褚茂平，胡晨，周愛(ài)華，王慧穎，潘璐璐，仇慧仙，吳蓉洲，趙仙先

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院 心血管內(nèi)科，上海 200433；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 兒童中心，浙江 溫州 325015；3.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院 兒童心臟中心，溫州醫(yī)科大學(xué) 心血 管發(fā)育與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究所，浙江 溫州 325027）

·論 著·

川崎病血清特異相關(guān)miR-23a對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)及遷移的影響

褚茂平1，胡晨2，周愛(ài)華2，王慧穎2，潘璐璐3，仇慧仙3，吳蓉洲3，趙仙先1

（1.第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院 心血管內(nèi)科，上海 200433；2.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 兒童中心，浙江 溫州 325015；3.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院育英兒童醫(yī)院 兒童心臟中心，溫州醫(yī)科大學(xué) 心血 管發(fā)育與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究所，浙江 溫州 325027）

目的：探討川崎?。↘D）血清特異相關(guān)miR-23a對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）生長(zhǎng)及遷移的影響。方法：采用Real-time PCR驗(yàn)證前期篩選獲得的川崎病急性期血清特異性表達(dá)的miR-23a，生物信息學(xué)分析結(jié)合炎癥細(xì)胞因子及受體芯片檢測(cè)來(lái)篩選靶基因；共分4組，miR-23a mimic組、mimic NC組、miR-23a inhibitor組、inhibitor NC組，通過(guò)miR-23a模擬物（mimic）及抑制物（inhibitor）的轉(zhuǎn)染調(diào)節(jié)HUVECs內(nèi)miR-23a的表達(dá)，用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化，用劃痕試驗(yàn)和Transwell小室法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果：Real-time PCR發(fā)現(xiàn)miR-23a在KD急性期患兒血清中表達(dá)水平明顯高于KD恢復(fù)期、正常對(duì)照組及發(fā)熱對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；與mimic NC組對(duì)比，上調(diào)miR-23a表達(dá)可促進(jìn)HUVECs增殖、遷移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與inhibitor NC組對(duì)比，下調(diào)miR-23a表達(dá)可抑制HUVECs的增殖、遷移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：miR-23a在急性期KD患兒血清中表達(dá)上調(diào)，干預(yù)HUVECs內(nèi)miR-23a表達(dá)可影響其增殖和遷移，提示miR-23a異常表達(dá)可能參與KD的發(fā)生發(fā)展。

川崎??；microRNA-23a；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；增殖

川崎病（kawasaki disease，KD）又稱(chēng)皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，主要發(fā)生在5歲以下嬰幼兒，是以全身血管炎為主要表現(xiàn)的急性發(fā)熱出疹性疾病。自日本學(xué)者川崎富作于1967年首次報(bào)道[1]以來(lái)，世界各國(guó)均有報(bào)道，但以亞裔發(fā)病率最高。目前，在我國(guó)KD已經(jīng)取代了風(fēng)濕熱成為后天性心臟病的主要發(fā)病原因之一，其中冠狀動(dòng)脈損害（coronary artery lesions，CAL）是KD最嚴(yán)重的并發(fā)癥，其發(fā)病率和耐藥率逐年上升[2]，但至今KD的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。MicroRNA（miRNA）為長(zhǎng)度約22 nt的內(nèi)源性短鏈RNA，通過(guò)與編碼蛋白質(zhì)mRNA互補(bǔ)結(jié)合，沉默其表達(dá)，參與調(diào)控細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡等一系列過(guò)程[3]。miR-23位于染色體19p13.13，于多種腫瘤組織中表達(dá)均上調(diào)，且有報(bào)道稱(chēng)其與心肌肥厚、肌肉萎縮有關(guān)[4]，見(jiàn)表1。其靶基因主要有ETNK1、FUT9、RAB39B、TOP1等，這些靶基因主要與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、DNA復(fù)制、物質(zhì)代謝及核苷酸代謝有關(guān)；也有研究表明miR-23a與促炎細(xì)胞因子的表達(dá)有正相關(guān)性。

本研究首先驗(yàn)證了經(jīng)過(guò)Exiqon miRCURY LNA 芯片篩選出KD血清中特異表達(dá)的miR-23a在不同疾病中的差異表達(dá)情況，通過(guò)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells， HUVECs）合成miR-23a mimic/inhibitor轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞并觀察其對(duì)細(xì)胞增殖、遷移功能的影響，旨在進(jìn)一步闡明KD血清中特異表達(dá)的miR-23a對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響。

