白曉萌，楊 娟，劉翠青*

(1.河北省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050031;2.河北省兒童醫(yī)院新生兒科，河北石家莊050031)

新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌分布和耐藥性分析

白曉萌1，楊 娟2，劉翠青2*

(1.河北省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北石家莊050031;2.河北省兒童醫(yī)院新生兒科，河北石家莊050031)

目的探討新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌分布、抗生素敏感和耐藥情況，為臨床診治提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法 對(duì)臨床診斷的28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)和耐藥性以及敏感性進(jìn)行分析。結(jié)果28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液病原菌分布:單菌株27例，雙菌株1例。其中革蘭陰性菌20株(68.96%)，革蘭陽性菌8株(27.59%)，白色念珠菌1株(3.45%)。革蘭陰性菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、哌拉西林的耐藥率達(dá)80.00%以上，對(duì)頭孢唑林、四環(huán)素、頭孢噻肟的耐藥率在60.00%以上。共檢出產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌8株，未檢出對(duì)美羅培南耐藥的革蘭陰性菌。革蘭陽性菌大部分對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對(duì)萬古霉素耐藥的革蘭陽性菌。結(jié)論新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌以革蘭陰性菌為主，對(duì)多種抗生素耐藥。

腦膜炎;細(xì)菌感染;抗藥性

新生兒化膿性腦膜炎是新生兒期嚴(yán)重的感染性疾病，約25%新生兒敗血癥會(huì)并發(fā)化膿性腦膜炎［1］。近年來由于抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥菌和難治性化膿性腦膜炎有逐年增高的趨勢(shì)。本研究對(duì)我院新生兒科近3年收治的28例化膿性腦膜炎患兒腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，了解菌群分布特點(diǎn)及細(xì)菌耐藥性，旨在為臨床治療合理使用抗生素提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年5月—2013年12月在河北省兒童醫(yī)院診斷為化膿性腦膜炎的患兒28例，男性11例，女性17例，年齡5～28 d，平均14 d，全部患兒均抽取腦脊液經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)陽性。進(jìn)一步行藥敏試驗(yàn)和耐藥性分析。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株 嚴(yán)格無菌操作后抽取腦脊液，離心后取沉渣進(jìn)行分離培養(yǎng)，并用美國BD公司的BD PHOENIX100全自動(dòng)微生物鑒定儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥物敏感試驗(yàn)。

1.2.2 質(zhì)控菌株 采用質(zhì)控菌株大腸埃希菌(ATCC25922)、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、綠膿假單胞菌(ATCC27853)，進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥物敏感質(zhì)量控制。

1.2.3 確證試驗(yàn) 依據(jù)美國實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)2004標(biāo)準(zhǔn)采用頭孢噻肟/克拉維酸和頭孢噻肟、頭孢他啶/克拉維酸和頭孢他啶2組藥物敏感紙片作為大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的確證試驗(yàn)。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)用品 藥物敏感紙片由英國Oxoid公司提供，哥倫比亞血平板、巧克力平板由貝瑞特生物技術(shù)公司提供，M-H瓊脂由北京天壇生物技術(shù)公司生產(chǎn)。

2 結(jié) 果

2.1 新生兒腦脊液病原菌分布 共檢出28例腦脊液培養(yǎng)陽性標(biāo)本，分離出病原菌29株，除1例分離出2種菌株(1種為屎腸球菌，1種為白色念球菌)外，其余27例均為單一菌種生長(zhǎng)。包括革蘭陰性細(xì)菌20株(68.96%)，革蘭陽性細(xì)菌8株(27.59%)，真菌1株(3.45%)。見表1。

2.2 細(xì)菌耐藥情況及對(duì)抗生素的敏感性分析 革蘭陰性細(xì)菌中，大腸埃希菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、哌拉西林的耐藥率在80.00%以上，對(duì)阿莫西林/克拉維酸、頭孢唑林、四環(huán)素、頭孢噻肟的耐藥率在60.00%以上，對(duì)其他革蘭陰性細(xì)菌耐藥性較高的抗生素為阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林、氨曲南、頭孢唑林、四環(huán)素、復(fù)方新諾明，未檢出對(duì)美羅培南耐藥的革蘭陰性細(xì)菌，共檢測(cè)出產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶菌(ESBLs)8株，ESBLs的檢出率為40.00%，其中大腸埃希菌7株，肺炎克雷伯菌1株。見表2。

