA數(shù)據(jù)庫(kù)的建立。

[1]Walsh PS,Metzger DA,Higuchi R.Chelex-100 as a medium for simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic matrrial[J].Bio Techniques,1991（10）:506-513.

[2]http://www.promega.com/geneticidtools/powerstats[EB/OL].

[3]張慶霞，楊劍，劉雅誠(chéng)，等.北京地區(qū)漢族人群16個(gè)非CODIS STR基因座的遺傳多態(tài)性[J].法醫(yī)學(xué)雜志，2013,29（3）：206-208.

[4]郝宏蕾，吳微微，呂德堅(jiān)，等.浙江漢族人群D1S1656、SE33和D2S1338基因座的遺傳多態(tài)性調(diào)查[J].刑事技術(shù)，2012(2):53-54.

[5]劉向陽(yáng)，黃艷梅，郭利偉，等.河南漢族人群4個(gè)STR基因座遺傳多態(tài)性[J].中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志，2012,27（1）：63-64.

[6]王冰梅，莊文越，項(xiàng)小豐，等.吉林地區(qū)漢族人群12個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26(22)：2072-2075.

[7]尚杰，胡盛平.潮汕漢族人群短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性研究[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013,26（4）：193-196，202.

Establishment and Application of D1S1656 in Han Populationfrom Fujian Province

HAN Li-li，SHEN Xiao-li，LAI Li，LIN Sai-mei，CHEN Dian，LIU Xiao-qing，PU Xiao-dong，HU Jie
Central Laboratory of Fujian Province-owned hospital，F(xiàn)uzhou，F(xiàn)ujian Province，350001 China

ObjectiveTo investigate the genetic polymorphism of D1S1656 STR loci in Han population from Fujian province and to study its application in paternity testing.MethodsFluorescent dye labeling multiplex STR-PCR,capillary electrophoresis and GeneMapper v3.1 software were adopted in genotyping 521 unrelated samples.D1S6156 STR database was established and analyzed.Population comparison was conducted between Han population in Fujian province and 5 other population．ResultsWe observed the distribution of D1S1656 STR loci meet Hardy-Weinberge equilibrium and was not different from other 5 population(χ2test，P>0．05).The power of discrimination was 0.948,and the power of exclusion was 0.665．ConclusionThe D1S1656 loci was relatively highly genetic polymorphic in Fujian Han population and could be used for paternity testing．

Fujian；Han population；D1S1656；STR；Paternity testing

DF795.1

A

1672-5654（2015）03（c）-0003-02

2015-01-07）

福建省臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目資助[閩衛(wèi)科教（2012）149號(hào)]。

韓莉莉（1981-），女，山東平原人，碩士，主管技師，主要從事法醫(yī)DNA檢驗(yàn)、心血管病基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)診斷研究。