1 材料和方法

1.1 一般資料 收集2013年3月至2013年12月在溫州醫(yī)科大學(xué)附屬育英兒童醫(yī)院確診的20例KD急性期患兒（KD組）血清，其中男12例，女8例，年齡＜1歲6例，1～3歲10例，＞3歲4例。入選標(biāo)準(zhǔn)：參照第7版《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》KD診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常對(duì)照血標(biāo)本采集自同時(shí)期同醫(yī)院的健康體檢者20例（正常對(duì)照組），選擇未發(fā)現(xiàn)器質(zhì)性疾病且血液相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)異常及年齡、性別與KD患兒相匹配的兒童，其中男12例，女8例，年齡＜1歲6例，1～3歲10例，＞3歲4例。發(fā)熱對(duì)照血標(biāo)本采集自同時(shí)期同醫(yī)院急性上呼吸道感染的發(fā)熱患兒20例（發(fā)熱對(duì)照組），未發(fā)現(xiàn)器質(zhì)性疾病且血液相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)異常，且年齡、性別與KD患兒均相匹配。血常規(guī)檢查KD組急性期患兒WBC、CRP和ECR都升高，見(jiàn)表2。

表1 miR-23a簡(jiǎn)介

表2 KD急性期患兒和對(duì)照組血常規(guī)比較（n=20，±s）

表2 KD急性期患兒和對(duì)照組血常規(guī)比較（n=20，±s）

與發(fā)熱對(duì)照組、正常對(duì)照組比：aP＜0.05

1.2 材料 細(xì)胞株：HUVEC株購(gòu)自ATCC公司，miR-23a mimics、NC mimics、miR-23a inhibitor，inhibitor NC（上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司）；Lipofectamine 2000 Reagent、Troizol LS Reagent （invirtrogen公司）；1640培養(yǎng)基、0.25% EDTA、PBS（GIBCO公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；CCK-8（日本同仁化學(xué)公司）；Transwell小室（美國(guó)Corning公司）；6孔板、12孔板、24孔板、96孔板（美國(guó)Costar公司）；miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real-time PCR試劑（上海楚天生物有限公司）；其他引物均由上海楚天生物有限公司合成，引物序列見(jiàn)表3。

表3 本研究中所用到的引物序列

1.3 方法

1.3.1 分組方法：共分為4組：miR-23a mimic組（轉(zhuǎn)染miR-23a模擬物，濃度為40 nmol/L）、mimic NC對(duì)照組（轉(zhuǎn)染NC陰性對(duì)照模擬物，濃度為40 nmol/L）、 miR-23a inhibitor組（轉(zhuǎn)染miR-23a抑制物，濃度為40 nmol/L）及inhibitor NC組（轉(zhuǎn)染NC抑制物，濃度為40 nmol/L）。

1.3.2 RNA的提?。簩⒉杉娜獦?biāo)本2 mL置于真空EDTA抗凝管，2 000 r/min， 離心10 min，取上層血清，按Trizol LS試劑說(shuō)明書(shū)抽提樣品總RNA，焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水溶解RNA，取RNA溶 液1μL于Nano 2000上檢測(cè)RNA的濃度和純度，以O(shè)D 260/OD 280比值在1.8～2.2為合格標(biāo)準(zhǔn)，保存于-80 ℃超低溫冰箱或立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3.3 miR-23a表達(dá)的驗(yàn)證：采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將1 μg總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。20 μL反應(yīng)體系：包括4μL 5 X reaction buffer，2μL Enzymemix，14 μL稀釋后的總RNA模板。反應(yīng)條件：42 ℃，60 min， 95 ℃，5 min。以cel-miR-39為外參，采用Real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證，混合cDNA模板，nucleasefreewater 和SYBRTMGreenmastermix PCR，反應(yīng)條件為：95 ℃ 預(yù)變性10 min（95 ℃變性10 min、60 ℃退火1 min、72 ℃延伸1 min）×40個(gè)循環(huán)，溶解曲線：95 ℃ 5 s，65 ℃ 1 min，95 ℃ 30 s，冷卻40 ℃ 30 s。采用Biorad CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀器進(jìn)行，所有樣品3個(gè)復(fù)孔，記錄Ct值（即每個(gè)反應(yīng)管中熒光信號(hào)到達(dá)所設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)），采用2-△△CT分析各組間相對(duì)表達(dá)差異。