革蘭陽性細(xì)菌中，大部分對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對(duì)替考拉寧、萬古霉素耐藥的革蘭陽性細(xì)菌。見表3。

表1 28例新生兒化膿性腦膜炎腦脊液病原菌構(gòu)成比Table1 Pathogen ratios in cerebrospinal fluid 28 cases of neonatal purulent meningitis

表2 腦脊液培養(yǎng)檢出革蘭陰性菌耐藥性分析Table 2 Drug resistance of gram negative bacteria in cerebrospinal fluid culture (菌株數(shù)，%)

表1 (續(xù))

表3 腦脊液培養(yǎng)檢出革蘭陽性菌耐藥性分析Table 3 Drug resistance of gram positive bacteria in cerebrospinal fluid culture (菌株數(shù)，%)

2.3 預(yù)后與并發(fā)癥 28例患者住院治療時(shí)間27～85 d。治愈26例(92.85%)，病情危重、家屬放棄治療后死亡 2例(7.15%)。發(fā)生并發(fā)癥 8例(28.57%)，其中腦積水2例，硬膜下積液1例，聽力障礙2例，腦軟化2例，腦室膜炎1例。

3 討 論

新生兒化膿性腦膜炎臨床表現(xiàn)不典型，顱內(nèi)壓增高出現(xiàn)晚，又常缺乏腦膜刺激征，早期診斷較困難。腦脊液檢查是診斷新生兒化膿性腦膜炎的金標(biāo)準(zhǔn)，也是指導(dǎo)應(yīng)用抗生素并關(guān)系到預(yù)后的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。國外多主張任何懷疑敗血癥的患兒應(yīng)常規(guī)行腦脊液檢查;傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為化膿性腦膜炎的病原菌與敗血癥一致，但近年來的研究結(jié)果并非完全如此［2］，有些腦膜炎可以無敗血癥。由于大部分患兒在進(jìn)行腰椎穿刺之前已經(jīng)應(yīng)用了抗生素，故腦脊液中細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率較低。雖然研究提示降鈣素原和C反應(yīng)蛋白對(duì)敗血癥早期診斷有一定價(jià)值［3］，但是腦脊液細(xì)菌培養(yǎng)陽性結(jié)果有助于確診，其藥物敏感分析結(jié)果有助于指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素。

本研究結(jié)果顯示，革蘭陰性菌占68.96%，而其中居首位的為大腸埃希菌;革蘭陽性菌為27.59%，其中居首位的為溶血性葡萄球菌、屎腸球菌;檢出真菌1株，為白色念球菌。表明革蘭陰性菌是我院新生兒化膿性腦膜炎的主要致病菌。本研究中所檢出1例白色念珠菌患兒應(yīng)用有創(chuàng)呼吸機(jī)8 d，系極低出生體質(zhì)量?jī)?出生體質(zhì)量1 050 g)，臨床考慮為院內(nèi)感染。各個(gè)國家和地區(qū)病原菌分布不同，西方國家以B族鏈球菌為主，而亞洲新生兒感染以革蘭陰性桿菌為主［4-5］。賴源等［6］報(bào)道新生兒化膿性腦膜炎的菌種構(gòu)成以革蘭陽性球菌為主，但革蘭陰性桿菌有上升的趨勢(shì)，且新生兒化膿性腦膜炎病原菌主要是表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、溶血性葡萄球菌、不動(dòng)桿菌屬等。我們認(rèn)為原因主要是由于患兒感染的時(shí)間、經(jīng)濟(jì)生活環(huán)境和免疫力的不同，導(dǎo)致病原菌分布、耐藥性和臨床結(jié)局也不同。尤其近年來由于嬰兒暖箱中的用水、霧化器、呼吸機(jī)及管路、有創(chuàng)性治療等污染造成的院內(nèi)感染的增多，增加了危重兒尤其是早產(chǎn)兒患化膿性腦膜炎的風(fēng)險(xiǎn)［7］。