1.3.4 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力：按CCK-8試劑說(shuō)明書(shū)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVECs接種于96孔板，采用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，分別處理12、24、48、72 h后，每孔不同的時(shí)間點(diǎn)加入10μL的CCK-8試劑，避光保存置于培養(yǎng)箱2 h后用酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值（450 nm），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。根據(jù)下列公式計(jì)算：抑制率（%）=（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/陰性對(duì)照OD值）×100%。

1.3.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力：用記號(hào)筆在6孔板背后畫(huà)線，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVECs接種于6孔板，垂直于背后的橫線劃痕，用PBS洗滌細(xì)胞去除劃下的細(xì)胞，加至無(wú)血清培養(yǎng)基，采用Lipofectamine 2 000轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，按24、48、72 h取 樣，倒置顯微鏡下拍照，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.6 Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HUVECs接種于24孔板，采用Lipofectamine 2 000轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，取0.3 mL細(xì)胞懸液，加入Transwell小室上室中，下室加入含有50 ng/mL FBS的培養(yǎng)基0.6 mL，置入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。 取出Transwell吸去上室細(xì)胞，拭去上層底膜上面的細(xì)胞，于3%甲醛中固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染色15 min。顯微鏡選取4個(gè)視野，觀察遷移至下層的細(xì)胞并進(jìn)行拍照，計(jì)數(shù)每個(gè)視野的平均細(xì)胞量。遷移抑制率（%）=（對(duì)照組遷移細(xì)胞平均數(shù)-轉(zhuǎn)染組遷移細(xì)胞平均數(shù)）/對(duì)照組遷移細(xì)胞平均數(shù)×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用±s表示；計(jì)數(shù)資料用頻率（%）表示；計(jì)量資料中2組連續(xù)性數(shù)據(jù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；多樣本平均數(shù)間比較采用單因素方差分析方法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-23a在KD患兒血清中的表達(dá) RT-qPCR產(chǎn)物溶解曲線均單峰，特異性擴(kuò)增相應(yīng)的miRNA，見(jiàn)圖1。與KD恢復(fù)期組、發(fā)熱對(duì)照組、正常對(duì)照組相比，KD急性期組血清中miR-23a的表達(dá)量明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)圖2。

圖1 qPCR驗(yàn)證miR-23a的表達(dá)

圖2 miR-23a的差異表達(dá)

2.2 miR-23a對(duì)HUVECs增殖功能的影響 miR-23a mimic和miR-23a inhibitor及mimic NC及inhibitor NC組轉(zhuǎn)染HUVECs 24、48和72 h后，miR-23a mimic可 以促進(jìn)HUVECs的增殖，與陰性對(duì)照（mimic NC）比差 異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；miR-23a inhibitor可以抑制HUVECs的增殖，與inhibitor NC（Inhibitor NC）比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與miR-23a inhibitor組比，miR-23a mimic組可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖（P＜0.05），見(jiàn)表4。

2.3 miR-23a對(duì)HUVECs遷移功能的影響 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室法檢測(cè)結(jié)果顯示，miR-23a mimic可以促進(jìn)HUVECs的遷移，而miR-23a inhibitor 可以減弱HUVECs的遷移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05），與miR-23a inhibitor組比，miR-23a mimic組可以促進(jìn)細(xì)胞的遷移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖3-5。

表4 miR-23a干預(yù)對(duì)HUVECs增殖的影響（±s）

表4 miR-23a干預(yù)對(duì)HUVECs增殖的影響（±s）

與mimic NC組比：aP＜0.05；與inhibitor NC組比：bP＜0.05

圖3 miR-23a對(duì)HUVECs遷移的影響（劃痕實(shí)驗(yàn)，結(jié)晶紫染色，×200）

圖4 miR-23a對(duì)HUVECs遷移的影響（Transwell小室法，結(jié)晶紫染色，×100）

圖5 miR-23a對(duì)HUVECs遷移的影響（Transwell小室法）

3 討論

KD是一種以全身血管炎為主要病變的急性發(fā)熱、出疹性疾病[2]，多個(gè)國(guó)家的醫(yī)學(xué)工作者對(duì)KD進(jìn)行了大量的研究，但其病因、機(jī)制依然尚不明確。如未對(duì)KD作出及時(shí)的診斷和治療，可導(dǎo)致患兒出現(xiàn)缺血性心臟病、心肌梗死及猝死。其主要病理改變?yōu)槿矸翘禺愋匝苎?，病程早期為全身微血管炎，約2周后表現(xiàn)為主動(dòng)脈分支的動(dòng)脈內(nèi)膜炎和動(dòng)脈周?chē)?，尤其是冠狀?dòng)脈多易受累，部分病例在急性期形成動(dòng)脈瘤。這種血管炎的改變是心血管系統(tǒng)病例損傷的重要基礎(chǔ)。組織學(xué)研究表明，KD患者冠狀動(dòng)脈血管壁三層均遭到破壞且增生顯著，內(nèi)皮細(xì)胞裸露，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，電鏡下可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙增大、穿孔，血管呈透明變化，這些變化的主要機(jī)制是內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂[10]。目前認(rèn)為所有的發(fā)病機(jī)制最后可能歸結(jié)于冠狀動(dòng)脈及其他中等肌性血管的內(nèi)皮損害及彈力纖維損傷，導(dǎo)致血管炎的發(fā)生，血管壁的破壞，最終發(fā)生冠狀動(dòng)脈瘤及其他動(dòng)脈瘤。血管內(nèi)皮細(xì)胞在循環(huán)血液和血管平滑肌細(xì)胞之間起著機(jī)械屏障作用，也是人體最大且功能活躍的內(nèi)分泌器官，由于機(jī)械屏障作用，它很容易受到機(jī)體內(nèi)外各種理化因素的損傷，同時(shí)作為內(nèi)分泌器官，使受損后的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)分泌功能失調(diào)，導(dǎo)致正常的平衡被打破，從而導(dǎo)致心血管系統(tǒng)的功能障礙。目前對(duì)于KD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中血管內(nèi)皮損傷有關(guān)的分子事件做了許多研究，Terai等[11]首次利用免疫組織化學(xué)的方法在1例死于冠狀動(dòng)脈血栓的患兒心臟標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)了HLA-DR抗原，提示KD急性期冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞激活或受累，徐明國(guó)等[12]發(fā)現(xiàn)KD患兒循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞損傷，陳樹(shù)寶等[13]提出，在KD中存在血管衰竭現(xiàn)象，包括內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞功能的紊亂及結(jié)構(gòu)的改變，這提示KD患兒存在血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能紊亂。

外周血廣泛地參與了機(jī)體的免疫功能和炎癥反應(yīng)，KD急性期血清能真實(shí)、全面地反映KD患兒整體的血管炎癥及免疫的功能，而miRNA不編碼蛋白質(zhì)，通過(guò)與靶基因mRNA特異性相互作用降解或抑制靶基因的翻譯而發(fā)揮調(diào)控作用，可與靶mRNA3’UTR結(jié)合發(fā)生相互作用，抑制其翻譯或誘導(dǎo)其降解，從而調(diào)節(jié)靶基因[14]。近年來(lái)已確定miRNA在各個(gè)生理過(guò)程中發(fā)揮了重大作用，如在生物發(fā)育，脂肪代謝，細(xì)胞分化、增殖和凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[15]，Zhang等[16]和Cordes等[17]都認(rèn)為miRNAs在血管生成和病變及心血管疾病中發(fā)揮重要作用。Shimizu 等[5]首次報(bào)道m(xù)iRNA與KD的相關(guān)性之后，2014年Yun 等[6]認(rèn)為KD患兒血清中miR-200c和miR-371-3p表達(dá)是升高的，Rowley等[7]研究了KD患兒冠狀動(dòng)脈中表達(dá)的miRNA，Ni等[8]指出急性期miR-155/SOCS1信號(hào)通路的激活和miR-31的過(guò)表達(dá)可能導(dǎo)致了Tregs下降，從而參與KD的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，提示循環(huán)中的miRNAs可以影響細(xì)胞內(nèi)的mRNA，參與內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)節(jié)，從而參與KD的發(fā)生發(fā)展。我們采用Exiqon miRCURY LNA芯片篩選出KD急性期血清中特異性表達(dá)miR-23a。miR-23a屬于miR-23a/27a/24基因簇，該 基因簇?fù)碛歇?dú)立的啟動(dòng)子，能夠表達(dá)3種成熟miRNA： miR-23a、miR-27a、miR-24。該基因簇在許多疾病中表達(dá)異常，能夠調(diào)控細(xì)胞的周期、增殖、分化，血細(xì)胞生成和心臟肥大等生命過(guò)程[9]。對(duì)死于冠脈瘤的KD患兒進(jìn)行病理檢查發(fā)現(xiàn)，從外膜、血管周?chē)M織逐漸至官腔，呈現(xiàn)成纖維細(xì)胞的增殖及不同程度的炎癥。