本研究結(jié)果顯示，常見致病菌大腸埃希菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、哌拉西林的耐藥率在80.00%以上，對(duì)頭孢唑林、四環(huán)素、頭孢噻肟的耐藥率也在60.00%以上，未檢出對(duì)美羅培南耐藥的革蘭陰性細(xì)菌。有研究［8］結(jié)果顯示，引起腦膜炎的大腸埃希菌70%～85%具有K1抗原，其對(duì)吞噬作用具有抵抗力，腦脊液中K1抗原的量及持續(xù)時(shí)間與化膿性腦膜炎的輕重、預(yù)后、病死率和后遺癥均直接相關(guān)。這也證明大腸埃希菌等革蘭陰性桿菌不僅耐藥性高，且難以肅清［9］。本研究結(jié)果顯示，革蘭陽性細(xì)菌中，常見致病菌均對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明、頭孢西丁、紅霉素耐藥，未檢出對(duì)替考拉寧、萬古霉素耐藥的革蘭陽性細(xì)菌。耐藥菌株的不斷擴(kuò)大，是近年來難治性化膿性腦膜炎增多的主要原因之一［10］，不僅增加了化膿性腦膜炎的治療難度和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也增加了并發(fā)癥和病死率。因此，嚴(yán)格掌握抗菌藥物的使用指證和合理規(guī)范應(yīng)用抗生素是降低細(xì)菌耐藥率應(yīng)長(zhǎng)期堅(jiān)持的原則［11］。

綜上所述，我院新生兒化膿性腦膜炎腦脊液培養(yǎng)以革蘭陰性菌為主，培養(yǎng)結(jié)果耐藥率高，且存在多重耐藥，根據(jù)腦脊液培養(yǎng)及藥物敏感結(jié)果對(duì)患兒早期診斷并進(jìn)行及時(shí)有效的治療，合理應(yīng)用抗菌藥物，才能有效減少不良預(yù)后及病死率。

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(本文編輯:趙麗潔)

Pathogens and drug resistance analysis of cerebrospinal fluid in neonatal purulent meningitis

BAI Xiao-meng1，YANG Juan2，LIU Cui-qing2*
( 1． Department of Laboratory，the Children's Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，China; 2． Department of Neonatology，the Children's Hospital of Hebei Province，Shijiazhuang 050031，China)

Objective To investigate the bacteria distribution of neonatal purulent meningitis，antibiotic sensitivity and resistance，and provide laboratory evidence for clinical diagnosis and treatment.MethodsTwenty-eight cases diagnosed purulent meningitis were recruited into this study.The bacterial culture，drug resistance and sensitivity of cerebrospinal fluid from the patients were analyzed.Results The pathogen distribution in the cerebrospinal fluid of 28 cases with neonatal purulent meningitis:27 cases with cultured single strain，just1 case with two strains.In this findings，there were 20 gram-negative bacteria strains(68.96%)，8 gram-positive bacteria strains(27.59%)，1 candida albicans strain (3.45%).The drug resistant rate of gram-negative bacteria to ampicillin，cotrimoxazole，piperacillin was more than 80.00%;on the other hand，it was up to 60.00%to cefazolin，tetracycline，cefotaxime.Eight strains of extended spectrum beta lactamase bacteria were tested in this study.Gram-negative bacteria resistant to meropenem and amikacin were not detected.Most gram-positive bacteria showed drug resistance to ampicillin，cotrimoxazole，erythromycin，cefoxitin.There was none detected in gram-positive bacteria resistant to vancomycin.ConclusionGram-negative bacteria was the major pathogens in neonatal purulent meningitis，and they were resistant to multiple antibiotics.

meningitis;bacterial infection;drug resistance

R515.2

A

1007-3205(2015)02-173-04

2014-08-05;

2014-10-20

白曉萌 (1986-)，男，河北冀州人，河北省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事臨床檢驗(yàn)學(xué)研究。

*通訊作者

10.3969/j.issn.1007-3205.2015.02.019