在HUVECs的基礎(chǔ)上，研究miR-23a對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞基本生物學(xué)功能及分泌功能的影響，并初步探究其機(jī)制，分別包括用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖功能、細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移功能等，我們發(fā)現(xiàn)miR-23a可以促進(jìn)細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移。Hashimoto等[18]研究發(fā)現(xiàn)，與正常血清組和感染發(fā)熱組血清相比，KD血清可以促進(jìn)HUVECs的細(xì)胞增殖，認(rèn)為KD血清促進(jìn)HUVECs細(xì)胞增殖的作用和血清中的某些成分相關(guān)，這與miR-23a mimic促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖相一致。本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞劃痕試驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-23a mimic后內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力，發(fā)現(xiàn)miR-23a具有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移的作用，推測(cè)miR-23a可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子從而發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞遷移和游走的作用。miRNA通過(guò)與靶基因mRNA特異性相互作用降解或抑制靶基因的翻譯而發(fā)揮調(diào)控作用。因此，尚需進(jìn)一步進(jìn)行miRNA靶基因的識(shí)別和功能研究。

本研究從miRNA的角度出發(fā)研究了KD血清中特異相關(guān)miR-23a，發(fā)現(xiàn)其可以影響內(nèi)皮細(xì)胞的基本生物學(xué)功能，造成內(nèi)皮細(xì)胞功能的紊亂，并影響血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能，從而參與KD發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。如果能對(duì)miR-23a的作用機(jī)制有更進(jìn)一步的了解，將能更好地闡釋KD的發(fā)病機(jī)制，對(duì)其早期診斷及防治提供更好的方向。

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（本文編輯：吳彬）

MicroRNA-23a regulate the growth and migration of HUVECs in Kawasaki disease

CHU Maoping1,HU Chen2,ZHOU Aihua2,WANG Huiying2,PAN Lulu3,QIU Huixian3,WU Rongzhou3,ZHAO Xianxian1.
1.Department of Cardiology,the Affiliated Changhai Hospital of Second Military University,Shanghai,200433; 2.Department of Children’s Center,the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,Wenzhou,325015; 3.Children’s Heart Center,the Second Affiliated Hospital & Yuying Children’s Hospital,Institute of Cardiovascular Development & Translational Medicine,Wenzhou Medical University,Wenzhou,325027

Objective:To study the effect of miR-23a that on the growth and migration of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in Kawasaki disease.Methods: Real-time PCR was used to confirme miR-23a that differential expression between Kawasaki disease and controls.Bioinformatics analysis and the gene chip of inflammatory cytokine were used to target the genes.Transfect the miR-23a mimic/inhibitor in HUVECs.CCK-8 assay was used to measure the effect of proliferation.Cell scratch method and transwell chamber were performed to investigate the effect of migration.Results:MiR-23a was significantly higher in Kawasaki disease.The miR-23a mimic could promote the proliferation and migrate of HUVECs,the mi-23a inhibitor could inhibit the proliferation and migrate (P＜0.05).Conclusion:The miR-23a play an important role in the development and progression of KD and could effect the proliferation and migrate of HUVECs.

kawasaki disease; microRNA-23a; human umbilical vein endothelial cells; proliferation

R725.4

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2015.05.002

2015-02-23

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（LY12H02003）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012ZDA035）。

褚茂平（1969-），男，浙江溫州人，主任醫(yī)師，博士。

趙仙先，主任醫(yī)師，教授，Email：13601713431@163.com。